DIN EN ISO 13366-2-2007 Milk - Enumeration of somatic cells - Part 2 Guidance on the operation of fluoro-opto-electronic counters (ISO 13366-2 2006) English version of DIN EN ISO 1.pdf

1、Januar 2007DEUTSCHE NORM Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DINPreisgruppe 12DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin, gestattet.ICS 67.100.10!,nk

2、4“9757217www.din.deDDIN EN ISO 13366-2Milch Zhlung somatischer Zellen Teil 2: Leitfaden zum Betrieb fluoreszenzoptoelektronischer Zhlgerte(ISO 13366-2:2006);Deutsche Fassung EN ISO 13366-2:2006Milk Enumeration of somatic cells Part 2: Guidance on the operation of fluoro-opto-electronic counters (ISO

3、 13366-2:2006);German version EN ISO 13366-2:2006Lait Dnombrement des cellules somatiques Partie 2: Lignes directrices pour la mise en oeuvre des compteursfluoro-opto-lectroniques (ISO 13366-2:2006);Version allemande EN ISO 13366-2:2006Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 BerlinEr

4、satz frDIN EN ISO 13366-2:1997-09www.beuth.deGesamtumfang 21 SeitenDIN EN ISO 13366-2:2007-01 2 Nationales Vorwort Diese Europische Norm fllt in den Zustndigkeitsbereich des Technischen Komitees CEN/TC 302 Milch und Milchprodukte Probenahme- und Untersuchungsverfahren“ (Sekretariat: Niederlande). Di

5、e ihr zu Grunde liegende Internationale Norm ISO 13366-2:2006 wurde vom Unterkomitee SC 5 Milch und Milchpro-dukte“ (Sekretariat: Niederlande) des Technischen Komitees ISO/TC 34 Lebensmitteler-zeugnisse“ (Sekre-tariat: Ungarn) ausgearbeitet. Auf Grund der Ergebnisse des parallelen Abstimmungsverfahr

6、ens wurde ISO 13366-2:2006 als Europische Norm EN ISO 13366-2 bernommen. Die Mitarbeit des DIN beim Europischen Komitee fr Normung (CEN) wird fr den Bereich Mikrobiologie des CEN/TC 302 Milch und Milchprodukte Probenahme- und Untersuchungsverfahren“ (Sekretariat: Nieder-lande) ber den DIN-Arbeitsaus

7、schuss Mikrobiologische Untersuchung von Milch und Milchprodukten“ des Normenausschusses Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) wahrgenommen. DIN EN ISO 13366, Milch Zhlung somatischer Zellen besteht aus: Teil 1: Mikroskopisches Verfahren (Referenzverfahren) Teil 2: Leitfaden zum Betrie

8、b fluoreszenzoptoelektronischer Zhlgerte Fr die in diesem Dokument zitierten Internationalen Normen wird im Folgenden auf die entsprechenden Deutschen Normen hingewiesen: ISO 707 siehe DIN EN ISO 707 ISO 5725-1 siehe DIN ISO 5725-1 ISO 5725-2 siehe DIN ISO 5725-2 ISO 13366-1 siehe DIN EN ISO 13366-1

9、 ISO/IEC Guide 43-1 siehe DIN V 55394-1 nderungen Gegenber DIN EN ISO 13366-2:1997-09 wurden folgende nderungen vorgenommen: a) die Norm wurde als allgemeiner Leitfaden fr den Betrieb fluoreszenzoptoelektronischer Zhleinrichtun-gen neu formuliert; b) der Anwendungsbereich wurde auf Milch anderer Tie

10、rarten erweitert; c) die Abschnitte Kalibrierung“ und Prfung der Leistungsmerkmale bei Routineuntersuchungen“ wurden neu aufgenommen; d) der Abschnitt Przision“ wurde berarbeitet und ergnzt. Frhere Ausgaben DIN EN ISO 13366-2: 1997-09 DIN EN ISO 13366-2:2007-01 3 Nationaler Anhang NA (informativ) Li

11、teraturhinweise DIN V 55394-1, Eignungsprfung durch Vergleiche zwischen Laboratorien Teil 1: Entwicklung und Durch-fhrung von Programmen fr die Eignungsprfung DIN EN ISO 707, Milch und Milchprodukte Leitfaden zur Probenahme DIN EN ISO 13366-1, Milch Zhlung somatischer Zellen Teil 1: Mikroskopisches

