DIN 58906-1-2000 Haemostaseology - Determination of fibrinogen concentration - Part 1 Reference measurement procedure for the determination of clottable fibrinogen as described by .pdf

1、h DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise,nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin, gestattet.Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 Berlinh No part of this standard may be reproduced without the prior perm

2、ission of DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin.Beuth Verlag GmbH, Berlin, has the exclusive right of sale for German Standards (DIN-Normen).Ref. Nr. DIN 58906-1 : 2000-03Preisgr. 07 Vertr.-Nr. 0007Mrz 2000DEUTSCHE NORMHmostaseologieBestimmung der FibrinogenkonzentrationTeil 1: Referenzmeve

3、rfahren fr die Bestimmungdes gerinnbaren Fibrinogens nach Clauss58906-1Normenausschu Medizin (NAMed) im DIN Deutsches Institut fr Normung e.V.Ersatz fr Ausgabe 1994-06Supersedes June 1994 editionICS 11.100Haemostaseology Determination of fibrinogen concentration Part 1: Reference measurement procedu

4、re for the determination ofclottable fibrinogen as described by ClaussHmostasiologie Dosage du fibrinogne Partie 1: Mode opratoire de mesure de rfrence pour le dosagedu fibrinogne coagulable sur le plasma prpar partir du sangveineux citrat (mthode de Clauss)VorwortDiese Norm wurde vom Arbeitsausschu

5、 C 5 Hmo-staseologie“ des Normenausschusses Medizin (NAMed)im DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. in Zusammen-arbeit mit der Gesellschaft fr Thrombose- und Hmo-staseforschung e.V. erarbeitet.DIN 58906 Bestimmung der Fibrinogenkonzentration“besteht aus: Teil 1: Referenzmeverfahren fr die Bestimmun

6、g desgerinnbaren Fibrinogens nach ClaussEs ist beabsichtigt, darber hinaus die folgenden Teileherauszugeben: Referenzmeverfahren zur kinetischen Bestimmungder Konzentration des gerinnbaren Fibrinogens; Referenzmeverfahren zur Bestimmung der Konzen-tration des gerinnbaren Fibrinogens ber Thrombo-plas

7、tine; Referenzmeverfahren zur immunchemischen Be-stimmung.nderungenGegenberderAusgabeJuni1994wurdenfolgendenderungen vorgenommen: Die Aufbewahrungszeit des Blutes wurde nachDIN 58905-1 festgelegt. Die Norm wurde redaktionell berarbeitet.Frhere AusgabeDIN 58906-1: 1994-06Fortsetzung Seite 2 bis 5In c

8、ase of doubt, the German-language version should beconsulted as the authoritative text.ForewordThis standard has been prepared by the Technical Com-mittee C 5 “Hmostaseologie” of the NormenausschuMedizin (Medicine Standards Committee) of DINDeutsches Institut fr Normung e.V. in cooperation withthe G

9、esellschaft fr Thrombose- und Hmostase-forschung e.V.DIN 58906 “Reference measurement procedure for thedetermination of clottable fibrinogen as described byClauss” consists of: Part 1: Reference measurement procedure for thedetermination of clottable fibrinogen as described byClaussIt is intended to

10、 additionally publish the following parts: Reference measurement procedure for the kineticdetermination of the concentration of clottable fibrino-gen; Reference measurement procedure for the determina-tion of clottable fibrinogen using thromboplastins; Reference measurement procedure for the immuno-

11、chemical determinationAmendmentsThe following amendments have been made to theJune 1994 edition: Storage time of blood as specified in DIN 58905-1. The standard has been editorially revised.Previous editionDIN 58906-1: 1994-06Continued on pages 2 to 5B55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CC9B7EF8DD9Nor

12、mCD - Stand 2007-03 Seite 2DIN 58906-1: 2000-031 AnwendungsbereichDiese Norm gilt fr die quantitative Bestimmung desgerinnbaren Fibrinogens nach Clauss 1 in aus Venen-blut gewonnenem Citratplasma.Die Bestimmung ist indiziert beia) angeborener Afibrinogen-, Hypofibrinogen- oder Dys-fibrinogenmie;b) e

