DIN 58943-32-2015 Medical microbiology - Diagnosis of tuberculosis - Part 32 Detection of mycobacteria by microscopic methods Text in German and English《医用微生物学 结核病的诊断 第32部分 采用显微镜法检.pdf

1、Mai 2015DEUTSCHE NORM DIN-Normenausschuss Medizin (NAMed)Preisgruppe 13DIN Deutsches Institut fr Normung e. V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e. V., Berlin, gestattet.ICS 07.100.10!%Af“2309367www.din.deDDIN 58943-32Medizinis

2、che Mikrobiologie Tuberkulosediagnostik Teil 32: Mikroskopische Methoden zum Nachweis von Mykobakterien;Text Deutsch und EnglischMedical microbiology Diagnosis of tuberculosis Part 32: Detection of mycobacteria by microscopic methods;Text in German and EnglishMicrobiologie mdicale Diagnostic de la t

3、uberculose Partie 32: Mthodes microscopiques pour la dtection des mycobactries;Texte en allemand et anglaisAlleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 BerlinErsatz frDIN 58943-32:2011-03www.beuth.deGesamtumfang 25 SeitenDIN 58943-32:2015-05 2 Inhalt Contents Seite Page Vorwort 3 Einleitu

4、ng . 5 1 Anwendungsbereich 6 2 Normative Verweisungen . 6 3 Begriffe 7 4 Anforderungen an die Arbeitssicherheit 8 5 Untersuchungsgut und Anzahl der Primrproben . 9 5.1 Auswahl, Menge und Gewinnung von Untersuchungsgut . 9 5.2 Untersuchungsauftrag . 9 5.3 Behandlungskontrolle 9 6 Mikroskopische Ausrs

5、tung . 10 7 Reagenzien 10 7.1 Karbolfuchsinlsung 10 7.2 Salzsure-Alkohol 11 7.3 Methylenblaulsung nach Lffler . 11 7.4 Phenol-Auramin-Lsung 11 8 Anfertigung und Frbung der mikroskopischen Prparate 11 8.1 Allgemeines. 11 8.2 Herstellung der Ausstriche 12 8.3 Fixation 12 8.4 Frbung . 12 8.4.1 Auswahl

6、der Methode, allgemeine Hinweise . 12 8.4.2 Hellfeldverfahren 13 8.4.3 Fluoreszenzverfahren 13 9 Durchfhrung der Mikroskopie . 14 9.1 Allgemeine Angaben 14 9.2 Hellfeldverfahren 14 9.3 Fluoreszenzverfahren 14 10 Beurteilung 14 11 Befundmitteilung 15 12 Qualittssicherung . 17 12.1 Ziel der Qualittssi

7、cherung . 17 12.2 Laborinterne Qualittskontrollen 19 12.2.1 Reagenzien und Frbequalitt 19 12.2.2 Gertefunktion 20 12.2.3 Plausibilittskontrolle 21 12.3 Aufbewahrung positiver Prparate . 21 12.4 Externe Qualittskontrolle . 21 Anhang A (informativ) Hinweise zur Sensitivitt der Mikroskopie 22 Literatur

8、hinweise 25 Foreword 3 Introduction . 5 1 Scope . 6 2 Normative references . 6 3 Terms and definitions 7 4 Occupational health and safety requirements 8 5 Specimens and number of primary samples . 9 5.1 Selection, number and extraction of specimens 9 5.2 Request form . 9 5.3 Treatment control . 9 6

9、Microscopic equipment . 10 7 Reagents 10 7.1 Carbol fuchsine solution . 10 7.2 Hydrochloric acid/alcohol 11 7.3 Methylene blue solution according to Loeffler . 11 7.4 Phenol auramine solution 11 8 Preparation and staining of the microscopic specimens 11 8.1 General 11 8.2 Preparation of the smears .

