WS 238-2003 非淋菌性尿道炎诊断标准及处理原则.pdf

1、WS 238-2003前言本标准第2章为强制性的，其余为推荐性的。非淋菌性尿道炎是常见的性传播疾病，主要由沙眼衣原体和解脉支原体引起。该病在近年来流行广泛，有大幅度增长的趋势。为了对非淋菌性尿道炎患者进行可靠的诊断，给予合理的治疗，以及了解国内非淋菌性尿道炎的流行情况和流行趋势，为防治工作提供可靠的依据，特制定本标准。在制定本标准的过程中，认真研究了我国卫生部制定的性病诊断标准与治疗方案(暂行)和性病诊断标准与处理原则，参阅了美国疾病控制中心1996年修订的非淋菌性尿道炎诊断标准、1998年美国疾病控制中心性传播疾病治疗指南和1998年加拿大疾病控制实验中心加拿大性传播疾病指南中的有关部分。本

2、标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。本标准由卫生部疾病控制司提出。本标准起草单位:中国医学科学院皮肤病研究所。本标准主要起草人:王千秋。本标准由卫生部委托卫生部传染病防治监督管理办公室负责解释。WS 238-2003非淋菌性尿道炎诊断标准及处理原则范围本标准规定了非淋菌性尿道炎(宫颈炎)的诊断标准及处理原则。本标准适用于全国各级医疗保健机构和卫生防疫机构及性病防治机构。2诊断标准2.1接触史有非婚性接触史或配偶感染史。2.2临床表现2.2,，潜伏期:平均为1周3周。2.2.2男性患者的临床表现2.2.2. 1尿道分泌物，呈浆液性或浆液脓性，较稀薄，量少，少数情况下尿道分泌物可呈脓性，

3、量多，甚或带血性。2.2.2.2尿痛，或尿频、尿道刺痒和不适感。有时觉阴茎体局部疼痛。2.2.3女性患者的临床表现2.2,3. 1尿道分泌物，呈浆液性或浆液脓性，尿痛、尿频。2.2.3.2白带增多、色黄或带血性，或有异味。非月经期或性交后出血。2.2.3.3宫颈口可见粘液脓性分泌物，宫颈充血1水肿、脆性增加，触之易出血，有时见较为特征的肥大性滤泡状外观。2.3实验室检查2.3.1取男性尿道分泌物或刮片标本，或女性宫颈内膜标本，作涂片革兰染色和琳球菌培养检查，无淋球菌的证据。2.3.2涂片检查2.3.2. 1对于男性患者，取尿道分泌物涂片，作革兰染色检查，可见多形核白细胞，在油镜(100 X 1

4、0倍)下平均每视野妻5个为阳性。晨尿或禁尿4h后的首次尿(前段尿15 mL)离心后沉渣在高倍镜(40X10倍)视野下，平均每视野15个多形核白细胞为阳性。2.3.2.2对于女性患者，用拭子取宫颈管内膜标本，涂片，作革兰染色，在油镜(100 X 10倍)下平均每视野多形核白细胞)10个为阳性(但应除外滴虫感染)。2.3.3沙眼衣原体检测:有细胞培养法、直接免疫荧光法、酶免疫法和抗原快速检测法。如果检测结果阳性，对非淋菌性尿道炎有诊断意义。2.3.4解脉支原体检测:男性患者解脉支原体培养阳性，结合病史和其他实验室检查，有助于非淋菌性尿道炎的诊断。2.4临床诊断符合2. 1, 2. 2,2. 3.

