DIN EN ISO 9167-1-2013 Rapeseed - Determination of glucosinolate content - Part 1 Method using high-performance liquid chromatography (ISO 9167-1 1992 + Amd 1 2013) German version .pdf

1、Dezember 2013DEUTSCHE NORM Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DINPreisgruppe 12DIN Deutsches Institut fr Normung e. V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e. V., Berlin, gestattet.ICS 67.200.20

2、!$SI“1974838www.din.deDDIN EN ISO 9167-1Rapssamen Bestimmung des Glucosinolatgehaltes Teil 1: HPLC-Verfahren (ISO 9167-1:1992 + Amd 1:2013);Deutsche Fassung EN ISO 9167-1:1995 + A1:2013Rapeseed Determination of glucosinolate content Part 1: Method using high-performance liquid chromatography(ISO 916

3、7-1:1992 + Amd 1:2013);German version EN ISO 9167-1:1995 + A1:2013Graines de colza Dosage des glucosinolates Partie 1: Mthode par chromatographie liquide haute performance(ISO 9167-1:1992 + Amd 1:2013);Version allemande EN ISO 9167-1:1995 + A1:2013Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10

4、772 BerlinErsatz frDIN EN ISO 9167-1:1995-09www.beuth.deGesamtumfang 21 SeitenDIN EN ISO 9167-1:2013-12 2 Nationales Vorwort Dieses Dokument (EN ISO 9167-1:1995 + A1:2013) wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34 Food products“ in Zusammenarbeit mit dem Technischen Komitee CEN/TC 307 lsamen, tierisch

5、e und pflanzliche Fette und le und deren Nebenprodukte Probenahme- und Untersuchungsverfahren“ erarbeitet, dessen Sekretariat vom AFNOR (Frankreich) gehalten wird. Das zustndige deutsche Gremium ist der Arbeitsausschuss NA 057-05-05 AA Gemeinschaftsausschuss fr die Analytik von Fetten, len, Fettprod

6、ukten, verwandten Stoffen und Rohstoffen“ (GA Fett) der Deutschen Gesellschaft fr Fettwissenschaft (DGF) und des Normenausschusses Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DIN. Diese Norm beinhaltet die bisherige EN ISO 9167-1:1995 und die nderung 1, die vom CEN am 5. Juli 2013 angenom

7、men wurde. Anfang und Ende der durch die nderung eingefgten oder genderten Texte sind jeweils durch nderungsmarken !“ angegeben. Fr die in diesem Dokument zitierten Internationalen Normen wird im Folgenden auf die entsprechenden Deutschen Normen hingewiesen: ISO 542 siehe DIN EN ISO 542 ISO 664 sieh

8、e DIN EN ISO 664 ISO 665 siehe DIN EN ISO 665 ISO 3696 siehe DIN ISO 3696 ISO 5725-1 siehe DIN ISO 5725-1 ISO 5725-2 siehe DIN ISO 5725-2 nderungen Gegenber DIN EN ISO 9167-1:1995-09 wurden folgende nderungen vorgenommen: a) Im Unterabschnitt 9.1 wurde die Formel fr die Berechnung des Gehalts der ei

9、nzelnen Glucosinolate erneuert und die Aufzhlung der Variablen ergnzt; b) Bild 1 von Abschnitt 8.6.2 nach Abschnitt 11 verschoben; c) Tabelle 1 von Abschnitt 11 nach Abschnitt 10.1 verschoben; d) Norm redaktionell berarbeitet und den derzeit gltigen Gestaltungsregeln angepasst. Frhere Ausgaben DIN E

10、N ISO 9167-1: 1995-09 DIN EN ISO 9167-1:2013-12 3 Nationaler Anhang NA (informativ) Literaturhinweise DIN EN ISO 542, lsamen Probenahme DIN EN ISO 664, lsamen Verkleinerung der Laboratoriumsprobe auf die Untersuchungsprobe DIN EN ISO 665, lsamen Bestimmung des Wassergehaltes und der flchtigen Bestan

11、dteile DIN ISO 3696, Wasser fr analytische Zwecke Anforderungen und Prfungen DIN ISO 5725-1, Genauigkeit (Richtigkeit und Przision) von Meverfahren und Meergebnissen Teil 1: Allgemeine Grundlagen und Begriffe DIN ISO 5725-2, Genauigkeit (Richtigkeit und Przision) von Messverfahren und Messergebnisse

12、n Teil 2: Grundlegende Methode fr Ermittlung der Wiederhol- und Vergleichprzision eines vereinheitlichten Messverfahrens DIN EN ISO 9167-1:2013-12 4 Leerseite EUROPISCHE NORM EUROPEAN STANDARD NORME EUROPENNE EN ISO 9167-1 August 1995 +A1 Juli 2013 ICS 67.200.20 Deutsche Fassung Rapssamen Bestimmung