12、Verfahren (Referenz-verfahren) DIN ISO 5725-1, Genauigkeit (Richtigkeit und Przision) von Messverfahren und Messergebnissen Teil 1: Allgemeine Grundlagen und Begriffe DIN ISO 5725-2, Genauigkeit (Richtigkeit und Przision) von Messverfahren und Messergebnissen Teil 2: Grundlegende Methode fr die Ermi

13、ttlung der Wiederhol- und Vergleichprzision eines vereinheitlichten Messverfahrens DIN EN ISO 13366-2:2007-01 4 Leerseite EUROPISCHE NORM EUROPEAN STANDARD NORME EUROPENNE EN ISO 13366-2 Oktober 2006 ICS 67.100.10 Ersatz fr EN ISO 13366-2:1997 Deutsche Fassung Milch Zhlung somatischer Zellen Teil 2:

14、 Leitfaden zum Betrieb fluoreszenzoptoelektronischer Zhlgerte (ISO 13366-2:2006) Milk Enumeration of somatic cells Part 2: Guidance on the operation of fluoro-opto-electronic counters (ISO 13366-2:2006) Lait Dnombrement des cellules somatiques Partie 2: Lignes directrices pour la mise en oeuvre des

15、compteurs fluoro-opto-lectroniques (ISO 13366-2:2006) Diese Europische Norm wurde vom CEN am 29. September 2006 angenommen. Die CEN-Mitglieder sind gehalten, die CEN/CENELEC-Geschftsordnung zu erfllen, in der die Bedingungen festgelegt sind, unter denen dieser Europischen Norm ohne jede nderung der

16、Status einer nationalen Norm zu geben ist. Auf dem letzten Stand befindliche Listendieser nationalen Normen mit ihren bibliographischen Angaben sind beim Management-Zentrum oder bei jedem CEN-Mitglied auf Anfrage erhltlich. Diese Europische Norm besteht in drei offiziellen Fassungen (Deutsch, Englis

17、ch, Franzsisch). Eine Fassung in einer anderen Sprache,die von einem CEN-Mitglied in eigener Verantwortung durch bersetzung in seine Landessprache gemacht und dem Management-Zentrum mitgeteilt worden ist, hat den gleichen Status wie die offiziellen Fassungen. CEN-Mitglieder sind die nationalen Normu

18、ngsinstitute von Belgien, Dnemark, Deutschland, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland,Irland, Island, Italien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien,Schweden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republi

19、k, Ungarn, dem Vereinigten Knigreich und Zypern.Management-Zentrum: rue de Stassart, 36 B-1050 Brssel 2006 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten.Ref. Nr. EN ISO 13366-2:2006 DEUROPISCHES KOMITEE F

20、R NORMUNGEUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATIONCOMIT EUROPEN DE NORMALISATIONEN ISO 13366-2:2006 (D) 2 Inhalt Seite Vorwort 3 1 Anwendungsbereich .4 2 Normative Verweisungen4 3 Begriffe .4 4 Kurzbeschreibung .4 5 Faktoren, die die Messergebnisse beeinflussen5 5.1 Probenflaschen5 5.2 Probenahme .5 5.

21、3 Konservierung5 5.4 Probenlagerung und -transport6 5.5 Strsubstanzen6 5.6 Probenqualitt whrend der Untersuchung7 5.7 Angewendete Chemikalien .7 5.8 Zustand der Gerte7 5.9 Arbeitsfaktor.8 5.10 Zu untersuchende Volumina 8 6 Kalibrierung8 6.1 Referenzmaterialien.8 6.2 Kalibrierverfahren. 10 7 Probenah

22、me 11 8 Bestimmung 11 9 Prfung der Leistungsmerkmale bei Routineuntersuchungen . 12 9.1 Untersuchung von Blindproben 12 9.2 Verschleppung 12 9.3 Verhltnis zwischen Volumen der Reagenzien und Volumen der Untersuchungsprobe . 12 9.4 Versuchsprfungen 12 9.5 Zustzliche Gerteberwachung 13 9.6 Wiederholpr

23、zision. 13 9.7 Vergleichprzision innerhalb des Labors 13 9.8 Externe Vergleiche 14 10 Besondere Anmerkungen fr die Anwendung auf Milch anderer Tierarten. 14 10.1 Allgemeines. 14 10.2 Kuhmilch 14 10.3 Ziegenmilch. 14 10.4 Schafsmilch. 15 10.5 Bffelmilch 15 11 Przision 15 11.1 Wiederholprzision. 15 11

24、.2 Vergleichprzision innerhalb des Labors 15 11.3 Vergleichprzision 16 12 Untersuchungsbericht . 16 Literaturhinweise . 17 EN ISO 13366-2:2006 (D) 3 Vorwort Dieses Dokument (EN ISO 13366-2:2006) wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34 Lebensmittelerzeugnisse“ in Zusammenarbeit mit dem Technischen Ko

