DIN 58914-1-2000 Haemostaseology - Determination of thrombin time - Part 1 Reference measurement procedure for the determination in plasma from citrated venous blood《止血学 凝血致活酶时间的测定.pdf

1、h DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise,nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin, gestattet.Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 Berlinh No part of this standard may be reproduced without the prior perm

2、ission of DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin.Beuth Verlag GmbH, Berlin, has the exclusive right of sale for German Standards (DIN-Normen).Ref. Nr. DIN 58914-1 : 2000-03Preisgr. 06 Vertr.-Nr. 0006Mrz 2000DEUTSCHE NORMHmostaseologieThrombinzeitbestimmungTeil 1: Referenzmeverfahren fr die B

3、estimmungin vensem Citratplasma58914-1Normenausschu Medizin (NAMed) im DIN Deutsches Institut fr Normung e.V.Ersatz fr Ausgabe 1994-06Supersedes June 1994 editionICS 11.100Haemostaseology Determination of thrombin time Part 1: Reference measurement procedure for the determinationin plasma from citra

4、ted venous bloodHmostasiologie Dtermination du temps de thrombine Partie 1: Mode opratoire de mesure de rfrence pour la dterminationsurleplasmaprparpartirdusangveineuxcitratVorwortDiese Norm wurde vom Arbeitsausschu C 5 Hmo-staseologie“ des Normenausschusses Medizin (NAMed)im DIN Deutsches Institut

5、fr Normung e.V. in Zusammen-arbeit mit der Gesellschaft fr Thrombose- und Hmo-staseforschung e.V. erarbeitet.nderungenGegenberderAusgabeJuni1994wurdenfolgendenderungen vorgenommen: Die Aufbewahrungszeit der Plasmaprobe wurde neufestgelegt. Die Norm wurde redaktionell berarbeitet.Frhere AusgabeDIN 58

6、914-1: 1994-061 AnwendungsbereichDiese Norm gilt fr die Bestimmung der Thrombinzeit(TZ) in aus Venenblut gewonnenem Citratplasma.Zweck der Norm ist die Ermittlung vergleichbarer Ergeb-nisse der Thrombinzeit in einer Probe.Die Thrombinzeit dient zur Beurteilung von Strungen derFibrinbildung beia) Dys

7、fibrinogenmien;b) Vorliegen von Fibrin(ogen)-Spaltprodukten (z. B. beiThrombolysetherapie);c) Heparintherapie mit unfraktionierten Heparinen.Fortsetzung Seite 2 bis 4In case of doubt, the German-language version should beconsulted as the authoritative text.ForewordThis standard has been prepared by

8、the Technical Com-mittee C 5 “Hmostaseologie” of the NormenausschuMedizin (Medicine Standards Committee) of DINDeutsches Institut fr Normung e.V. in cooperation withthe Gesellschaft fr Thrombose- und Hmostase-forschung e.V.AmendmentsThe following amendments have been made to theJune 1994 edition: Th

9、e specified storage time of the plasma sample waschanged. The standard has been editorially revised.Previous editionDIN 58914 -1: 1994-061ScopeThis standard is applicable to the determination ofthrombin time (TT) in citrated plasma obtained fromvenous blood.The purpose of the standard is to achieve

10、comparableresults of thrombin time in a sample.Thrombin time serves for the evaluation of defective fibrinformation in:a) dysfibrinogenaemia;b) the presence of fibrin(ogen) degradation products (e.g.in thrombolysis therapy);c) heparin therapy with unfractioned heparins.Continued on pages 2 to 4B55EB

11、1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CC9B7EF8DD9NormCD - Stand 2007-03 Seite 2DIN 58914-1 : 2000-032 Normative VerweisungenDiese Norm enthlt durch datierte oder undatierte Verwei-sungen Festlegungen aus anderen Publikationen. Diesenormativen Verweisungen sind an den jeweiligen Stellenim Text zitiert, und d

12、ie Publikationen sind nachstehendaufgefhrt. Bei datierten Verweisungen gehren spterenderungen oder berarbeitungen dieser PublikationennurzudieserNorm,fallssiedurchnderungoderberar-beitung eingearbeitet sind. Bei undatierten Verweisungengilt die letzte Ausgabe der in Bezug genommenen Publi-kation.DIN

13、 12650-2Mechanische, physikalische und elektrische Laborge-rte Volumenmegerte mit Hubkolben Kolben-hubpipettenDIN 58905-1Hmostaseologie Blutentnahme Teil 1: Gewin-nung von vensem Citratplasma fr hmostaseo-logische AnalysenDIN 58911-1Hmostaseologie Kalibrierung von Meverfahren Teil 1: Gerinnungszeit-