10、 12 8.3 Fixation 12 8.4 Staining 12 8.4.1 Selection of the method, general information . 12 8.4.2 Bright-field technique 13 8.4.3 Fluorescence technique 13 9 Microscopic procedure 14 9.1 General information . 14 9.2 Bright-field technique 14 9.3 Fluorescence technique 14 10 Assessment . 14 11 Report

11、ing . 15 12 Quality assurance . 15 12.1 Objective of the quality assurance . 17 12.2 Intra-laboratory quality controls . 19 12.2.1 Reagents and staining quality . 19 12.2.2 Functioning of the equipment . 20 12.2.3 Plausibility control . 21 12.3 Storage of positive specimens 21 12.4 External quality

12、control 21 Annex A (informative) Information regarding the sensitivity of microscopy . 22 Bibliography 25 DIN 58943-32:2015-05 3 Vorwort Foreword Die Norm wurde vom Arbeitsausschuss NA 063-05-03 AA Tuberkulose- und Mykobakteriendiagnostik“ des DIN-Normenausschusses Medizin in Zusammenarbeit mit dem

13、Arbeitskreis Mykobakterien (AKM) erarbeitet. Der AKM ist ein Expertengremium aus dem deutschsprachigen Raum, das u. a. Studien zur mykobakteriologischen Diagnostik koordiniert. This standard has been prepared by Arbeitsaus-schuss (Working Committee) NA 063-05-03 AA “Tuberkulose- und Mykobakteriendia

14、gnostik” (Diagnosis of Tuberculosis and Mycobacteria) of DIN-Normenausschuss Medizin (NAMed) (Medical Standards Committee (German Institute for Standardization) in cooperation with Arbeitskreis Mykobakterien (AKM) (Working Group on Mycobacteria). The AKM is a panel of experts based in the German-spe

15、aking area which, among other things, coordinates studies regarding mycobacteriological diagnostics. Diese Norm enthlt sicherheitstechnische Anforderungen in Abschnitt 4. This standard specifies safety regulations in clause 4. DIN 58943, Medizinische Mikrobiologie Tuberku-losediagnostik besteht aus

16、(Beibltter werden nicht aufgefhrt): DIN 58943, Medical microbiology Diagnosis of tuberculosis consists of (supplements are not listed): Teil 3: Kulturelle Methoden zum Nachweis von Mykobakterien Part 3: Detection of mycobacteria by culture methods Teil 4: Primrproben zur Tuberkulose- und Mykobakteri

17、osediagnostik Qualitative und quantitative Anforderungen, Gewinnung, Transport und Aufbewahrung Part 4: Primary samples for the diagnosis of tuberculosis and mycobacteria Qualitative and quantitative requirements, extraction, transport and storage Teil 5: Molekularbiologische Identifizierung und Dif

18、ferenzierung von Tuberkulosebakterien Part 5: Molecular identification and differenti-ation of tubercle bacilli Teil 7: Modifiziertes Lwenstein-Jensen-Kultur-medium zur Anzchtung von Mykobakterien Part 7: Modified Lwenstein-Jensen medium for the growth of mycobacteria Teil 8: Empfindlichkeitsprfung

19、von Tuberkulo-sebakterien gegen Chemotherapeutika Part 8: Methods for the determination of susceptibility of tubercle bacilli to chemothera-peutic agents Teil 9: Phnotypische Differenzierung von Tuberkulosebakterien Part 9: Phenotypic differentiation of tubercle bacilli Teil 32: Mikroskopische Metho

20、den zum Nachweis von Mykobakterien Part 32: Detection of mycobacteria by micro-scopic methods Teil 40: Bewertungskriterien fr kulturelle Schnellverfahren zum Nachweis von Mykobakterien Part 40: Evaluation criteria for fast culture procedures for the detection of mycobacteria DIN 58943-32:2015-05 4 n

21、derungen Amendments Gegenber DIN 58943-32:2011-03 wurden folgende nderungen vorgenommen: In comparison to DIN 58943-32:2011-03, the following amendments have been made: a) die redaktionelle berarbeitung; a) the editorial revision; b) die zeitlichen Abstnde fr Behandlungs-kontrollen in 5.3 wurden akt

22、ualisiert; b) the time intervals for treatment controls in 5.3 were updated; c) die allgemeinen Anforderungen sowie die zur Herstellung von Ausstrichen wurden in Abschnitt 8 angepasst; c) the general requirements and those for the preparation of smears in clause 8 were revised; d) Abschnitt 10 wurde

23、 hinsichtlich der Empfehlung zur Anwendung von molekulargenetischen Techniken bei erstmaligem Nachweis von surefesten Stbchen bei einem Patienten bzw. bei morphologisch/frberisch zweifelhaften Ergebnissen berarbeitet; d) clause 10 was worked over in regards to the recommendation for the use of molec

