DIN ISO TS 20836-2005 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens - Performance testing of thermal cy.pdf

1、Oktober 2005 Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DINPreisgruppe 12DIN Deutsches Institut f r Normung e.V. Jede Art der Vervielf ltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut f r Normung e. V., Berlin, gestattet.ICS 07.100.30? 9572102www

2、.din.deXVornormDIN ISO/TS 20836Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln PolymeraseKettenreaktion (PCR) zum Nachweis von pathogenen Mikroorganismen in Lebensmitteln Leistungspr fung f r PCRGer te (ISO/TS 20836:2005);Deutsche Fassung CEN ISO/TS 20836:2005Microbiology of food and animal feedin

3、g stuffs Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of foodborne pathogens Performance testing of thermal cyclers (ISO/TS 20836:2005);German version CEN ISO/TS 20836:2005Microbiologie des aliments Raction de polymrisation en cha ne (PCR) pour la recherche des microorganismes pathognes dans le

4、s aliments Critres de performance pour les thermal cyclers (ISO/TS 20836:2005);Version allemande CEN ISO/TS 20836:2005Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 Berlin www.beuth.deGesamtumfang 20 SeitenDIN V ISO/TS 20836:2005-10 2 Nationales Vorwort Diese Technische Spezifikation wurde

5、vom Technischen Komitee CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik Horizontales Verfahren (Sekretariat: DIN) des Europischen Komitees fr Normung in Zusammenarbeit mit dem Technischen Komitee ISO/TC 34 Landwirtschaftliche Lebensmittelerzeugnisse erarbeitet. Das zustndige deutsche Normungsgremium ist der Arbeits

6、ausschuss Mikrobiologische Lebensmittelunter-suchung einschlielich Schnellverfahren des Normenausschusses Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DIN. Eine Vornorm ist das Ergebnis einer Normungsarbeit, das wegen bestimmter Vorbehalte zum Inhalt oder wegen des gegenber einer Norm abwe

7、ichenden Aufstellungsverfahrens vom DIN noch nicht als Norm herausgegeben wird. Zur vorliegenden Vornorm wurde kein Entwurf verffentlicht. Erfahrungen mit dieser Vornorm werden erbeten an den Normenausschuss Lebensmittel und landwirt-schaftliche Produkte (NAL) im DIN Deutsches Institut fr Normung e.

8、 V., 10772 Berlin (Hausanschrift: Burggrafenstrae 6, 10787 Berlin) oder als Datei per E-Mail an naldin.de. Fr die in diesem Dokument zitierte Internationale Norm wird im Folgenden auf die entsprechende Deutsche Norm hingewiesen: ISO/IEC 17025 siehe DIN EN ISO/IEC 17025 ISO 22174 siehe DIN EN ISO 221

9、74 Nationaler Anhang NA (informativ) Literaturhinweise DIN EN ISO/IEC 17025, Allgemeine Anforderungen an die Kompetenz von Prf- und Kalibrierlaboratorien DIN EN ISO 22174, Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis von pathogenen Mikroorganismen in

10、 Lebensmitteln Allgemeine Anforderungen und Begriffe Vornorm TECHNISCHE SPEZIFIKATION TECHNICAL SPECIFICATION SPCIFICATION TECHNIQUE CEN ISO/TS 20836 August 2005 ICS 07.100.30 Deutsche Fassung Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Polymerase Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis von pathogen

11、en Mikroorganismen in Lebensmitteln Leistungsprfung fr PCR-Gerte (ISO/TS 20836:2005) Microbiology of food and animal feeding stuffs Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens Performance testing for thermal cyclers (ISO/TS 20836:2005) Microbiologie des aliments Raction

12、 de polymrisation en chane (PCR) pour la recherche des micro-organismes pathognes dans les aliments Critres de performance pour les thermal cyclers (ISO/TS 20836:2005) Diese Technische spezifikation (CEN/TS) wurde vom CEN am 28. September 2004 als eine knftige Norm zur vorlufigen Anwendung angenomme

13、n. Die Gltigkeitsdauer dieser CEN/TS ist zunchst auf drei Jahre begrenzt. Nach zwei Jahren werden die Mitglieder des CEN gebeten, ihre Stellungnahmen abzugeben, insbesondere ber die Frage, ob die CEN/TS in eine Europische Norm umgewandelt werden kann. Die CEN-Mitglieder sind verpflichtet, das Vorhan

