CNS 14885-2005 Method of test for Chloramphenicol Thiamphenicol and Florfenicol in feeds《饲料中氯霉素、甲磺氯霉素及氟甲磺氯霉素之检验方法》.pdf

1、 1 印行年月 94 年 10 月 本標準非經本局同意不得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 類號 ICS 65.120 N419514885經濟部標準檢驗局印行 公布日期 修訂公布日期 94 年 1 月 10 日 年月日 (共 2 頁 )飼料中氯黴素、甲磺氯黴素及氟甲磺氯黴素之檢驗方法 Method of test for Chloramphenicol, Thiamphenicol and Florfenicol in feeds 1. 適用範圍：本標準規定飼料中氯黴素 (Chloramphenicol)、甲磺氯黴素 (Thiamphenicol)及氟甲磺氯黴素 ( Florfenico

2、l)之檢驗方法。 2. 原理：飼料中氯黴素、甲磺氯黴素及氟甲磺氯黴素以乙腈萃取後經 C18過濾層析匣純化後，用高效液相層析法 (high performance liquid chromatography, HPLC)測定。 3. 設備 3.1 裝置 3.1.1 高效液相層析儀 3.1.1.1 檢測器：具有 220 nm 波長之紫外光檢測器。 3.1.1.2 層析管： Cosmosil 5C18-MS，內徑 4.6150 mm 或同級品。 3.1.2 振盪器 (Shaker) 3.1.3 減壓濃縮裝置 (Rotary evaporator) 3.1.4 離心機 (Centrifuge) 3.1

3、.5 真空固相萃取裝置 (Solid phase extraction vacuum manifold)及 C18過濾層析匣 3.2 器具及材料 3.2.1 離心瓶： 50 mL。 3.2.2 濃縮瓶： 250 mL。 3.2.3 C18過濾層析匣： 500 mg。 3.2.4 濾膜：孔徑 0.45 m， polyvinylidene difluoride 材質。 4. 試藥：正己烷 (n-hexane) 、甲醇 (methanol) 、乙腈 (acetonitrile) 及四氫呋喃(tetrahydrofuran)採用液相層析級，醋酸銨 (ammonium acetate)採用試藥級，氯黴素

4、、甲磺氯黴素及氟甲磺氯黴素對照用標準品， 85 %磷酸（ ortho-phosphoric acid 85 %）採用試藥級。 5. 溶液之製備 5.1 移動相溶液之製備 5.1.1 pH2 磷酸緩衝溶液： 1 L 的去離子蒸餾水以 85 %磷酸調至 pH2。 5.1.2 0.05 M 醋酸銨、乙腈及四氫呋喃 (76:23:1, pH7.2)以濾膜過濾，取濾液作為飼料檢體分析之移動相溶液。 5.2 標準溶液之製備 秤取 100 mg 之氯黴素、甲磺氯黴素及氟甲磺氯黴素對照用標準品，精確稱定，以去離子水溶解並定容至 100 mL，作為標準原液，臨用時再以去離子水稀釋成 0.1 1 g/mL，供作標

5、準溶液。 2 CNS 14885, N 4195 5.3.1 萃取：取 3.0 g 飼料於 50 mL 離心管中，精確秤定。加入 8 mL 乙腈，振盪10 分鐘，以 3500 rpm 離心 10 分鐘，將上層液倒入 125 mL 濃縮瓶中。殘留物再以 5 mL 乙腈沖洗，用濾紙過濾，濾液則併入前述上層液。於 60 減壓濃縮至乾，再以 4 mL 去離子水溶洗濃縮瓶 2 次，供作淨化用。 5.3.2 淨化： C18過濾層析匣先以 10 mL 甲醇，再以 10 mL 去離子水潤洗，並調整真空固相萃取裝置流速至每秒一滴 (每滴體積約 0.04 mL)，棄流出液。取第 5.3.1 節水溶液注入管柱中，以

6、 4 mL 去離子水， 3 mL 正己烷依序進行清洗，棄洗液。再以 3 mL 乙腈沖提，收集隨後之 3 mL 沖提液。置於 60 水浴器以氮氣吹乾。殘留物以移動相定容至 0.5 mL，經 0.45 m 濾膜過濾後，取 50 L 注入高效液相層析儀中。 6. 回收率測定：取 10 ppm 之氯黴素、甲磺氯黴素及氟甲磺氯黴素加入 3.0 g 空白飼料各 300、 600、 750、 1050 L 以構成 1、 2、 2.5 及 3.5 ppm 四種濃度，依序進行第5.3.1 節及第 5.3.2 節之步驟，扣除該飼料原有背景值，比對標準曲線計算飼料加藥回收率。 7. 鑑別試驗及含量測定：精確量取 1

7、0 L 之檢液及標準溶液，分別注入高效液相層析儀，參照下列條件進行液相層析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間比較鑑別之，並另取以標準曲線求出檢體中氯黴素、甲磺氯黴素及氟甲磺氯黴素之含量(ppm)。 7.1 高效液相層析儀分析參考條件 層析管： Cosmosil 5C18-MS，內徑 4.6250 mm 或同級品。 紫外光偵測器：波長 220 nm。 流速： 1.0 mL/min。 7.2 計算 依下列計算式求出飼料樣品中各動物用藥之含量 (ppm)。 檢體中各動物用藥之含量 (ppm)（ CV） M稀釋倍數回收率 C：由標準曲線求得檢液中各動物用藥之濃度 (g /mL) V：飼料樣品經淨化後定容之體積（ mL） M：取樣分析檢體之重量 (g) 備考：本檢驗方法之最低檢出限量為 1 ppm。