13、 des Glucosinolatgehaltes Teil 1: HPLC-Verfahren (ISO 9167-1:1992 + Amd 1:2013) Rapeseed Determination of glucosinolate content Part 1: Method using high-performance liquid chromatography (ISO 9167-1:1992 + Amd 1:2013) Graines de colza Dosage des glucosinolates Partie 1: Mthode par chromatographie l

14、iquide haute performance (ISO 9167-1:1992 + Amd 1:2013) Diese Europische Norm wurde vom CEN am 24. Mai 1995 angenommen. Die nderung A1 modifiziert die Europische Norm EN ISO 9167-1:1995. Sie wurde vom CEN am 5. Juli 2013 angenommen. Die CEN-Mitglieder sind gehalten, die CEN-CENELEC-Geschftsordnung z

15、u erfllen, in der die Bedingungen festgelegt sind, unter denen dieser Europischen Norm ohne jede nderung der Status einer nationalen Norm zu geben ist. Auf dem letzten Stand befindliche Listen dieser nationalen Normen mit ihren bibliographischen Angaben sind beim Management-Zentrum des CEN-CENELEC o

16、der bei jedem CEN-Mitglied auf Anfrage erhltlich. Diese Europische Norm besteht in drei offiziellen Fassungen (Deutsch, Englisch, Franzsisch). Eine Fassung in einer anderen Sprache, die von einem CEN-Mitglied in eigener Verantwortung durch bersetzung in seine Landessprache gemacht und dem Management

17、-Zentrum mitgeteilt worden ist, hat den gleichen Status wie die offiziellen Fassungen. CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Bulgarien, Dnemark, Deutschland, der ehemaligen jugoslawischen Republik Mazedonien, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, It

18、alien, Kroatien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik, Trkei, Ungarn, dem Vereinigten Knigreich und Zypern. EUROPISCHES KOMITEE FR NORMUNG EUROPEAN COM

19、MITTEE FOR STANDARDIZATION COMIT EUROPEN DE NORMALISATION Management-Zentrum: Avenue Marnix 17, B-1000 Brssel 2013 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten. Ref. Nr. EN ISO 9167-1:1995 + A1:2013 D EN

20、 ISO 9167-1:1995 + A1:2013 (D) 2 Inhalt Seite Vorwort 3!Vorwort der nderung“ .31 Anwendungsbereich .42 Normative Verweisungen 43 Kurzbeschreibung .44 Reagenzien .45 Gerte 86 Probenahme .97 Vorbereitung der Untersuchungsprobe 98 Durchfhrung .98.1 Einwaage 98.2 Extraktion der Glucosinolate 98.3 Herste

21、llung der lonen-Austauschersulen 108.4 Reinigung und Desulfatierung 108.5 Blindversuch . 108.6 Chromatographie 118.6.1 Gerteeinstellung 118.6.2 Untersuchung 118.6.3 Auswertung der Chromatogramme 119 Angabe der Ergebnisse 129.1 Berechnung des Gehalts der einzelnen Glucosinolate 129.2 Kalibrierfaktore

22、n . 129.3 Berechnung des Gesamtgehalts an Glucosinolaten 1310 Przision 1310.1 Ergebnisse des Ringversuchs 1310.2 Wiederholprzision . 1310.3 Vergleichprzision 1311 Untersuchungsbericht . 14Anhang A (informativ) Literaturhinweise . 16Anhang ZA (informativ) Normative Verweisungen auf internationale Pub

23、likationen mit ihren entsprechenden europischen Publikationen . 17DIN EN ISO 9167-1:2013-12 EN ISO 9167-1:1995 + A1:2013 (D) 3 Vorwort Der Text der Internationalen Norm ISO/TC 34 Agricultural food products“ der International Organization for Standardization (ISO) wurde als Europische Norm durch das

24、Technische Komitee CEN/TC 307 lsamen, tierische und pflanzliche Fette und le und deren Nebenprodukte Probenahme- und Untersuchungsverfahren“ bernommen. Diese Europische Norm muss den Status einer nationalen Norm erhalten, entweder durch Verffentlichung eines identischen Textes oder durch Anerkennung

25、 bis Februar 1996, und etwaige entgegenstehende nationale Normen mssen bis Februar 1996 zurckgezogen werden. Entsprechend der CEN/CENELEC-Geschftsordnung sind folgende Lnder gehalten, diese Europische Norm zu bernehmen: Belgien, Dnemark, Deutschland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Islan

