CNS 9316-2004 Method of test for Oxytetracycline Chlortetracycline and Tetracycline in feeds《饲料中羟四环素、氯四环素及四环素检验方法》.pdf

1、 1 印行年月 94 年 10 月 本標準非經本局同意不得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 類號 ICS 65.120 N41019316經濟部標準檢驗局印行 公布日期 修訂公布日期 71 年 8 月 19 日 93 年 10 月 20 日 (共 2 頁 )飼料中羥四環素、氯四環素及四環素檢驗方法 Method of test for Oxytetracycline、 Chlortetracycline and Tetracycline in feeds 1. 適用範圍：本標準規定飼料中羥四環素（ Oxytetracycline； OTC）、氯四環素（ Chlortetracycline；

2、 CTC）及四環素（ Tetracycline； TC）之檢驗方法。 2. 原理：飼料 中羥四環素、氯四環素及四環素以酸性甲醇二次萃取後，用高效液相層析儀測定。 3. 器具及材料 3.1 高效液相層析儀附波長 365 nm 之紫外線檢測器。 3.2 層析管柱： Nova-Pak C8，顆粒大小 5 m，內徑 3.9 mm，長 15 cm 或同級品。 3.3 離心管振盪器（ Shaker） 3.4 褐色定量瓶： 25 mL 3.5 離心機 (Centrifuge)：轉速可至 4,000 rpm 者。 3.6 離心管（ Centrifuge tube）：玻璃或塑膠製品，容量為 50 mL。 3.7

3、 酸鹼值測定儀（ pH meter） 3.8 濾膜：孔徑 0.22 m， Nylon 材質。 3.9 C18卡匣： Sep-PakWaters 製或同級品，依序以 5 mL 甲醇、 5 mL 蒸餾水及 5 mL飽和 Na2EDTA 洗淨處理。 3.10 草酸（ Oxalic acid）、 Na2EDTA、濃鹽酸：試藥級。 3.11 乙腈（ Acetonitrile； CH3CN）、甲醇（ Methanol； CH3OH）：液相層析級 (LC級 )。 3.12 萃取液：甲醇： 0.15N HCl 溶液 25： 75 (v/v) 3.13 羥四環素、氯四環素及四環素標準品：儲存在陰暗低溫處。 4.

4、 標準溶液之製備：正確秤取適量 OTC、 CTC 及 TC 標準品，分別置於 25 mL 褐色定量瓶中，以甲醇溶解，定量至 25 mL 為標準原液，此標準原液濃度為 1000 g/mL。儲存於 510冰箱內，一星期內可使用，逾期則捨棄重新製備。以蒸餾水將標準原液稀釋，使其濃度為 0.5、 1、 2 及 4 g/mL 之 OTC、 CTC、 TC，各以孔徑 0.22 m微孔濾膜過濾，作為標準品溶液。 5. 檢液之製備 5.1 精確秤取飼料樣品 5.0 g（如為粒狀飼料則先磨碎，經 20 mesh 篩網過篩），置於 50 mL 離心管中。 5.2 加萃取液 25 mL，振盪 10 分鐘，再以 3,

5、000 rpm 離心 15 分鐘後，收集上清液。 5.3 再加萃取液 15 mL 於沉澱物，振盪 10 分鐘，再以 3,000 rpm 離心 15 分鐘後， 2 CNS 9316, N 4101 合併上清液。 5.4 取 2 mL 上清液通過已洗淨處理之 Sep-pakC18卡匣後，以水 1mL 洗淨二次，再以甲醇 2mL 沖提，沖提液經 0.22 m 濾膜過濾後作為檢液。 6. 鑑別試驗及含量分析 6.1 分別取各標準品溶液及供試樣品溶液各 20 L，注入液相層析儀測定之，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間比較鑑別之。記錄層析圖譜，測量各成分波峰面積。 6.2 分析參考條件 檢測器波長： 365 nm 溫度： 35 流速： 0.9 mL/min 移動相：甲醇：乙腈： 0.01M 草酸 11： 13： 76 7. 計算：檢量線法 每 g 飼料樣品含羥四環素、氯四環素及四環素之 g 數值濃度 8 / 回收率 濃度：線性回歸所得樣品濃度 （波峰面積截距） / 斜率 波峰面積：樣品測量後之面積。 備考：本檢驗方法之最低檢出限量，飼料中 OTC、 TC 及 CTC 均為 5ng。 修訂日期：第一次修訂： 91 年 10 月 30 日