CNS 6609-2008 Method of test for meat and meat products - Determination of L-(＋)-glutamic acid content《肉及肉制品检验法－L－麸胺酸含量之测定》.pdf

1、1 印月973月 本標準非經本局同意得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 號 ICS 67.120.10 N6148 6609經濟部標準檢驗局印 公布日期 修訂公布日期 6910月29日 973月28日 (共4頁)肉及肉製品檢驗法L-麩胺酸含量之測定Method of test for meat and meat products Determination of L- (+)- glutamic acid content 1. 適用範圍：本標準規定於肉及肉製品中麩胺酸之定量方法。 2. 原理：以冰冷之過氯酸溶液將存於試樣中之麩胺酸萃取、離心、傾倒及過濾後，調整pH，再依下列反應，將濾液內之

2、麩胺酸轉換(transformation)。 glutamate dehydrogenase L- (+) glutamate +NAD+H2O - cetoglutamate + NADH+NH3+H+diaphorase NADH + iodonitrotetrazolium Chloride+H+NAD+ formazane 然後再以光度計測定所形成甲臢(formazane)之量。 3. 檢驗方法 3.1 試藥：須使用分析試藥級，除無機化合物外，所有之溶液均需以業經徹底清洗及蒸煮或滅菌之棕色玻璃瓶貯放。所使用之水應經兩次蒸餾或經去除礦物質之後，再經蒸餾處理者，最後蒸餾過程應用玻璃器皿。

3、3.1.1 1.0 M過氯酸溶液：量取8.6 mL之70%(w/w，201.67 g/mL)過氯酸，以水稀釋至100 mL。 3.1.2 2M氫氧化鉀溶液：稱取56.1 g氫氧化鉀，先溶於水，再稀釋至500 mL。 3.1.3 三乙醇胺磷酸(triethanolamine- phosphate)緩衝溶液，pH8.5。 3.1.3.1 稱取1.86 g氫氯酸三乙醇胺(triethanolamine hydrochloride)溶於水，並以2M氫氧化鉀溶液調整pH至8.6，再加入0.68 g辛酚一癸乙二醇次乙醚(octylphenol- decaethyleneglycolether)，並以水稀釋

4、至100 mL。 3.1.3.2 稱取0.86 g磷酸一氫鉀(K2HPO4)及0.007 g磷酸二氫鉀(KH2PO4)溶於水再稀釋至100 mL。 3.1.3.3 取3.1.3.1節溶液20 mL與3.1.3.2節溶液5 mL混合後，存放於4下。 3.1.4 NAD溶液(nicotinamide adenine dinucleotide solution)：稱取0.025 g NAD置於有瓶塞之小三角瓶內，加入5.0 mL水(此溶液於4下至少可貯放4週)。 3.1.5 INT氯化物Iodonitrotetrazolium chloride；2-(p-iodophenyl)-3-(p-nitro

5、phenyl) -5- phenyltetrazolium chloride 溶液：稱取0.030 g INT氯化物置於有瓶塞之棕色三角瓶內，再加入50 mL水。此溶液於4之陰暗處保存，至少可貯放2個月。 2 CNS 6609, N 6148 3.1.6 黃遞酶(diaphorase)溶液：稱取0.003 g冷凍乾燥之黃遞酶(lyophilized diaphorase)溶於1 mL水中。(此溶液於4下至少可保存3週)。 3.1.7 麩胺酸去氫酶(glutamate dehydrogenase；GIDH)：10 mg/mL溶液，應不得含有硫酸銨(NH4)2SO4、乙二胺四醋酸(E D T A.