14、densein dieser CEN/TS in der gleichen Weise wie bei einer EN anzukndigen und die CEN/TS verfgbar zu machen. Es ist zulssig, entgegenstehende nationale Normen bis zur Entscheidung ber eine mgliche Umwandlung der CEN/TS in eine EN (parallel zur CEN/TS) beizubehalten. CEN-Mitglieder sind die nationalen

15、 Normungsinstitute von Belgien, Dnemark, Deutschland, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Schweden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik

16、, Ungarn, dem Vereinigten Knigreich und Zypern. EUROPISCHES KOMITEE FR NORMUNG EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION COMIT EUROPEN DE NORMALISATIONManagement-Zentrum: rue de Stassart, 36 B-1050 Brssel 2005 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltwei

17、t den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten.Ref. Nr. CEN ISO/TS 20836:2005 DCEN ISO/TS 20836:2005 (D) 2 Inhalt Seite Vorwort 3 Einleitung.4 1 Anwendungsbereich .5 2 Normative Verweisungen5 3 Begriffe .5 4 Installation des PCR-Gertes .6 5 Pflege und Wartung von PCR-Gerten6 6 Leistungsprfungen 6

18、7 Prfbericht und Dokumentation von Aufflligkeiten .7 Anhang A (informativ) Biochemische Leistungsprfung PCR Verfahren zur Messung der Temperaturgenauigkeit .8 Anhang B (informativ) Technische Leistungsprfung . 16 Literaturhinweise . 18 Vornorm CEN ISO/TS 20836:2005 (D) 3 Vorwort Dieses Dokument (CEN

19、 ISO/TS 20836:2005) wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34 Food products“ in Zusammenarbeit mit dem Technischen Komitee CEN/TC 275 Food analysis Horizontal methods“ erarbeitet, dessen Sekretariat vom AFNOR gehalten wird. Entsprechend der CEN/CENELEC-Geschftsordnung sind die nationalen Normungsinsti

20、tute der folgenden Lnder gehalten, diese Technische Spezifikation anzukndigen: Belgien, Dnemark, Deutschland, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Schweden, Schweiz, Slowakei, Slo

21、wenien, Spanien, Tschechische Republik, Ungarn, Vereinigtes Knigreich und Zypern. Anerkennungsnotiz Der Text von ISO/TS 20836:2005 wurde vom CEN als CEN ISO/TS 20836:2005 ohne irgendeine Abnderung genehmigt. Vornorm CEN ISO/TS 20836:2005 (D) 4 Einleitung Diese Technische Spezifikation ist im Zusamme

22、nhang mit der folgenden Reihe von Normen unter dem allgemeinen Titel Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis von pathogenen Mikroorganismen in Lebensmitteln“ zu sehen. Allgemeine Anforderungen und Begriffe (ISO 22174); Anforderungen an die Probe

23、nvorbereitung bei qualitativem Nachweis (ISO 20837) Anforderungen an Amplifikation und Nachweis bei qualitativen Verfahren (ISO 20838) Leistungsprfung fr PCR-Gerte (ISO/TS 20836) Die Internationale Normenorganisation (ISO) weist darauf hin, dass die bereinstimmung mit diesem Dokument die Verwendung

24、eines oder mehrerer Patente hinsichtlich der PCR-Technologie bedeuten kann. ISO nimmt keine Stellung zur Rechtmigkeit, zur Gltigkeit und zum Anwendungsbereich dieser Patentrechte. ISO wurde darber informiert, dass Applied Biosystems, Roche Molecular Systems, Inc. und F. Hoffmann La Roche Ltd. Halter

25、 von Patentrechten bezglich der PCR-Technologie sind. Diese Firmen haben ISO zugesichert, dass sie bereit sind, ber Lizenzen zu vernnftigen und nicht diskriminierenden Geschftsbedingungen mit Antragestellern in der ganzen Welt zu verhandeln. In diesem Zusammenhang ist die Erklrung der Halter dieser