26、d, Italien, Luxemburg, Niederlande, Norwegen, sterreich, Portugal, Schweden, Schweiz, Spanien und das Vereinigte Knigreich. Anerkennungsnotiz Der Text der Internationalen Norm ISO 9167-1:1992 wurde von CEN als Europische Norm ohne irgendeine Abnderung genehmigt. ANMERKUNG Die normativen Verweisungen

27、 auf internationale Publikationen sind im Anhang ZA (normativ) aufgefhrt. !Vorwort der nderung“ ! Dieses Dokument (EN ISO 9167-1:1995/A1:2013) wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34 Lebensmittelprodukte“ in Zusammenarbeit mit dem Technischen Komitee CEN/TC 307 lsamen, tierische und pflanzliche Fett

28、e und le und deren Nebenprodukte Probenahme- und Untersuchungsverfahren“ erarbeitet, dessen Sekretariat vom AFNOR gehalten wird. Diese nderung zur Europischen Norm EN ISO 9167-1:1995 muss den Status einer nationalen Norm erhalten, entweder durch Verffentlichung eines identischen Textes oder durch An

29、erkennung bis Januar 2014, und etwaige entgegenstehende nationale Normen mssen bis Januar 2014 zurckgezogen werden. Es wird auf die Mglichkeit hingewiesen, dass einige Texte dieses Dokuments Patentrechte berhren knnen. CEN und/oder CENELEC sind nicht dafr verantwortlich, einige oder alle diesbezglic

30、hen Patentrechte zu identifizieren. Entsprechend der CEN/CENELEC-Geschftsordnung sind die nationalen Normungsinstitute der folgenden Lnder gehalten, diese Europische Norm zu bernehmen: Belgien, Bulgarien, Dnemark, Deutschland, die ehemalige jugoslawische Republik Mazedonien, Estland, Finnland, Frank

31、reich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Kroatien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, Schweiz, Slowakei, Slowenien, Spanien, Tschechische Republik, Trkei, Ungarn, Vereinigtes Knigreich und Zypern. Anerkennungsnotiz Der Text

32、 von ISO 9167-1:1992/Amd 1:2013 wurde vom CEN als EN ISO 9167-1:1995/A1:2013 ohne irgendeine Abnderung genehmigt. “ DIN EN ISO 9167-1:2013-12 EN ISO 9167-1:1995 + A1:2013 (D) 4 1 Anwendungsbereich Dieser Teil von ISO 9167 legt ein Verfahren zur Bestimmung der verschiedenen Glucosinolate in Rapssamen

33、 (Colza) mittels Hochleistungsflssigkeitschromatographie fest. ANMERKUNG 1 Glucosinolate, die am Glucose-Molekl substituiert sind, werden mit diesem Verfahren nicht erfasst, sind fr handelsbliche Rapssamen jedoch auch von untergeordneter Bedeutung. ANMERKUNG 2 Ein Schnellverfahren zur Bestimmung der

34、 Anteile der Glucosinolate unter Anwendung der Rntgenfluoreszenzspektroskopie ist in ISO 9267-2 festgelegt. 2 Normative Verweisungen Die folgenden Normen enthalten Festlegungen, die durch Verweisung in diesem Text Bestandteil der vorliegenden Norm sind. Zum Zeitpunkt der Verffentlichung dieser Norm

35、gelten die angegebenen Ausgaben. Alle Normen unterliegen der berarbeitung, und Anwender dieser Norm werden gebeten, die jeweils neueste Ausgabe der im Folgenden genannten Normen anzuwenden. Mitglieder von lEC und ISO fhren Verzeichnisse der gltigen Internationalen Normen. ISO 664:1990, Oilseeds Redu

36、ction of laboratory sample to test sample ISO 665:1977, Oilseeds Determination of moisture and volatile matter content ISO 3696:1987, Water for analytical use Specification and test methods 3 Kurzbeschreibung Extraktion der Glucosinolate mit Methanol, danach Reinigung sowie enzymatische Desulfatieru

37、ng mit lonenaustauscherharzen. Bestimmung mittels Hochleistungsflssigkeitschromatographie (HPLC) an einer Umkehrphase und Gradientenelution mit anschlieender UV-Detektion. 4 Reagenzien Soweit nicht anders angegeben, sind Reagenzien mit dem Reinheitsgrad zur Analyse“ sowie Wasser zu verwenden, das de

38、r Qualitt 2 nach ISO 3696 entspricht. 4.1 Methanol-Lsung, HPLC-Qualitt, 70 % (V/V). 4.2 Natriumacetat, 0,02 mol/l bei pH 4,0. 4.3 Natriumacetat-Lsung, 0,2 mol/l. 4.4 Imidazolformiat-Lsung, 6 mol/l. 204 g Imidazol-Puffersubstanz werden in einem 500-ml-Messkolben in 113 ml Ameisensure gelst und bis zu

39、r Marke mit Wasser aufgefllt. 4.5 Interner Standard, entweder Sinigrin-Monohydrat (Kalium-Allylglucosinolat-Monohydrat, Mr= 415,49) (siehe 4.5.1) oder fr Rapssamen (kultiviert oder wildwachsend), die Sinigrin naturgem enthalten, Glucotropaeolin (Kalium-Benzylglucosinolat, Mr= 447,52) (siehe 4.5.2).