13、rworbener Verminderung der Fibrinogenkonzentra-tion infolge einer Synthesestrung oder Verbrauchs-reaktion (z. B. thrombolytische Therapie oder Ver-brauchskoagulopathie);c) erworbener Erhhung der Fibrinogenkonzentrationinfolge einer Akute-Phase-Reaktion (z. B. Infektion).2 Normative VerweisungenDiese

14、 Norm enthlt durch datierte oder undatierte Verwei-sungen Festlegungen aus anderen Publikationen. Diesenormativen Verweisungen sind an den jeweiligen Stellenim Text zitiert, und die Publikationen sind nachstehendaufgefhrt. Bei datierten Verweisungen gehren spterenderungen oder berarbeitungen dieser

15、PublikationennurzudieserNorm,fallssiedurchnderungoderberar-beitung eingearbeitet sind. Bei undatierten Verweisungengilt die letzte Ausgabe der in Bezug genommenen Publi-kation.DIN 12650-2Mechanische, physikalische und elektrische Laborge-rte Volumenmegerte mit Hubkolben Kolben-hubpipettenDIN 58905-1

16、Hmostaseologie Blutentnahme Teil 1: Gewin-nung von vensem Citratplasma fr hmostaseologi-sche AnalysenDIN 58911-1Hmostaseologie Kalibrierung von Meverfahren Teil 1: Gerinnungszeit-MeverfahrenDIN 58939-1Hmostaseologie Referenzplasma Teil 1: Anfor-derungen, HerstellungDIN 58970-2Laborzentrifugen Zentri

17、fugenrhrchen fr RZB bis40003BegrifeFr die Anwendung dieser Norm gelten die folgendenBegriffe:3.1 Gerinnbares FibrinogenDer Fibrinogenanteil, der unter Einflu von Thrombin einGerinnsel bildet.3.2 Thrombin (EC 3.4.21.5)1)Ein proteolytisches Enzym, das durch partielle Proteolyseaus dem Proenzym Prothro

18、mbin entsteht.ANMERKUNG 1: Die Aktivitt von Thrombin wird im allge-meinen in Internationalen Einheiten je ml (I.E./ml)angegeben.ANMERKUNG 2: Eine Internationale Einheit ist defi-nitionsgem die Aktivitt von Thrombin, die in0,085 3 mg des Internationalen Standards der WHOfr humanes Thrombin enthalten

19、ist 2. Sie ist ver-gleichbar mit einer NlH-Einheit2)3.1)Bezeichnung nach IUPAC (International Union of Pureand Applied Chemistry)2)NIH: National Institute of Health.1ScopeThis standard is applicable to the quantitative determina-tion of the clottable fibrinogen, as described in the methodby Clauss 1

20、, in plasma obtained from citrated venousblood.The determination is indicated for detection ofa) hereditary afibrinogen-, hypofibrinogen- or dysfibrino-genaemia;b) acquired reduction of fibrinogen concentration due todefective synthesis or consumptive reaction (e.g.thrombolytic therapy or consumptiv

21、e coagulopathy);c) acquired increase of fibrinogen concentration due toacute phase reaction (e.g. infection).2 Normative referencesThis standard incorporates by dated or undated refer-ence provisions from other publications. These normativereferences are cited at the appropriate places in the textan

22、d the publications are listed hereafter. For dated refer-ences, subsequent amendments to or revisions of any ofthese publications apply to this standard only when incorpo-rated in it by amendment or revision. For undated referencesthe latest edition of the publication referred to applies.DIN 12650-2

23、Mechanical, physical and electrical laboratory appara-tus Piston-operated volumetric apparatus PistonpipettesDIN 58905-1Haemostaseology Blood collection Part 1: Prepa-ration of plasma from citrated venous blood for coagu-lation testingDIN 58911-1Haemostaseology Calibration of measurementprocedures P

24、art 1: Clotting time measurementproceduresDIN 58939-1Haemostaseology Reference plasma Part 1:Requirements, preparationDIN 58970-2Laboratory centrifuges Centrifuge tubes for relativecentrifugal acceleration up to 40003 Terms and definitionsFor the purposes of this standard, the following terms anddef

25、initions apply:3.1 Clottable fibrinogenThe portion of fibrinogen that forms a clot under the influ-ence of thrombin.3.2 Thrombin (EC 3.4.21.5)1)A proteolytic enzyme that is formed by partial proteolysisof the proenzyme prothrombin.NOTE 1: In general, the activity of thrombin is given inInternational