26、Patentrechte bei ISO registriert. Informationen sind erhltlich bei: Licensing Department Applied Biosystems 850 Lincoln Centre Drive Foster City, CA 94404 USA und Roche Molecular Systems, Inc. Licensing Department 1145 Atlantic Avenue Alameda CA 94501 USA Es wird auf die Mglichkeit hingewiesen, dass

27、 einige Texte dieses Dokuments Patentrechte berhren knnen, ohne dass diese vorstehend identifiziert wurden. ISO ist nicht dafr verantwortlich, einige oder alle diesbezglichen Patentrechte zu identifizieren. WARNUNG Bei Anwendung dieser Technischen Spezifikation ist es mglich, dass gefhrliche Substan

28、zen, Arbeitsgnge und Gerte angewendet werden. Diese Technische Spezifikation erhebt nicht den Anspruch, dass alle mit ihrer Anwendung verbundenen Sicherheitsprobleme angesprochen werden. Es liegt in der Verantwortung des Anwenders dieser Technischen Spezifikation, geeignete Vorkehrungen fr den Arbei

29、ts- und Gesundheitsschutz zu treffen und die Anwendbarkeit einschrnkender Vorschriften vor der Anwendung zu bestimmen. Vornorm CEN ISO/TS 20836:2005 (D) 5 1 Anwendungsbereich Diese Technische Spezifikation beschreibt die Grundlagen fr die Installation, Nutzung und berprfung der PCR-Gerte. Obwohl PCR

30、-Gerte robuste technische Gerte sind, bentigen sie eine regelmige berprfung ihrer Funktion. Die Khl- und Heizelemente haben eine begrenzte Lebenszeit. Die akkurate Funktion der Khl- und Heizelemente ist abhngig von der Qualitt der Elemente und der richtigen Nutzung und Wartung. Zustzlich zu den Anfo

31、rderungen an ein definiertes System zur Pflege und Wartung von PCR-Gerten werden in der Technischen Spezifikation Verfahren zur biochemischen oder technischen berprfung der akkurate Funktion eines PCR-Gertes beschrieben (siehe Anhnge A und B). 2 Normative Verweisungen Die folgenden zitierten Dokumen

32、te sind fr die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). ISO 22174, Microbiology of food and animal feeding stuff

33、s Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-born pathogens General requirements and definitions ISO/IEC 17025, General requirements for the competence of testing and calibration laboratories 3 Begriffe Fr die Anwendung dieses Dokuments gelten die Begriffe nach ISO 22174 und die folge

34、nden Begriffe. 3.1 Heizdeckel optionale Vorrichtung eines PCR-Gertes, das zur Vermeidung von Evaporation aus dem Reaktionsgef verwendet wird 3.2 Temperatur-Uniformitt Homogenitt der Temperatur innerhalb der thermisch kontrollierten Einheit (z. B. Thermo-Block) 3.3 biochemische Leistungsprfung Prfver

35、fahren, das die Leistung des PCR-Gertes biochemisch berprft (z. B. mit Hilfe eines temperatur-sensitiven PCR-Verfahrens) 3.4 technische Leistungsprfung Prfverfahren, das die Leistung des PCR-Gertes mit Hilfe von physikalischen Messungen berprft 3.5 nicht-robustes PCR-System PCR System, in dem gering

36、e Abweichungen von der vorgeschriebenen Chemie oder dem vorgeschriebenen Temperaturverlauf einen deutlichen Effizienzverlust der PCR-Amplifikation zur Folge haben 3.6 kritische Position Position oder Bereich des Thermo-Blocks, in dem eine Abweichung der Probentemperatur zu der angezeigten Temperatur

37、 aufgrund der technischen Ausfhrung wahrscheinlicher ist als in anderen Bereichen des Thermo-Blocks Vornorm CEN ISO/TS 20836:2005 (D) 6 4 Installation des PCR-Gertes Die Installation sollte nach den Angaben des Herstellers erfolgen. Folgendes sollte beachtet werden: a) PCR-Gerte sollten in einer Umg

38、ebung mit geeigneter Luftfeuchtigkeit und Raumtemperatur aufgestellt und betrieben werden; b) PCR-Gerte sind so aufzustellen, dass sie visuell inspiziert werden knnen, dass ein stndiger und freier Austausch der Umgebungsluft stattfinden kann, und dass sie immer in konstanter Umgebung betrieben werde