5、1和2.3.2条件的病例。2.5确诊病例符合2.1,2.2,2.3.1,2.3.2和2.3.3或2. 3.4条件的病例。WS 238-20033治疗原则3. 1应遵循及时、足量、规则用药的原则，根据不同的病情采用相应的治疗方案(见附录B),3.2治疗期间避免性行为。性伴应该同时接受治疗。治疗后应该进行随访。4临床治愈标准4.1自觉症状消失，男性患者无尿道分泌物和尿痛，女性患者白带异常症状消失，宫颈和尿道炎症消退。4.2男性患者尿沉渣无白细胞。5管理及预防IC乙，口丘丘:5.5加强性病防治的宣传教育，减少传染及播散。加强性伴通知，对患者发病前1个月中的性接触者，无论其有无症状，均应给予治疗。重视

6、在核心人群中进行筛查，在门诊就诊者中作病例发现，以检出和治疗感染者。正确使用安全套可起到预防作用。加4$ It*者的管碑#45病夫彻底治俞之前，应避免性行为;注意个人卫生，严格分开使用毛巾、面盆、浴盆、床单等可致间接传染的媒介物品;污染物可煮沸消毒。WS 238-2003附录A(规范性附录)非淋菌性尿道炎的实验室诊断A. 1标本的采魏引起非淋菌性尿道炎的病原体主要是沙眼衣原体，少数为解脉支原体。采集标本最重要的原则是，要取到含足够数量病原体的标本。要求所采标本必须含有上皮细胞。A.1.1尿道标本对于男性患者，拭子应深人尿道2 cm-4 cm，稍用力转动以尽可能多地获得细胞材料。对于女性患者，同

7、时采集宫颈和尿道标本可提高衣原体的检出率。女性尿道标本的采集方法是，先用手指自耻骨下方沿女性尿道走向向前轻轻按摩，观察尿道口有无分泌物。将尿道拭子深人尿道口内1 cm-2 cm,轻轻转动后取出。A.1.2宫颈标本取宫颈标本时，应先用一根拭子将宫颈口擦干净，然后再用另一根拭子插人宫颈管内1 cm-1. 5 cm处轻压迫转动以获取细胞标本。也可使用细胞刷采集标本。标本采集后，可直接做涂片检查，或者视不同实验室检查项目的要求，置于相应的运送液中送检。A.1.3尿液标本取清晨首次尿或禁尿2h-4h后的尿液最为理想。收集尿液时，需使用无菌容器，取首段尿10 mL-15 mL送检。如果在24 h以内检测，

8、应置于4下，否则应该冻存于一20或一700C,A. 2标本涂片检查将拭子均匀轻轻地涂在干净的玻片上.然后在空气中干燥，迅速通过火焰2次3次固定，作革兰染色，镜检。使用尿液标本作涂片检查时，先将尿液离心(2 000 r/min,10 min)，弃去上清，用沉渣涂片。A. 2. 1革兰染色A. 2. 1. 1将经过固定的涂膜铺满结晶紫溶液，染1 min。迅速在流水中洗净。A. 2. 1. 2用碘液铺满涂片.染1 min。用流水洗净。A.2.1.3用丙酮一乙醇液脱色，直到涂片无紫色脱下为止，通常要10 s-20 s。脱色时间取决于涂膜的厚薄。避免脱色过度。A.2.1.4很快在流水中淋洗停止脱色，将过

9、量的水用吸水纸吸干。A. 2.1. 5用沙黄或碱性复红液复染1 min,A. 2. 1. 6用流水淋洗，用吸水纸吸干。A. 2. 1. 7镜检使用10 X 100倍油镜检查。在有尿道口分泌物(男性)或宫颈口粘液脓性分泌物(女性)的患者标本涂片中，常可见较多的红色多形核白细胞。注意观察有无细胞内革兰染色阴性双球菌。非淋菌性尿道炎仅见到多形核白细胞，而无细胞内革兰阴性双球菌。在10X40倍(尿沉渣涂片)或10 X 100倍(拭子标本涂片)视野下计数多形核白细胞的数量。A.2.1.8注意事项采集标本时，要将拭子伸人尿道内或宫颈管内，而不宜只蘸取尿道口外或宫颈口外的分泌物。A. 3沙眼衣原体细胞培养在

