1、April 2005DEUTSCHE NORM Normenausschuss Medizin (NAMed) im DINPreisgruppe 10DIN Deutsches Institut f r Normung e.V. Jede Art der Vervielf ltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut f r Normung e. V., Berlin, gestattet.ICS 07.100.10:/H 9524166www.din.deXDIN 58942-5Medi
2、zinische Mikrobiologie Kulturmedien Teil 5: Anforderungen und Auswahl von Kulturmedien f r die StuhldiagnostikMedical microbiology Culture media Part 5: Requirements and selection of culture media for the diagnostic of stool specimenMicrobiologie mdical Milieux de culture Partie 5: Exigences et slec
3、tion des milieux de culture la diagnose de la fcesAlleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 BerlinErsatz f rDIN 589425:199501www.beuth.deGesamtumfang 11 SeitenB55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CCBB7EF8BD9NormCD - Stand 2005-05DIN 58942-5:2005-042VorwortDiese Norm wurde vom Arbeitsauss
4、chuss E 13 Kulturmedien des Normenausschusses Medizin (NAMed) imDIN Deutsches Institut fr Normung e. V. erarbeitet. Die Angaben in dieser Norm sind inhaltlich mit den vonder DGHM-Fachgruppe Gastrointestinale Infektionen erarbeiteten Leitlinien fr die gestufte Stuhldiagnostikabgestimmt.DIN 58942 Medi
5、zinische Mikrobiologie Kulturmedien besteht aus (Beibltter sind nicht aufgefhrt):Gbe Teil 2: Gebrauchsfertige BlutkultursystemeGbe Teil 3: Eintauchkultursysteme fr die mikrobiologische UrinuntersuchungGbe Teil 4: Transportsysteme fr bakterienhaltiges UntersuchungsgutGbe Teil 5: Anforderungen und Aus
6、wahl von Kulturmedien fr die StuhldiagnostiknderungenGegenber DIN 58942-5:1995-01 wurden folgende nderungen vorgenommen:a) Aufnahme von neuen Nhrbden in Tabelle 1;b) Abstimmung von Tabelle 1 auf die Empfehlungen der Deutschen Gesellschaft fr Hygiene undMikrobiologie (MiQ 9)1.Frhere AusgabenDIN 58942
7、-5: 1990-12, 1995-01B55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CCBB7EF8BD9NormCD - Stand 2005-05DIN 58942-5:2005-043ForewordThis standard was elaborated by the committee E 13 “Culture media“ of the department for medical standards(Normenausschuss Medizin) at the German Institute for Standardization (DIN Deu
8、tsches Institut frNormung e. V.). The statements of this standard are in accordance with the guidelines elaborated by the studygroup of the German Society for Hygiene and Microbiology (DGHM) “gastro-intestinal infections for thestepwise diagnosis of stool.DIN 58942 Medical Microbiology Culture media
9、 consists of (supplements are not listed):Gbe Part 2: Ready-to-use blood culture systemsGbe Part 3: Dip culture systems for the microbiological urine testingGbe Part 4: Transport systems for bacteria containing test materialGbe Part 5: Requirements and selection of culture media for the diagnosis of
10、 stoolAmendmentsIn comparison to DIN 58942-5:1995-01 the following amendments were made:a) Inclusion of new culture media in table 1;b) Harmonization of table 1 with the recommendations of the German Society for Hygiene and Microbiology(DGHM: MiQ 9) 1.Previous editionsDIN 58942-5: 1990-12, 1995-01B5
11、5EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CCBB7EF8BD9NormCD - Stand 2005-05DIN 58942-5:2005-0441 AnwendungsbereichDiese Norm gilt fr Kulturmedien, die im humanmedizinischen Bereich fr die bakteriologische Stuhl-untersuchung eingesetzt werden.2 Normative VerweisungenDie folgenden zitierten Dokumente sind fr d
12、ie Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datiertenVerweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzteAusgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen).DIN EN 1659, In-vitro-Diagnostik/Diagnostika Kulturmedien fr die Mikrob