26、 Units per ml (IU/ml).NOTE 2: One International Unit is defined as the activityof thrombin contained in 0,085 3 mg of the Interna-tional Standard of WHO for human thrombin 2. It iscomparable with one NIH unit2)3.1)Designation as specified by IUPAC (International UnionofPureandAppliedChemistry)2)NIH:

27、 National Institute of HealthB55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CC9B7EF8DD9NormCD - Stand 2007-03 Seite 3DIN 58906-1: 2000-033.3 Fibrinogen-ReferenzplasmaGepooltes Normalplasma, z. B. nach DIN 58939-1, das bei709C tiefgefroren bzw. lyophilisiert gelagert und dessenFibrinogengehalt am jeweils gltigen

28、 InternationalenStandard der WHO fr Fibrinogen 4 kalibriert wird.ANMERKUNG: Das Fibrinogen-Referenzplasma dient zurKalibrierung und kann auch zur Erstellung einerBezugskurve verwendet werden.3.4 Fibrinogen-KalibrierplasmaEin frisches, tiefgefrorenes oder lyophilisiertes gepooltesPlasma von mindesten

29、s zehn gesunden Spendern, des-sen Fibrinogengehalt an einem Fibrinogen-Referenz-plasma kalibriert wird.ANMERKUNG 1: Das Fibrinogen-Kalibrierplasma dientzur Erstellung der Bezugskurve nach DIN 58911-1.ANMERKUNG 2: Verdnnungen zur Mehrpunktkalibrierungsind zulssig, soweit diese den Kalibrierbeziehunge

30、neines adquat verdnnten Fibrinogen-Referenz-normalplasmas entsprechen (siehe DIN 58911-1).4 BezeichnungBezeichnung der Fibrinogenbestimmung in vensemCitratplasma (FIB 1):Bestimmung DIN 58906 FIB 15 Entnahme und Aufbereitung des BlutesDie Entnahme und Aufbereitung des Blutes erfolgen nachDIN 58905-1.

31、DiePlasmaprobedarfbiszu2hnachderBlutentnahmebei einer Temperatur im Bereich von 189Cbis229Cauf-bewahrt werden. Sofern die Bestimmung innerhalb dieserZeitspanne nicht mglich ist, darf die Plasmaprobe nachDIN 58905-1 eingefroren werden.6 Durchfhrung6.1 Vorbereitung der Proben und Reagenzien6.1.1 Plasm

32、aprobeDie Plasmaprobe ist vor der Bestimmung im Verhltnisvon1VolumenteilProbezu9VolumenteilenPuffervor-zuverdnnen. Die Verdnnung ist innerhalb von 30 min zuverarbeiten.ANMERKUNG 1: Als Puffersysteme knnen benutzt wer-den:a) Owrens Veronal-Puffer5,85 g Natriumdiethylbarbiturat (M = 206,18 g/mol)und 7

33、,35 g Natriumchlorid in 785 ml destilliertemWasser lsen, mit Salzsure auf pH = 7,35 ein-stellen und mit destilliertem Wasser auf 1000 mlauffllenoderb) Imidazol-PufferLsung mit c(Imidazol) = 0,05 mol/l und c(NaCl)=0,1 mol/l, eingestellt mit HCl auf pH = 7,4.ANMERKUNG 2: Bei Proben, die mit dieser Vor

34、verdn-nung Gerinnungszeiten von weniger als 10 s oder vonmehr als 25 s ergeben, ist die Bestimmung mit einerVorverdnnung im Verhltnis von 1 Volumenteil Probezu 19 Volumenteilen Puffer bzw. von 1 VolumenteilProbezu4VolumenteilenPufferzuwiederholen.ANMERKUNG 3: Die Verdnnungen sind so zu whlen,da die

35、gemessenen Gerinnungszeiten im linearenBereich der Bezugskurve liegen.3.3 Fibrinogen reference plasmaPooled normal plasma, e.g. as specified in DIN 58939-1,which is stored either deep-frozen at 709Corlyophi-lized the fibrinogen content of which is calibrated againstthe International Standard of WHO

36、for fibrinogen 4which is valid at the time of use.NOTE: The fibrinogen reference plasma serves for cali-bration and can also be used for establishing a refer-ence curve.3.4 Fibrinogen calibration plasmaA fresh, deep-frozen or lyophilized pooled plasmaobtained from at least ten healthy donors. It sha