25、mitee CEN/TC 302 Milch und Milchprodukte - Probenahme- und Untersuchungsverfahren“ erarbeitet, dessen Sekretariat vom NEN gehalten wird. Diese Europische Norm muss den Status einer nationalen Norm erhalten, entweder durch Verffentlichung eines identischen Textes oder durch Anerkennung bis April 2007

26、, und etwaige entgegenstehende nationale Normen mssen bis April 2007 zurckgezogen werden. Entsprechend der CEN/CENELEC-Geschftsordnung sind die nationalen Normungsinstitute der folgenden Lnder gehalten, diese Europische Norm zu bernehmen: Belgien, Dnemark, Deutschland, Estland, Finnland, Frankreich,

27、 Griechenland, Irland, Island, Italien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, Schweiz, Slowakei, Slowenien, Spanien, Tschechische Republik, Ungarn, Vereinigtes Knigreich und Zypern. Anerkennungsnotiz Der Text von ISO 13366-2:2006 w

28、urde vom CEN als EN ISO 13366-2:2006 ohne irgendeine Abnderung genehmigt. EN ISO 13366-2:2006 (D) 4 1 Anwendungsbereich Dieser Teil von ISO 13366 | IDF 148 gibt Leitlinien zu den Betriebsbedingungen der Zhlung somatischer Zellen in Rohmilch und chemisch konservierter Milch. Die Zhlung erfolgt mit ei

29、nem fluoreszenz-optoelektronischen Zhlgert fr somatische Zellen, in der entweder ein Verfahren mit rotierender Scheibe oder die Durchflusszytometrie im Zhlbereich eingesetzt wird. Der Leitfaden ist anwendbar fr die Zhlung somatischer Zellen in Rohmilch. Der Leitfaden ist auch fr die Zhlung in Rohmil

30、ch anderer Tierarten wie Ziegen, Schafen und Bffeln anwendbar, falls die festgelegten Vorbedingungen eingehalten werden. 2 Normative Verweisungen Die folgenden zitierten Dokumente sind fr die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe.

31、 Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). ISO 8196-1 | IDF 128-1, Milk Definition and evaluation of the overall accuracy of indirect methods of milk analysis Part 1: Analytical attributes of indirect methods ISO 8196-2 |

32、IDF 128-2, Milk Definition and evaluation of the overall accuracy of indirect methods of milk analysis Part 2: Calibration and quality control in the dairy laboratory ISO 13366-1 | IDF 148-1, Milk Enumeration of somatic cells Part 1: Microscopic method (Reference method) ISO Guide 34, General requir

33、ements for the competence of reference material producers ISO Guide 43-1, Proficiency testing by interlaboratory comparisons Part 1: Development and operation of proficiency testing schemes 3 Begriffe Fr die Anwendung dieses Dokuments gelten die Begriffe nach ISO 8196-1 | IDF 128-1 und ISO 8196-2 |

34、IDF 128-2 sowie die folgenden Begriffe. 3.1 Referenzverfahren in ISO 13366-1 | IDF 148-1 beschriebenes Verfahren zur Zhlung somatischer Zellen 3.2 somatische Zellen Zellen, die eine ber dem Schwellenwert liegende Fluoreszenzintensitt durch die Anfrbung der DNS in ihrem Zellkern zeigen ANMERKUNG Die

35、Anzahl der somatischen Zellen wird in Zellen je Milliliter angegeben. 4 Kurzbeschreibung Fluoreszenzoptoelektronische Zhlgerte bestehen aus Baugruppen zur Aufnahme der Reagenzien und der Untersuchungsprobe, einer Mischvorrichtung und einer Zhlvorrichtung. In der Mischvorrichtung wird die Probe mit e

36、inem Puffer und einer Farblsung gemischt. Ein Teil der resultierenden Mischung wird in die Zhleinrichtung berfhrt und auf einen Objekttrger gebracht. Jeder angefrbte Partikel, der mit einem Fluoreszenzmikroskop beobachtet wird, produziert einen elektrischen Impuls, der gefiltert, verstrkt und aufgez

37、eichnet wird. Die Hhenverteilung des resultierenden Impulses wird elektronisch verarbeitet, wobei eine Trennung zwischen Strsignalen und den den gefrbten somatischen Zellen zugeordneten Signalen vorgenommen wird. Die Trennstufe kann feststehend oder dynamisch sein. EN ISO 13366-2:2006 (D) 5 Im Misch