13、iologie BegriffeDIN 58959-6, Qualittsmanagement in der medizinischen Mikrobiologie Teil 6: Anforderungen anKontrollstmmeDIN 58959-7, Qualittsmanagement in der medizinischen Mikrobiologie Teil 7: Allgemeine Anforderungenan das Mitfhren von KontrollstmmenDIN 58959-9, Qualittsmanagement in der medizini
14、schen Mikrobiologie Teil 9: Anforderungen an denEinsatz von Kontrollstmmen zur Prfung von Kulturmedien3 BegriffeFr die Anwendung dieses Dokuments gelten die Begriffe nach DIN EN 1659.4 Anforderungen4.1 Biologische LeistungsfhigkeitDie Kulturmedien mssen den Nachweis enteropathogener Bakterien aus de
15、m Stuhl ermglichen.Folgende Mikroorganismen mssen im Rahmen der bakteriologischen Stuhldiagnostik mit Hilfe vonKulturmedien entsprechender Selektivitt und entsprechendem Wachstumstiter nachgewiesen werden:Gbe Salmonella spp.Gbe Shigella spp.Gbe Yersinia enterocoliticaGbe Enteropathogene, enterohmorr
16、hagische E.-coli-StmmeGbe Campylobacter spp.Gbe Vibrio spp.Gbe Aeromonas spp.Gbe Clostridium difficileB55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CCBB7EF8BD9NormCD - Stand 2005-05DIN 58942-5:2005-0451 ScopeThis standard applies to culture media which are used for bacteriological stool investigations in the h
17、umanmedical field.2 Normative referencesThe following referenced documents are indispensable for the application of this document. For datedreferences, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenceddocument (including any amendments) applies.DIN EN 1659,
18、 In vitro diagnostic medical devices Culture media for microbiology Terms and definitionsDIN 58959-6, Quality management in medical microbiology Part 6: Requirements for control strains.DIN 58959-7, Quality management in medical microbiology Part 7: General requirements for the use ofcontrol strains
19、.DIN 58959-9, Quality management in medical microbiology Part 9: Requirements for the use of controlstrains for testing of culture media.3 Terms and definitionsFor the purposes of this document, the terms and definitions given in DIN EN 1659 apply.4 Requirements4.1 Biological performanceThe culture
20、media shall enable the detection of entero-pathogenic bacteria from stool.When performing the bacteriological diagnosis of stool the following micro-organisms shall be detected bymeans of culture media of appropriate selectivity and which allow appropriate growth-titre:Gbe Salmonella spp.Gbe Shigell
21、a spp.Gbe Yersinia enterocoliticaGbe Entero-pathogenic, entero-haemorrhagic Escherichia. coli strainsGbe Campylobacter spp.Gbe Vibrio spp.Gbe Aeromonas spp.Gbe Clostridium difficileB55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CCBB7EF8BD9NormCD - Stand 2005-05DIN 58942-5:2005-0464.2 Gestufte StuhldiagnostikUm
22、eine gezielte Diagnostik enteropathogener Mikroorganismen nach 4.1 aus der Stuhlflora zu ermglichen,ist ein Verfahren der gestuften Stuhldiagnostik anzuwenden. Hierbei wird aufgrund klinisch-epidemiologischerKriterien gezielt auf relevante bakterielle Infektionserreger mit geeigneten Kulturmedien un
23、tersucht. DiePrinzipen der gestuften Stuhluntersuchung und Beispiele fr Kulturmedien sind in DIN 58942-5 Bbl 1dargestellt.4.3 Einsatz der KulturmedienWegen der meist stark berwiegenden Normalflora ist die Verwendung selektiver Kulturmedien erforderlich.Wegen ihrer unterschiedlichen Selektivitt erfas