40、Fr Rapssamen mit geringem Glucosinolatgehalt ( 20 m/g) ist die Konzentration des internen Standards in 4.5.1 bzw. 4.5.2.1 zu verringern (1 mmol/l bis 3 mmol/l). DIN EN ISO 9167-1:2013-12 EN ISO 9167-1:1995 + A1:2013 (D) 5 4.5.1 Sinigrin-Monohydrat 4.5.1.1 Sinigrin-Monohydrat-Lsung, 5 mmol/l. 207,7 m

41、g Kalium-Allylglucosinolat-Monohydrat werden in einem 100-ml-Messkolben in Wasser gelst und mit Wasser bis zur Marke aufgefllt. Die so hergestellte Lsung darf in einem Khlschrank bei etwa 4 C bis zu einer Woche oder in einem Tiefkhlschrank bei 18 C fr eine lngere Zeit aufbewahrt werden. 4.5.1.2 Sini

42、grin-Monohydrat-Lsung, 20 mmol/l. 831,0 mg Kalium-Allylglucosinolat-Monohydrat werden in einem 100-ml-Messkolben in Wasser gelst und mit Wasser bis zur Marke aufgefllt. Die so hergestellte Lsung darf in einem Khlschrank bei etwa 4 C bis zu einer Woche oder in einem Tiefkhlschrank bei 18 C fr eine ln

43、gere Zeit aufbewahrt werden. 4.5.1.3 Prfung der Reinheit Es sind eine oder mehrere der folgenden drei Prfungen durchzufhren: HPLC-Untersuchung nach dem in diesem Teil von ISO 9167 festgelegten Verfahren; Untersuchung des intakten Sinigrins mittels HPLC (lonenpaar-Technik); Untersuchung des desulfati

44、erten und silylierten Sinigrins durch Gaschromatographie. Bei jeder Prfung darf in dem Chromatogramm nur ein Hauptpeak vorhanden sein, der mindestens 98 % aller Peak-Flchen darstellt. Die Reinheit ist zu besttigen, indem die Menge der Glucose bestimmt wird, die nach Hydrolyse mit Myrosinase (Thioglu

45、cosid Glucohydrolase EC 3.2.3.1) freigesetzt wird. Der Glucosegehalt ist enzymatisch zu bestimmen. Die Verwendung im Handel erhltlicher Enzymtests erleichtert die Bestimmung. Es ist die gesamte enthaltene freie Glucose zu bercksichtigen; sie wird auf dieselbe Weise, jedoch ohne Zugabe von Myrosinase

46、 ermittelt. Die molare Konzentration der gemessenen Glucose sollte mindestens 98 % der molaren Konzentration der untersuchten Sinigrin-Lsung betragen. 4.5.2 Glucotropaeolin ANMERKUNG 3 Glucotropaeolin ist mitunter schwierig von anderen natrlichen Neben-Glucosinolaten abzutrennen. 4.5.2.1 Glucotropae

47、olin-Lsung, 5 mmol/l 233,8 mg Glucotropaeolin werden in einem 100-ml-Messkolben in Wasser gelst und bis zur Marke mit Wasser aufgefllt. 4.5.2.2 Glucotropaeolin-Lsung, 20 mmol/l 895,0 mg Glucotropaeolin werden in einem 100-ml-Messkolben in Wasser gelst und bis zur Marke mit Wasser aufgefllt. 4.5.2.3

48、Prfung der Reinheit Die Reinheit ist nach dem in 4.5.1.3 beschriebenen Verfahren zu kontrollieren. DIN EN ISO 9167-1:2013-12 EN ISO 9167-1:1995 + A1:2013 (D) 6 4.5.2.4 Kalibrierfaktoren Es ist zu berprfen, ob die Kalibrierfaktoren fr Glucotropaeolin im Vergleich mit Sinigrin den in 9.2 angegebenen F

49、aktoren entsprechen. 4.6 Mobile Phasen 4.6.1 Elutionsmittel A: Wasser, gereinigt durch Filtrieren ber eine Aktivkohle-Kartusche (z. B. Norganic Millipore system14.6.2 Elutionsmittel B: Acetonitril-Lsung in gereinigtem Wasser, HPLC-Qualitt, 20 % (V/V). Die Konzentration ist gegebenenfalls je nach der verwendeten Su