CNS 14886-2005 Method of test for Norfloxacin Danofloxacin Enrofloxacin and Ofloxacin in feeds《饲料中诺氟喹啉羧酸、大安氟喹啉羧酸、恩氟喹啉羧酸及欧氟喹啉羧酸之检验方法》.pdf

1、 1 印行年月 94 年 10 月 本標準非經本局同意不得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 類號 ICS 65.120 N419614886經濟部標準檢驗局印行 公布日期 修訂公布日期 94 年 1 月 10 日 年月日 (共 2 頁 )飼料中諾氟 喹啉 羧酸、大安氟 喹啉 羧酸、恩氟 喹啉 羧酸及歐氟 喹啉 羧酸之檢驗方法 Method of test for Norfloxacin, Danofloxacin, Enrofloxacin and Ofloxacin in feeds 1. 適用範圍：本標準規定飼料中諾氟喹啉羧酸 (Norfloxacin)、大安氟喹啉羧酸(Danoflo

2、xacin)、恩氟喹啉羧酸 (Enrofloxacin)及歐氟喹啉羧酸 (Ofloxacin)之檢驗方法。 2. 原理：飼料中諾氟喹啉羧酸、大安氟喹啉羧酸、恩氟喹啉羧酸及歐氟喹啉羧酸以1N 鹽酸（ HCl）萃取後經 C18過濾層析匣純化後，以 4 mL 之磷酸二氫鉀及甲醇（ 1：3 ）沖提及氮氣吹乾，溶出後再 用高效液相層析法 (high performance liquid chromatography, HPLC)測定。 3. 裝置 3.1 高效液相層析儀 3.1.1 檢測器：具有激發波長（ Ex） 295 nm，放射波長（ Em） 446 nm 之螢光檢測器。 3.1.2 層析管： RX

3、-C8， 5m 或同級品。 3.2 離心機 (Centrifuge) 3.3 振盪器 (Shaker) 3.4 真空固相萃取裝置 (Solid phase extraction vacuum manifold)及 C18過濾層析匣 4. 試藥：甲醇 (methanol)、乙腈 (acetonitrile)及三乙基胺（ triethylamine, TEA）採用液相層析級， 85 磷酸（ ortho-phosphoric acid 85%）、鹽酸 (HCl)及氫氧化鈉 (NaOH)採用試藥級、諾氟喹啉羧酸、大安氟喹啉羧酸、恩氟喹啉羧酸及歐氟喹啉羧酸對照標準品。 5. 溶液之製備 5.1 標準溶液

4、之製備：精確秤取恩氟喹啉羧酸、大安氟喹啉羧酸、諾氟喹啉羧酸及歐氟喹啉羧酸標準品於定量瓶中，先以少量 0.1 N 氫氧化鈉溶解後，再以乙腈定容配製成 1,000 g/mL。 5.2 試劑製備 5.2.1 磷酸二氫鉀溶液（ 10 mM, pH2.5）：取 1.36 g 磷酸二氫鉀，加入 1000 mL定容瓶中，加去離子水定容至 1000 mL。 5.2.2 1N 鹽酸：取 83.3 mL 鹽酸於已經含有 5 10 mL 去離子水之 1000 mL 定容瓶中，加去離子水定容至 1000 mL。 6. 檢液之製備 6.1 萃取：將飼料以均質機均質成粉狀，秤取 5.0 g 樣品置於 50 mL 離心管中

5、，加入 20 mL 1N 鹽酸，振盪 10 分鐘，以 3000 rpm 離心 5 分鐘，萃取二次，合併上清液，再以 20,000 rpm、 4 ，離心 10 分鐘，取上層液供淨化之用。 6.2 淨化： C18過濾層析匣先以 10 mL 甲醇洗淨，再以 10 mL 去離子水潤洗之後， 2 CNS 14886, N 4196 調整真空固相萃取裝置流速至每秒一滴（每滴體積約 0.05 mL），再 取 8 mL 樣品萃取液注入 C18過濾層析匣，棄流出液。再以 10 mL 去離子水沖洗，然後以5 mL 之磷酸二氫鉀溶液（ 10 mM, pH2.5）及甲醇（ 1： 3）沖提。沖提液於 45 水浴中以氮氣

6、吹乾並以移動相溶液定容至 1 mL，供作檢液。 7. 回收率測定：取 10 ppm 之諾氟喹啉羧酸、大安氟喹啉羧酸、恩氟喹啉羧酸及歐氟喹啉羧酸加入 5.0 g 空白飼料 50 L 以構成 0.1 ppm；另以 100 ppm 之諾氟喹啉羧酸、大安氟喹啉羧酸、恩氟喹啉羧酸及歐氟喹啉羧酸加入 5.0 g 空白飼料各 50、 100及 500 L 以構成 1.0、 2.0 及 10.0 ppm 三種濃度，依序進行第 6.1 節及第 6.2 節之步驟，扣除該飼料原有背景值，比對標準曲線計算飼料加藥回收率。 8. 鑑別試驗及含量測定：精確量取 2 L 之檢液及標準溶液，分別注入高效液相層析儀。 8.1

7、高效液相層析儀分析參考條件 層析管： RX-C8， 5 m 或同級品。 螢光偵測器：激發波長 295 nm，放射波長 446 nm。 流速： 0.8 mL/min。 移動相：甲醇、乙腈及含 0.1 %TEA 與 0.1 %磷酸之 0.05 M 磷酸二氫鉀溶液（ 20:10:70, v/v/v)。 8.2 計算 依下列計算式求出飼料樣品中各動物用藥之含量 (ppm)。 檢體中各動物用藥之含量 (ppm) CVM稀釋倍數回收率 C：由標準曲線求得檢液中各動物用藥之濃度 (g/mL) V：飼料樣品經淨化後定容之體積（ mL） M：取樣分析檢體之重量 (g) 9. 標準曲線之製作：將諾氟喹啉羧酸、大安氟喹啉羧酸、恩氟喹啉羧酸及歐氟喹啉羧酸之標準品使濃度為 1.0 g/mL、 2.0 g/mL、 5.0 g/mL、 10.0 g/mL 及 20.0 g/mL，取 2 L 注入高效液相層析儀，所得面積，製出標準曲線。 備考：本檢驗方法之最低檢出限量為 2 ppm。