24、sen sie jedoch nur ein begrenztes Bakterienspektrum. Esmssen daher flssige und feste Kulturmedien verschiedener Selektivitt eingesetzt werden. Tabelle 1 gibteinen berblick ber den Grad der Selektivitt der in Frage kommenden Kulturmedien.Tabelle 1 Kulturmedien mit Selektivittsgrad zur Isolierung und
25、Differenzierungder wichtigsten enteropathogenen BakterienSelektivittsgradaohne mig hochEnteropathogeneBakterienKulturmedium (Isolierungsmedium)0123Salmonella spp. Selektivmedien zur Beimpfung nachselektiver Anreicherung:XLD-Agar xBPLS-Agar xMacConkey-Agar xRambach-Agarb und andere chromogeneKulturme
26、dienxxKulturmedien fr die direkte Kultur:Desoxycholat-Zitrat-Agar (Leifson-Agar) xHektoen-Enteric-Agar xSS-Agar xBPLS-Agar xXLD-Agar xChromogene Kulturmedien xxShigella spp.cDesoxycholat-Zitrat-Agar (Leifson-Agar) xMacConkey-Agar xXLD-Agar xHektoen-Enteric-Agar xYersinia enterocolitica CIN-Agar xMac
27、Conkey-Agar xSorbit-MacConkey-Agar xChromogene Kulturmedien xxEnteropathogene,enterohmorrhagischeE.-coli-StmmeEnterohmolysin-Agar mit Antibiotika xB55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CCBB7EF8BD9NormCD - Stand 2005-05DIN 58942-5:2005-0474.2 Stepwise diagnosis of stoolIn order to enable from the stool
28、flora a targeted diagnosis of entero-pathogenic micro-organisms according to4.1, a method of stepwise diagnosis of stool shall be applied. On the basis of clinical-epidemiological criteriathe testing in this connection especially targets at relevant bacterial infectious pathogens by means of suitabl
29、eculture media. The principles of the stepwise diagnosis of stool and examples for culture media are specifiedin DIN 58942-5 Suppl. 1.4.3 Use of culture mediaAs the normal flora usually predominates strongly, the use of selective culture media is necessary. Because oftheir different selectivity they
30、, however, cover only a limited bacterial spectrum. For this reason liquid and solidculture media of different selectivity shall be used. Table 1 outlines the level of selectivity of the culture mediato be considered.Table 1 Culture media with different selectivity level for the isolation and differ
31、entiationof the most important entero-pathogenic bacteriaSelectivity levelawithout moderate highEntero-pathogenicbacteriaCulture medium (isolation medium)0123Salmonella spp. Selective medium for inoculation afterselective enrichment:XLD agar xBPLS agar xMacConkey agar xRambach agarb and other chromo
32、genicculture mediaxxCulture media for the direct culture:Desoxycholate-citrate agar (Leifson agar) xHektoen-Enteric agar xSalmonella-Shigella (SS) agar xBPLS agar xXLD agar xChromogenic culture media xxShigella spp.cDesoxycholate-citrate agar (Leifson agar) xMacConkey agar xXLD agar xHektoen-Enteric
33、 agar xYersinia enterocolitica CIN agar xMacConkey agar xSorbit-MacConkey agar xChromogenic culture media xxEntero-pathogenic,entero-haemorrhagicE.-coli strainsEntero-haemolysin agar with antibiotics xB55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CCBB7EF8BD9NormCD - Stand 2005-05DIN 58942-5:2005-048Tabelle 1 (
34、fortgesetzt)Selektivittsgradaohne mig hochEnteropathogeneBakterienKulturmedium (Isolierungsmedium)0123Campylobacter spp. Blut-Agar (5 %ig bis 10 %ig) G2b Antibiotika-Supplement)xBlutfreies Kulturmedium nach Preston(CCDA-Preston-Agar)d und nach KarmaliexVibrio spp. TCBS-Agar xBlut-Agar xAeromonas spp
35、. CIN-Agar xBlut-Agar (G2b 30 mg/l Ampicillin) xClostridium difficile Cycloserin-Cefoxitin-Fructose-Agar xCycloserin-Cefoxitin-Fructose-Agar mitpara-Kresol-VorstufenxaSelektivittsstufen analog MiQ 9 1.bRambach-Agar 2 ist nicht geeignet fr die direkte Isolierung aus Stuhlproben (Selektivitt 1) 3. S.