24、ular-biological techniques in case of first time detection of acid-fast rods related to a patient, but also in regards to questionable results of the morphology assessment by means of staining; e) die Aktualisierung von Tabelle 1; e) the update of table 1; f) die Anpassung von Abschnitt 11 und Absch

25、nitt 12 sowie Anhang A an den Stand der Technik und Wissenschaft. f) the adaption of clause 11 and clause 12 as well as annex A with regards to the current state of science and technology. Frhere Ausgaben Previous edtions DIN 54893-32: 1982-02, 1986-08, 1995-01, 2011-03 DIN 54893-32: 1982-02, 1986-0

26、8, 1995-01, 2011-03 DIN 58943-32:2015-05 5 Einleitung Introduction Auf Grund ihres Zellwandaufbaus sind Myko-bakterien nach Anfrbung mit speziellen Farb-stoffen im Gegensatz zu anderen Bakterien selbst mit einem Salzsure-Alkohol-Gemisch nur sehr schwer zu entfrben. Der mikroskopische Nachweis von so

27、 genannten surefesten Stbchenbakterien (im Folgenden nur noch surefeste Stbchen“ genannt) ist folglich mit hoher Wahrscheinlichkeit dem Nachweis von Mykobakterien gleichzusetzen. Unlike with other bacteria, with mycobacteria it is very hard, even by applying a mixture of hydro-chloric acid and alcoh

28、ol, to de-stain them after they have been stained with special dyes; this is due to the bacterias cell wall structure. The microscopic detection of so-called acid-fast rod-shaped bacteria (in the following referred to as “acid-fast bacilli”) can, therefore, very likely be equated with the detection

29、of mycobacteria. Vorteile der Mikroskopie: Die Mikroskopie ist eine schnelle und kostengnstige Methode. Sie erlaubt mit einer hohen Spezifitt die Erkennung isolie-rungsbedrftiger hochinfektiser Patienten mit Lun-gentuberkulose. Advantages of microscopy: Microscopy is a fast and cost-effective method

30、. It allows recognizing, with a high specifity, highly infectious patients suffering from lung tuberculosis and requiring isolation. Nachteile der Mikroskopie: Die Mikroskopie ist ungeeignet fr den diagnostischen Ausschluss einer Tuberkulose, da nur bei etwa der Hlfte der Patienten mit Lungentuberku

31、lose und bei weniger als einem Drittel der extrapulmonalen Tuberkulosen die Verdachtsdiagnose mikroskopisch erhrtet werden kann. Die mikroskopischen Methoden nach dieser Norm lassen keine Differenzierung zwischen Tuberkulosebakterien und nichttuberkulsen Myko-bakterien zu. Disadvantages of microscop

32、y: Microscopy is un-suitable for the diagnostic ruling-out of tuberculosis, as only with approximately half the patients suffer-ing from lung tuberculosis and with less than one third of the cases of extrapulmonary tuberculosis, the tentative diagnosis can be substantiated micro-scopically. The micr

33、oscopic methods described in this standard do not allow a differentiation to be made between tubercle bacilli and non-tuberculous mycobacteria. Die Mikroskopie erlaubt keine Aussage ber die Vermehrungsfhigkeit der Mykobakterien. Microscopy does not allow any statements to be made regarding the multi

34、plication capacity of mycobacteria. DIN 58943-32:2015-05 6 1 Anwendungsbereich 1 Scope Diese Norm gilt fr mikroskopische Untersuchungen zum Nachweis von Mykobakterien aus humanem Untersuchungsgut. This standard applies to microscopic examinations for the purposes of detecting mycobacteria in human s

35、pecimens. 2 Normative Verweisungen 2 Normative references Die folgenden Dokumente, die in diesem Dokument teilweise oder als Ganzes zitiert werden, sind fr die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gi

36、lt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated references,

37、the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies. DIN 58943-3, Medizinische Mikrobiologie Tuberkulosediagnostik Teil 3: Kulturelle Methoden zum Nachweis von Mykobakterien DIN 58943-3, Medical microbiology Diagnosis of tuberculosis Part 3: Detection of mycobacteria by