38、bereich werden genau kontrollierte Volumina der Untersuchungsprobe und Puffer-/Farblsung dosiert und gemischt. Die Mischung kann in einem Mischbecher, einer Mischkammer, einer Zentrifuge, einer Probenschleife oder in der zur Durchflusszelle fhrenden Rhre erfolgen. In der Zhlvorrichtung kann entweder

39、 Zytometrie auf einer Scheibe oder Durchflusszytometrie zum Einsatz kommen. Bei Anwendung von Zytometrie auf einer Scheibe wird ein dnner Film der Mischung durch eine Dse auf die Oberseite einer rotierenden Scheibe gebracht. Diese rotierende Oberflche dient als beweglicher Objekttrger fr ein Fluores

40、zenzmikroskop. Bei der Durchflusszytometrie wird ein Teil der Mischung in einen Hochgeschwindigkeitsfluss mit umhllender Flssigkeit in eine Kapillar-Durchflusszelle gebracht. Durch die Beschleunigung bildet die Mischung einen dnnen Strang, in welchem die somatischen Zellen dynamisch fokussiert und a

41、ngeordnet werden. Dieser Strang durchluft dann das Objektiv eines Fluoreszenzmikroskops. Einige Instrumente enthalten in der Zhlvorrichtung zwei Kanle. Hinsichtlich der analytischen Qualittssicherung sollte dieser Aufbau als gleichwertig zum Arbeiten mit zwei unabhngigen Einheiten betrachtet werden.

42、 Somit sollte die Leistungsfhigkeit fr jeden Kanal separat bewertet werden. 5 Faktoren, die die Messergebnisse beeinflussen 5.1 Probenflaschen Probenflaschen sollten fr die Verwendung geeignet sein, d. h. zur berfhrung der Untersuchungsprobe vom Probenahmeort zum Laboratorium ohne Verlust oder Besch

43、digung. Es ist darauf zu achten, dass die Probenflaschen bruchsicher sind und gengend Volumen bieten. Ein zu groes freies Volumen kann die Butterung frdern, ein zu kleines Volumen kann Probleme beim Mischen verursachen. 5.2 Probenahme 5.2.1 Allgemeines Probenahmematerialien (z. B. Probenflaschen, Be

44、cher und Probenahmegerte) sollten sauber und trocken sein. Falls automatische Probenahmeeinrichtungen angewendet werden, sollten sie in geeigneter Weise validiert worden sein. Untersuchungsproben sollten umgehend nach der Probenahme gekhlt werden und vorzugsweise bei einer Temperatur zwischen 0 C un

45、d 6 C (siehe 5.4) gelagert werden. Dies ist einer Konservierung vorzuziehen. Falls die Konservierung jedoch notwendig ist, sollte die vorgekhlte Probe wie in 5.3 angegeben konserviert werden. 5.2.2 Proben von Milch aus Grogebinden Sachgerechtes Mischen der Milch aus Grogebinden, aus der die Probenah

46、me erfolgen soll, ist unerlsslich. Bei ungengendem Rhren werden sich die somatischen Zellen in den oberen Schichten konzentrieren. 5.2.3 Milchproben von einzelnen Tieren Die Freisetzung somatischer Zellen in der Milch whrend des Melkens kann ungleichmig sein. Um eine reprsentative Untersuchungsprobe

47、 zu erhalten, ist es unerlsslich, dass eine reprsentative Probe des gesamten Gemelks gewonnen wird. 5.3 Konservierung Falls eine chemische Konservierung fr notwendig gehalten wird, sollte die gekhlte Untersuchungsprobe (5.2.1) so schnell wie mglich konserviert werden, in jedem Fall jedoch innerhalb

48、von 24 h nach der Probenahme. In allen Fllen sollte die Untersuchungsprobe bis zur Zugabe des Konservierungsmittels khl (0 C bis 6 C) gelagert werden. EN ISO 13366-2:2006 (D) 6 Folgende Konservierungsmittel sind geeignet: a) Borsure: die Endkonzentration in der Untersuchungsprobe sollte 0,6 g/100 ml

49、 nicht berschreiten. Die so konservierten Proben drfen bei 6 C bis 12 C fr bis zu 24 h weiter gelagert werden. b) Natriumazid: die Endkonzentration in der Untersuchungsprobe sollte 0,024 g/100 ml nicht berschreiten. Die so konservierten Proben drfen bei 2 C bis 10 C fr weitere 72 h gelagert werden. c) Bronopol (2-Brom-2-nitro-1,3-pro