14、MeverfahrenDIN 58970-2Laborzentrifugen Zentrifugenrhrchen fr RZB bis40003BegrifeFr die Anwendung dieser Norm gelten die folgendenBegriffe:3.1 Thrombinzeitin vensem CitratplasmaDie In-vitro-Gerinnungszeit von Plasma aus vensemCitratblut nach Zusatz von Thrombin.ANMERKUNG: Die Thrombinzeit in vensem C

15、itrat-plasma wird in Sekunden angegeben.3.2 Thrombin (EC 3.4.21.5)1)Ein proteolytisches Enzym, das durch partielle Proteolyseaus dem Proenzym Prothrombin entsteht.ANMERKUNG 1: Die Aktivitt von Thrombin wird im allge-meinen in Internationalen Einheiten je Milliliter(I.E./ml) angegeben.ANMERKUNG 2: Ei

16、ne Internationale Einheit ist defini-tionsgem die Aktivitt von Thrombin, die in0,085 3 mg des Internationalen Standards der WHOfr humanes Thrombin enthalten ist 1. Sie ist ver-gleichbar mit einer NlH-Einheit2)2.4 BezeichnungBezeichnung der Thrombinzeitbestimmung in vensemCitratplasma (A):TZ Bestimmu

17、ng DIN 58914 A5 Entnahme und Aufbereitung des BlutesDie Entnahme und Aufbereitung des Blutes erfolgen nachDIN 58905-1.DiePlasmaprobedarfbiszu2hnachderBlutentnahmebei einer Temperatur im Bereich von 189Cbis229Cauf-bewahrt werden. Die Plasmaprobe darf nicht eingefrorenwerden.1)Bezeichnung nach IUPAC (

18、International Union of Pureand Applied Chemistry)2)NIH: National Institute of Health2 Normative referencesThis standard incorporates by dated or undated referenceprovisions from other publications. These normative refer-ences are cited at the appropriate places in the text andthe publications are li

19、sted hereafter. For dated references,subsequent amendments to or revisions of any of thesepublications apply to this standard only when incorpo-rated in it by amendment or revision. For undated refer-ences the latest edition of the publication referred toapplies.DIN 12650-2Mechanical, physical and e

20、lectrical laboratoryapparatus Piston-operated volumetric apparatus Piston pipettesDIN 58905-1Haemostaseology Blood collection Part 1: Prepa-ration of plasma from citrated venous blood for coagu-lation testingDIN 58911-1Haemostaseology Calibration of measurementprocedures Part 1: Clotting time measur

21、ement pro-ceduresDIN 58970-2Laboratory centrifuges Centrifuge tubes for relativecentrifugal acceleration up to 4 0003 Terms and definitionsFor the purposes of this standard, the following terms anddefinitions apply:3.1 Thrombin time of plasmafrom citrated venous bloodThe in vitro clotting time of pl

22、asma from citrated venousblood after the addition of thrombin.NOTE: The thrombin time of plasma from citrated venousblood is given in seconds.3.2 Thrombin (EC 3.4.21.5)1)A proteolytic enzyme which is formed by the partial prote-olysis of the proenzyme prothrombin.NOTE 1: In general, the activity of

23、thrombin is given inInternational Units per millilitre (IU/ml).NOTE 2: One International Unit is defined as the activityof thrombin contained in 0,085 3 mg of the Interna-tional Standard of WHO for human thrombin 1. It iscomparable with one NIH unit2)2.4DesignationDesignation of the determination of

24、 thrombin time inplasma from citrated venous blood (A):Determination of TT DIN 58914 A5 Collection and processing of bloodThe collection and processing of blood shall be carriedout as described in DIN 58905-1.The plasma sample may be stored up to 2 h after bloodcolectionatatemperatureintherangefrom1

25、89Cto229C. The plasma sample shall not be frozen.1)Designation as specified by IUPAC (International UnionofPureandAppliedChemistry)2)NIH: National Institute of HealthB55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CC9B7EF8DD9NormCD - Stand 2007-03 Seite 3DIN 58914-1 : 2000-036 Durchfhrung6.1 Vorbereitung des Thr

26、ombinreagenzesAusgehend von lyophilisiertem Thrombin wird mit bidestil-liertem Wasser eine Thrombinlsung hergestellt. Mitdieser Reagenzlsung mu in Normalplasma nachDIN 58911-1 eine Thrombinzeit von (18 t 2) s erhaltenwerden. Fr die Kontrolle der Heparintherapie kann ausGrnden der Reproduzierbarkeit

27、Thrombinreagens mitder doppelten Thrombinkonzentration und einem Wert inNormalplasma von (11 t 2) s verwendet werden.6.2 Reaktionsansatz0,2ml Plasmaprobe bei (37 t 0,5)9C2mininkubie-ren;0,2ml Thrombinreagens.6.3 Durchfhrung der BestimmungFr die Durchfhrung der Thrombinzeitbestimmung wirddie manuelle