6、)及麩醯胺酶(glutaminase)(此溶液於4下至少可保存12個月)。 3.1.8 麩胺酸(L)之標準溶液：稱取0.0500 g麩胺酸(L)溶於25 mL水中，以2M氫氧化鉀溶液調整pH至7.0然後再稀釋至50 mL，將此溶液於4 下貯放，於使用當時再以1+49比例稀釋之。 3.2 儀器 3.2.1 碎肉機：實驗室規格，絞肉盤孔徑不得大於4 mm。 3.2.2 混合器(mixer)。 3.2.3 離心機：具50 mL或100 mL離心管。 3.2.4 凹槽濾紙：直徑15 cm。 3.2.5 定量瓶：100 mL及250 mL。 3.2.6 定量吸管：100 mL、50 mL及25 mL。

7、3.2.7 小塑膠刮勺：彎曲度約90。 3.2.8 光電比色計：在492 nm有最大之透光度(%T)者或光譜儀(spectrophotometer；A)。 3.2.9 石英管(photometric cell)：光徑長度10 mm者。 3.3 抽樣及試驗室取樣(貯存樣品應預防其變質及成分改變)。 3.3.1 依CNS 6257肉及肉製品檢驗法取樣之一般規定抽取樣品。 3.3.2 試驗室由所抽取樣品中取出代表性試驗試樣200 g。 3.4 步驟 3.4.1 試樣製備：樣品以碎肉機至少細碎兩次後混勻，將其完全裝滿於不透氣之密閉容器內，在能預防其變質及成分變化之條件下貯放，於24小時內儘速分析。 3

8、.4.2 檢驗部分：稱取約50 g之製備試樣，精稱至0.01 g，將之置入混合器內。 3.4.3 萃取物之製備 3.4.3.1 加入100 mL冰冷之1.0 M過氯酸溶液於混合器內，並加以均質。 3.4.3.2 將均質物移入離心管內，以3000 rpm離心10分鐘，小心地去掉旁邊之油脂後，將上浮液經由濾紙濾入200 mL錐形瓶內，並將最初的10 mL濾液傾掉不用。 3.4.3.3 吸取50 mL濾液注於100 mL燒杯內，並以2.0 M氫氧化鉀溶液調整pH至10。 3.4.3.4 將燒杯之內容物全部注入100 mL定容瓶內，以水稀釋至100 mL並混勻之。 3.4.3.5 將溶液於冰水中冷卻1

9、0分鐘，再由濾紙過濾之，並將最初的10 mL濾液傾掉不用。 3 CNS 6609, N 6148 3.4.3.6 吸取25 mL或適量容積(V mL)的濾液(即萃取液)於250 mL定容瓶內，並以水稀釋至250 mL。 備考： 萃取液之適量吸取容積(V mL)係指經稀釋後之萃取液內，麩胺酸(L)之濃度以不超過30 mg/L為準。 3.5 測定 3.5.1將第3.1.3節及第3.4.3.6節之溶液溫度調整至2025，於兩支石英管內各加入2.50 mL緩衝溶液(第3.1.3節)，0.20 mL NAD溶液(第3.1.4節)，0.20 mL INT溶液(第3.1.5節)和0.05 mL黃遞酶溶液(第

10、3.1.6節)。再吸取0.50 mL萃取液(第3.4.3.6節)注入第一支石英管內，此為檢驗溶液。於另一支石英管內加入0.50 mL水，做為空白溶液。經以塑膠刮勺將之攪勻後，分別測定檢驗溶液及空白溶液在492 nm之吸收度，但溶液之溫度應保持於2025。檢驗溶液之吸收度為A1，空白溶液之吸收度為A1B。 3.5.2吸取0.05 mL GIDH溶液(第3.1.7節)於塑膠勺上，將此勺於第一支石英管內上下搖動，使GIDH溶液與管內內容物混勻，另一支石英管亦以同法操作。在靜置1015 min後，以492 nm測定每一支石英管之吸收度，然後每隔2分鐘測定一次，直至吸光度等量增加為止。由吸收度線開始呈直

11、線之起點順延，外推至開始反應時之吸收度。檢驗溶液之吸收度為A2，空白溶液之吸收度為A2B。 3.5.3反覆第3.5.1節及第3.5.2節之操作，但第一支石英管之萃取液5.0 mL以0.5 mL麩胺酸(L)標準溶液取代，測定甲臢(formazane)之微克分子吸收率(micromolar absorptivity)。 依第3.5.1節操作之吸收度所代表為： A1標準溶液之吸光度。 A1B空白溶液之吸光度。 依第3.5.2節操作時，其推演吸光度所代表為 A2標準溶液之吸光度。 A2B空白溶液之吸光度。 3.6 同一試樣應取兩獨立檢體定量兩次。 4. 結果表示法 4.1 計算方法及公式：以下列公式計