36、typhi undSalmonellen der seltenen Subspezies IIIa, IIIb und V 4 zeigen nicht die typischen Farbreaktionen. Diese Subspeziessind von den anderen G62-Galactosidase bildenden schwer zu unterscheiden.cBedingt durch den hohen Selektivittsgrad der Medien kommt es nur zu schwachem Wachstum von Shigellen. D
37、ahersoll bei jeder Untersuchung auf Shigellen parallel zu den ausgewhlten Isolierungsmedien MacConkey-Agar oderHektoen-Enteric-Agar eingesetzt werden.dReferenz nach 5.eReferenz nach 6.5 Prfung5.1 Bestimmung der Wachstumseigenschaften und des SelektivittsgradesWachstumseigenschaften und Selektivittsg
38、rad werden geprft durch Bestimmung des Wachstumstiters unddes Selektivittskoeffizienten (siehe DIN 58959-9).5.2 Mikrobiologische PrfungDie fr die Stuhldiagnostik eingesetzten Kulturmedien zur Anreicherung, Isolierung und Identifizierungenteropathogener Bakterien mssen das Wachstum der in der Tabelle
39、 aufgefhrten Bakterien mit einemWachstumstiter von Gb3 0,5 ermglichen.Es sind regelmige Chargenprfungen der eingesetzten Kulturmedien durchzufhren.Bezglich der Anforderungen an Kontrollstmme, Methoden zur Aufbewahrung von Kontrollstmmen undderen Einsatz zur Prfung der genannten Kulturmedien ist nach
40、 DIN 58959-6, DIN 58959-7 und DIN 58959-9zu verfahren (siehe auch DIN 58959-6 Bbl 1 und DIN 58959-9 Bbl 1).B55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CCBB7EF8BD9NormCD - Stand 2005-05DIN 58942-5:2005-049Table 1 (continued)Selectivity levelawithout moderate highEntero-pathogenicbacteriaCulture medium (isolat
41、ion medium)0123Campylobacter spp. Blood agar (5 % to 10 %) G2b antibioticsupplementxBlood free culture medium acc. to Preston(CCDA-Preston agar)d and acc. to KarmaliexVibrio spp. TCBS agar xBlood agar xAeromonas spp. CIN agar xBood agar (G2b 30 mg/l ampicillin) xClostridium difficile Cycloserine-Cef
42、oxitin-Fructose agar xCycloserine-Cefoxitin-Fructose agar withpara-Cresol-precursorsxaSelectivity levels analogous to MiQ 9 1.bRambach agar 2 is not suitable for the direct isolation from stool specimen (selectivity 1) 3. S. typhi and Salmonellaeof the rare subspecies IIIa, IIIb and V 4 will not sho
43、w the typical colour reaction. Differentiation of these subspeciesfrom other G62-galactosidase-forming ones is difficult.cBecause of the high selectivity level of the media there is only poor growth of Shigella. That is why at each investigationfor Shigella, MacConkey agar or Hektoen-Enteric agar sh
44、all be used in parallel to the selective isolation media.dReference according to 5.eReference according to 6.5 Evaluation5.1 Determination of growth properties and selectivity levelGrowth properties and selectivity level shall be tested by the determination of the growth-titre and theselectivity coe
45、fficient (see DIN 58959-9).5.2 Microbiological evaluationThe culture media for enrichment, isolation and identification of entero-pathogenic bacteria used for thediagnosis of stool should enable growth of bacteria listed in the table with a growth-titre of Gb3 0,5.Lot tests of the culture media used
46、 shall be carried out regularly.With regards to the requirements for control strains, methods for storage of control strains and their use for thetesting of the listed culture media, DIN 58959-6, DIN 58959-7 and DIN 58959-9 shall apply (see alsoDIN 58959-6 Suppl. 1 and DIN 58959-9 Suppl. 1).B55EB1B3
47、E14C22109E918E8EA43EDB30F09CCBB7EF8BD9NormCD - Stand 2005-05DIN 58942-5:2005-0410LiteraturhinweiseDIN 58942-5 Bbl 1, Medizinische Mikrobiologie Kulturmedien fr die Bakteriologie Teil 5: Anforderungenund Auswahl von Kulturmedien fr die Stuhldiagnostik Prinzipien der gestuften Stuhluntersuchung undber
48、sicht von Kulturmedien fr den Routineeinsatz.DIN 58959-6 Bbl 1, Qualittsmanagement in der medizinischen Mikrobiologie Teil 6: Anforderungen anKontrollstmme Beispiele zur Herstellung und Aufbewahrung von Bakterien als Stamm- undGebrauchskulturen.DIN 58959-9 Bbl 1, Qualittsmanagement in der medizinisc
49、hen Mikrobiologie Teil 9: Anforderungen an denEinsatz von Kontrollstmmen zur Prfung von Kulturmedien Kontrollstmme fr hufig verwendeteKulturmedien.1 MiQ 9 Qualittsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik. Im Auftrag der DeutschenGesellschaft fr Hygiene und Mikrobiologie (DGHM). Hrsg. v. H. Mauch, R. Ltticken, S. Gattermann.Heft 9/2000: Infektionen des Darmes2 Rambach, A.: New plate medium for
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