39、n. 5 Pflege und Wartung von PCR-Gerten Das nutzende Labor sollte ein definiertes System zur berprfung jedes einzelnen PCR-Gertes erstellen und anwenden in Abhngigkeit von den Betriebsstunden oder von der Anzahl der durchgefhrten PCR-Lufe. 6 Leistungsprfungen 6.1 Allgemeines Die Leistung jedes einzel

40、nen PCR-Gertes sollte entweder indirekt ber einen biochemischen oder direkt ber einen physikalischen Test berprft und dokumentiert werden. 6.2 Biochemische Leistungsprfung Fr die Leistungsprfung von PCR-Gerten sollte ein biochemisches Prfverfahren angewendet werden. Dieses kann ein temperatursensiti

41、ves nicht-robustes PCR-System sein. Ein Beispiel eines geeigneten Systems wird im Anhang A beschrieben. Jedes andere PCR-System, das die notwendigen Kriterien erfllt, darf ebenso verwendet werden. Die Hufigkeit der Anwendung der Prfung sollte nach den dokumentierten Betriebsstunden oder der Anzahl d

42、er PCR-Lufe festgelegt werden. 6.3 Technische Leistungsprfung Ein technisches Prfverfahren sollte angewendet werden, um die wirkliche Probentemperatur in jeder Blockposition whrend der Temperaturzyklen zu messen und mit der angezeigten Temperatur zu vergleichen. Ein Beispiel eines geeigneten Systems

43、 wird im Anhang B beschrieben. Das technische Prfverfahren kann anstelle des biochemischen Testverfahrens durchgefhrt werden und sollte dann durchgefhrt werden, wenn der biochemische Test eine ineffiziente Amplifikation anzeigt. Die Hufigkeit der Anwendung der Leistungsprfung sollte nach den dokumen

44、tierten Betriebsstunden oder der Anzahl der PCR-Lufe festgelegt werden. Vornorm CEN ISO/TS 20836:2005 (D) 7 7 Prfbericht und Dokumentation von Aufflligkeiten Der Prfbericht muss gem ISO/IEC 17025 aufgebaut sein und sollte zumindest Folgendes enthalten: Identifikationsnummer des PCR-Gertes; einen Hin

45、weis auf diese Technische Spezifikation und den verwendeten Anhang zur Leistungsprfung; das Datum der berprfung; die verantwortliche Person der berprfung; das Prfergebnis; alle Aufflligkeiten whrend der berprfung; alle Abweichungen zu der Testspezifikation; alle anderen fr die Prfung relevanten Info

46、rmationen. Das durchfhrende Labor sollte dokumentierte Verfahren besitzen, um alle mglichen Unregelmigkeiten in Bezug auf die Leistung des PCR-Gert zu identifizieren, zu erfassen und zu beheben (siehe auch ISO/IEC 17025). Vornorm CEN ISO/TS 20836:2005 (D) 8 Anhang A (informativ) Biochemische Leistun

47、gsprfung PCR Verfahren zur Messung der Temperaturgenauigkeit A.1 Allgemeines Dieses Verfahren dient der Messung der Genauigkeit der Kontrolle der Annealingtemperatur des PCR-Gertes. Die Prfung ist sensitiv gegenber einer berhhten ,echten Annealingtemperatur im Vergleich zur angezeigten Temperatur wh

48、rend eines definierten Temperatur-Programm-Schritts. A.2 Kurzbeschreibung Die Genauigkeit der eingestellten/angezeigten Temperatur wird ber eine eigens dafr entwickelte PCR getestet. Das PCR-System ist sensitiv gegenber einer berhhung der Annealingtemperatur whrend des Programmablaufs. Eine 362 Base

49、npaar (bp) lange DNS Sequenz, welche die Zielsequenz der PCR enthlt, wird durch Amplifizierung der Klonierungsstelle ber die flankierenden Regionen des pGEM Vektors generiert. Zur Amplifizierung wird ein Standard-M13-Sequenzierungs-Primerpaar verwendet. Die klonierte DNS-Sequenz wird in Bild A.1 gezeigt.