37、ll be cali-brated against a fibrinogen reference plasma.NOTE 1: The fibrinogen calibration plasma is used forestablishing the reference curve as specified in DIN58911-1.NOTE 2: Dilutions for multi-point calibration are permittedas long as they match the calibration ratio of an ade-quately diluted fi

38、brinogen normal reference plasma(see DIN 58911-1).4DesignationDesignation of the determination of fibrinogen in plasmafrom citrated venous blood (FIB 1):Determination DIN 58906 FIB 15 Collection and processing of bloodThe collection and processing of the blood is carried outas described in DIN 58905

39、-1.The plasma sample may be stored up to 2 h after bloodcolectionatatemperatureintherangefrom189Cto229C. Unless the determination can be performed withinthis period of time, the plasma sample may be frozen asdescribed in DIN 58905-1.6 Procedure6.1 Preparation of samples and reagents6.1.1 Plasma samp

40、lePrior to the determination, the plasma sample shall beprediluted in the proportion of 1 part by volume of sampleto 9 parts by volume of buffer. The diluted plasma shall beprocessed within 30 min.NOTE 1: The following buffers can be used:a) Owrens bufferDissolve 5,85 g diethylbarbituric acid sodium

41、 salt(M =206,18g/mol) and 7,35 g sodium chloride in785 ml of distilled water, adjust to pH = 7,35 withHCl and fill up with distilled water to 1000 mlorb) imidazole bufferSolution containing 0,05 mol/l imidazole and0,1 mol/l NaCl,adjustedtopH=7,4usingHCl.NOTE 2: In such prediluted plasma samples exhi

42、bitingclotting times of less than 10 s and more than 25 s, thedetermination shall be repeated with predilutions inthe proportion of 1 part by volume of sample to19partsbyvolumeofbufferand1partbyvolumeofsample to 4 parts by volume of buffer, respectively.NOTE 3: Dilutions shall be selected in such a

43、way that themeasured clotting times are within the linear portion ofthe reference curve.B55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CC9B7EF8DD9NormCD - Stand 2007-03 Seite 4DIN 58906-1: 2000-036.1.2 ThrombinreagensAusgehend von lyophilisiertem Thrombinreagens wird mitbidestilliertem Wasser eine Thrombinlsung

44、 mit einerKonzentration von mindestens 50 I.E./ml hergestellt undvor dem Gebrauch auf (37 t 0,5)9Cgebracht.6.2 Reaktionsansatz0,2ml vorverdnnte Probe 2 min bei (37 t 0,5)9Cinkubieren;0,2ml Thrombinlsung, auf (37 t 0,5)9Cvorgewrmt.6.3 Durchfhrung der BestimmungFr die Durchfhrung der Fibrinogenbestimm

45、ung wird diemanuelle Hkchenmethode angewendet.ANMERKUNG: Die Hkchenmethode wurde wegen dereinfachen Handhabung und guten Reproduzierbarkeitgewhlt. Andere Meprinzipien, die vergleichbareErgebnisse liefern, drfen verwendet werden.Zur Bestimmung werden in einem Wasserbad bei(37 t 0,5)9C Zentrifugenrhrc

46、hen aus Kunststoff, z. B.Rhrchen DIN 58970 14 100 K, mindestens 5 minvorgewrmt. In ein Rhrchen werden mit einer Kolben-hubpipette nach DIN 12650-2 0,2 ml vorverdnnte Probepipettiert und 2 min im Wasserbad bei (37 t 0,5)9Cinku-biert. Danach werden 0,2 ml einer Thrombinlsung miteiner Konzentration von

47、 mindestens 50 I.E./ml mit einerKolbenhubpipette zugegeben, und der Ansatz wird sorg-fltig gemischt.Gleichzeitig mit der Zugabe der Thrombinlsung wirdeine Stoppuhr in Gang gesetzt und ein Hkchen ausPlatin in Abstnden von etwa 0,5 s durch das Reaktions-gemisch gefhrt. Beim Auftreten eines ersten, am Hkchenerkennbaren Gerinnsels wird die Uhr gestoppt und dieangezeigte Gerinnungszeit registriert. Eine zweiteBestimmung wird in gleicher Weise durchgefhrt. Fallsbeide Gerinnungszeiten mehr als t 3% vom Mittelwe