28、 Hkchenmethode angewendet.ANMERKUNG: Die Hkchenmethode wurde wegen dereinfachen Handhabung und guten Reproduzierbarkeitgewhlt. Andere Meprinzipien, die vergleichbareErgebnisse liefern, drfen verwendet werden.Zur Bestimmung werden in einem Wasserbad bei(37 t 0,5)9C Zentrifugenrhrchen aus Kunststoff,

29、z. B.Rhrchen DIN 58970 14 100 K, mindestens 5 minvorgewrmt. In ein Rhrchen werden mit einer Kolben-hubpipette nach DIN 12650-2 0,2 ml Plasmaprobe pipet-tiert und 2 min im Wasserbad bei (37 t 0,5)9C inkubiert.Danach werden 0,2 ml Thrombinreagens, das in einemWasserbad auf (37 t 0,5)9C vorgewrmt wurde

30、, mit einerKolbenhubpipette zugegeben, und der Ansatz wird durchsorgfltiges Schtteln gemischt.Gleichzeitig mit der Zugabe wird eine Stoppuhr in GanggesetztundeinHkchenausPlatininZeitabstndenvonetwa 0,5 s durch das Reaktionsgemisch gezogen. BeimAuftreten eines ersten, am Hkchen erkennbaren Gerinn-sel

31、s wird die Uhr gestoppt und die angezeigte Gerin-nungszeit registriert. Eine zweite Bestimmung wird in glei-cher Weise durchgefhrt. Falls beide Thrombinzeitenmehr als t 3% vom Mittelwert abweichen, ist eine neueDoppelbestimmung durchzufhren.6.4 QualittskontrolleDie Richtigkeit der Ergebnisse ist dur

32、ch Mitfhren vonQualittskontrollplasmen mit Sollwerten im Referenzbe-reich und im pathologischen Bereich je Meserie sicher-zustellen.7 ErgebnismitteilungDie Ergebnisse der Thrombinzeitbestimmung werden inSekunden angegeben.6 Procedure6.1 Preparation of thrombin reagentStarting with lyophilized thromb

33、in, a thrombin solution isprepared using bi-distilled water. When using this reagent,thethrombintimeinnormalplasmaasdefinedinDIN 58911-1 shall be (18 t 2) s. When monitoring heparintherapy, a thrombin reagent of twice this concentrationthat results in a clotting time of (11 t 2) s in normalplasma ma

34、y be used for reproducibility reasons.6.2 Reaction mixture0,2ml of plasma sample to be incubated at(37 t 0,5)9Cfor2min;0,2ml of thrombin reagent.6.3 Performing the determinationThe manual hook method shall be used to determine thethrombin time.NOTE: The hook method was selected because of itseasy ex

35、ecution and good reproducibility. Other princi-ples of measurement providing comparable resultsmay also be used.Centrifuge plastics tubes, e.g. tube DIN 58970 14 100Kare prewarmed to (37 t 0,5)9C in a waterbath for at least5 min prior to the assay. 0,2 ml of plasma sample ispipetted into a tube usin

36、g a piston pipette complying withDIN 12650-2 and incubated at (37 t 0,5)9Cinawaterbathfor 2 min.Subsequently, 0,2 ml of thrombin reagent which was pre-warmed to (37 t 0,5)9C in a waterbath is added using apiston pipette and the solution is gently mixed.A stopwatch is started simultaneously when addi

37、ng thethrombin reagent, and a platinum hook is passed throughthe reaction mixture at time intervals of about 0,5 s. Whenthefirstclotcanbedetectedonthehook,thestopwatchisstopped and the clotting time indicated is recorded. Asecond determination is carried out in the same manner. Ifboth thrombin times

38、 deviate by more than t 3% from thearithmetic mean, another duplicate determination shall becarried out.6.4 Quality controlThe accuracy of each series of measurements shall beensured by the application of quality control plasmas withassigned values in the reference interval and pathologicalrange.7 R

39、eport of resultsThe results of the determination of thrombin time aregiven in seconds.B55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CC9B7EF8DD9NormCD - Stand 2007-03 Seite 4DIN 58914-1 : 2000-03Literaturhinweise1 Robertson, I., Gaffney, P. J., Bangham, D. R.: Standardfor Human Thrombin; Thromb. Diathes. haemor

40、rh. 34(1975), 32 Fachinformation des NBSB (National Biological Stan-dards Board) zum 1. Internationalen Standard frhumanes ThrombinBibliography1 Robertson, I., Gaffney, P. J., Bangham, D. R.: Standardfor Human Thrombin; Thromb. Diathes. haemorrh. 34(1975), 32 Information of NBSB (National Biological StandardsBoard) on the 1st International Standard for humanthrombinB55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CC9B7EF8DD9NormCD - Stand 2007-03