12、算試樣中麩胺酸(L)含量，以重量百分率表示之。 麩胺酸含量(%)Am10050100mM100V100100025010005.0K1.1475.3 100mM100mVKA485.51 式中，A：(A2A1)(A2BA1B) 147.1：麩胺酸(L)之分子量。 K：甲臢之微克分子吸收係數(cm2/mole)。 由下列公式計算而得。 4 CNS 6609, N 6148 KA(3.5/0.5)(50/1000)147.151.485A 而A (A2A1)(A2BA1B) V：3.4.3.6節所吸取之萃取液之容積(mL)。 M：3.4.2節所取供檢試樣之重量(g)。 備考： 計算兩測定值之算數平

13、均值，結果記錄至0. 1 g/kg。 4.2 重複性(repeatability)：同時測驗同一試驗，由同一分析者使用相同方法及相同設備分析測定時之兩檢驗值間差異，不得超過其算數平均值之10%。 5. 檢驗報告：應載明檢驗方法及結果，本標準規定以外之操作情況，對結果有影響之環境，以及其它用來說明樣品之事項。 引用標準：CNS 6257肉及肉製品檢驗法取樣之一般規定 相對應國際標準：ISO 4134：1999(E) Meat and meat products Determination of L-(+)-glutamic acid content Reference method 中華民國國家

14、標準 National Standards of the Republic of China, CNS 標準（standard）係指由特定機構針對產品、過程及服務等主題，經由共識，並經公認機關（構）審定，提供一般且重複使用之規則、指導綱要或特性之文件。中華民國國家標準（National Standards of the Republic of China，代號 CNS），係基於保護國民生命財產安全，維護自然環境衛生，維持自由公平交易以促進國內產業發展等需要，由標準專責機構(現為經濟部標準檢驗局)經透明化程序獲致共識所公布，提供國內相關產業、機關(構)及一般消費大眾參考依循；主要目的在謀求改善產

15、品、程序及服務之品質，增進生產效率，維持生產及消費之合理化，以增進公共福祉。 國家標準化網站 國家標準檢索系統（http:/.tw） 標準化資訊推廣平台（http:/standards.bsmi.gov.tw） 產業技術標準管理服務平台（http:/techstandards.bsmi.gov.tw） 全國標準化獎（http:/www.std.org.tw） 更多標準網站資訊，可於前述網站中取得聯結。 正字標記 CNS MARK 正字標記驗證制度係為推行中華民國國家標準，自民國40年起實施的產品驗證制度，是依據標準法及正字標記管理規則之規定，為落實國家標準的實施而辦理的產品驗證標記。藉由正字標

16、記之核發，可彰顯產品品質符合國家標準，且其生產製造工廠採用之品質管理系統，亦符合相關規定。生產廠商藉正字標記之信譽，可爭取顧客信賴以拓展市場，消費者亦可經由辨識正字標記圖示，簡易地購得合宜的優良產品，權益因此獲得保障。 正字標記圖示 由中華民國國家標準之英文代號CNS及中文符號組成。 正字標記核准要件 工廠品質管理經評鑑取得標準檢驗局指定品管制度之認可登錄。 產品經檢驗符合國家標準。 正字標記網站 正字標記推廣網站（http:/smark.org.tw） 正字標記查詢系統（http:/cnsmark.bsmi.gov.tw） 相關資訊 Information 發編輯：經濟部標準檢驗局 Publisher ： The Bureau of Standards, Metrology and Inspection 局 址：臺市濟南 1 段 4 號 Address ： 4 Chinan Road, Section 1 Taipei, 100, Taiwan 電 話： (02) 2343-1700 Telephone： (886-2) 2343-1700 網 址： http:/www.bsmi.gov.tw Web site ： http:/www.bsmi.gov.tw