38、culture methods DIN 58943-4, Medizinische Mikrobiologie Tuberkulosediagnostik Teil 4: Primrproben zur Tuberkulose- und Mykobakteriosediagnostik Qualitative und quantitative Anforderungen, Gewinnung, Transport und Aufbewahrung DIN 58943-4, Medical microbiology Diagnosis of tuberculosis Part 4: Primar

39、y samples for the diagnosis of tuberculosis and mycobacteria Qualitative and quantitative requirements, extraction, transport and storage DIN 58959-3, Qualittsmanagement in der medizi-nischen Mikrobiologie Teil 3: Anforderungen an Untersuchungsauftrag und Befundbericht DIN 58959-3, Medical microbiol

40、ogy Quality management in medical microbiology Part 3: Requirements for request and report forms DIN 58959-4, Qualittsmanagement in der medizinischen Mikrobiologie Teil 4: Anforderungen an lichtmikroskopische Untersuchungen DIN 58959-4, Medical microbiology Quality management in medical microbiology

41、 Part 4: Requirements for investigations using light microscopes DIN EN 12128, Biotechnik Laboratorien fr Forschung, Entwicklung und Analyse Sicherheitsstufen mikrobiologischer Laboratorien, Gefahrenbereich, Rumlichkeiten und technische Sicherheitsanforderungen DIN EN 12128, Biotechnology Laboratori

42、es for research, development and analysis Containment levels of microbiology laboratories, areas of risk, localities and physical safety requirements DIN EN ISO 15189, Medizinische Laboratorien Besondere Anforderungen an die Qualitt und Kompetenz DIN EN ISO 15189, Medical laboratories Particular req

43、uirements for quality and competence MiQ, Qualittsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik. Mauch, H. (Hrsg.); Podbielski, A. (Hrsg.); Herrmann, M. (Hrsg.); Kniehl, E. (Hrsg.). MiQ 5: Tuberkulose, Mykobakteriose. Kchler, R., G. E. Pfyffer, S. Rsch-Gerdes, J. Beer, H. Mauch (1998

44、), bzw. in der jeweils aktuellen Ausgabe. MiQ, Qualittsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik. Mauch, H. (ed.); Podbielski, A. (ed.); Herrmann, M. (ed.); Kniehl, E. (ed.). MiQ 5: Tuberkulose, Mykobakteriose. Kchler, R., G. E. Pfyffer, S. Rsch-Gerdes, J. Beer, H. Mauch (1998),

45、or the respectively actual edition. Deutsche Post: Regelungen fr die Befrderung von gefhrlichen Stoffen und Gegenstnden Teil 1: Brief National (gltig ab 01.08.2009) Deutsche Post: Regelungen fr die Befrderung von gefhrlichen Stoffen und Gegenstnden, Teil 1: Brief National (Regulations of the Deutsch

46、e Post for the transport of infectious substances and objects, Part 1: Letter, national) (valid as of 2009-08-01) DIN 58943-32:2015-05 7 Europisches bereinkommen ber die internationale Befrderung gefhrlicher Gter auf der Strae (ADR)1)Europisches bereinkommen ber die internationale Befrderung gefhrli

47、cher Gter auf der Strae (ADR) (European Agreement concerning the International Carriage of Dangerous Goods by Road)1)Gefahrgutverordnung Strae und Eisenbahn GGVSE, Verordnung ber die innerstaatliche und grenzberschreitende Befrderung gefhrlicher Gter auf der Strae und mit der Eisenbahn 1)Gefahrgutve

48、rordnung Strae und Eisenbahn GGVSE, Verordnung ber die innerstaatliche und grenzberschreitende Befrderung gefhrlicher Gter auf der Strae und mit der Eisenbahn) (Ordinance on the intra- and interstate transport of dangerous goods by road and rail) 1)Infektionsschutzgesetz vom 20.Juli 2000 (BGBl. I S.

49、 1045), das zuletzt durch Artikel 2a des Gesetzes vom 17. Juli 2009 (BGBl. I S. 2091) gendert worden ist Infektionsschutzgesetz (German Protection against Infection Act) of 20 July 2000 (BGBl. I (Federal Law Gazette I), p. 1045), as last amended by Article 2a of the Act of 17 July 2009 (BGBl. I, p. 2091)1)3 Begriffe 3 Terms and definitions Fr die Anwendung dieses Dokuments