10、理想的条件下，标本获得后应立即接种到培养的细胞中，因为衣原体在体外生存时间不长。如果3WS 238-2003标本在18 h内能送到实验室，则可保持在40C，如耽误时间较长(超过24 h)，则标本应冰冻于干冰中或-70冰箱直到临用前才融化。如果标本仅冻于一200C，则90%的衣原体会死亡。尿、精液、用过抗生素的患者的标本以及新近用过某些阴道制剂(冲洗、避孕霜和子宫隔膜膏等)的患者的标本不适宜作衣原体培养。一些含有杀精剂(如壬苯醇醚-9霜剂)的标本因对衣原体有毒性，也不宜使用。A. 3. 1材料A3.1.1细胞生长培养液，每1 000 mL中含PPMI 1640 16.4 g，新生牛血清10%，庆

11、大霉素10 pg/mL,万古霉素25 pg/mL，制霉菌素25 U/mL,HEPES 0.01 mol/L, L一谷氨酞胺0.002 mol/L，用碳酸氢钠调节pH至7.2.A.3.1.2标本运送液，每1 000 ml,细胞生长培养液另加葡萄糖3. 5 g,A.3.1.3分离培养液，细胞生长培养液另加放线菌酮，终浓度为1 pg/mLA. 3.1. 4无钙镁PBS，每1 000 mL双蒸水中加氯化钠(NaCD 8. 0 g,氯化钾(KCD 0. 2 g,磷酸氢钠(Na2HPO,)1.15 g,磷酸二氢钾(KH,PO,) 0.2 g,A.3.1.5胰蛋白酶-EDTA液，每200 mL无钙镁PBS中

12、，加胰蛋白酶0. 1 g,EDTA “ Na4 0.04 gA. 3.1. 6碘染色液，每50 ml蒸馏水中，加碘化钾(KD5.0 g，结晶碘5. 0 g，甲醇50 mL.A.3.1.7碘甘油封固液，等量碘染色液与甘油混合。A.3.2方法A.3.2.1 McCoy细胞单层的制备将McCoy细胞从液氮中取出，置37水浴中迅速融化。将其加人已含有细胞生长培养液的培养瓶中，待8h细胞贴壁后换新鲜生长培养液。继续在36培养2d-3d，直至细胞融合成单层。吸去培养液，用少量胰蛋白酶溶液清洗单层。加胰蛋白酶-EDTA溶液消化单层，室温中孵育2 min-3 min，让细胞完全离散加人生长培养基，吹打细胞使之

13、混悬。用血球计数器计数细胞，再以培养液作稀释，使其达到所需浓度(如需在48 h后在96孔板中生成单层细胞，则McCoy细胞浓度以1X10为好)。然后接种于96孔微量板孔中，每孔加人0. 2 mL细胞悬液。微量板孔中已预先放人一直径为0. 5 cm的圆形盖玻片，细胞即在此玻片上生长。在5%二氧化碳(C02 ),36及潮湿空气条件下培养48 h，倒置显微镜下观察细胞己长成单层即可用于标本接种。A. 3.2.2临床标本的接种将尿道或宫颈标本从一70取出，置37水浴中振摇，迅速融化。在旋涡振荡器上振荡30 s，无菌条件下取出拭子并弃之。将已生长48 h的96孔板细胞单层取出，吸去孔中的培养液，加人标本

14、液0. 1 mL。一般每个标本接种2孔(一孔观察结果，另一孔作盲传)。每批临床标本均设阳性对照和阴性对照。将已接种标本的微量板在35C,3 OOOXg条件下离心1h。离心完毕，吸去所接种的标本液，每孔中加人。. 2 mL含有放线菌酮的分离培养基，在5%二氧化碳(CO, ),36及潮湿空气条件下培养48 h，然后观察结果。A. 3. 2. 3观察结果采用碘染色方法时，方法如下:a)吸去微量板孔中的分离培养基;b)加。. 2 mL甲醇于培养孔中，固定10 min;c)弃去甲醇，加。. 2 mL碘染色液，染15 min后弃去染色液;d)加1滴碘甘油封固液于洁净载玻片上;e)将盖玻片从孔中取出，细胞面

15、朝下，放于封固液上，显微镜(10X40倍)下观察。衣原体包涵体位于细胞浆内，染成深棕色。如有，则为沙眼衣原体培养阳性。如无，则将另一孔中玻片上的细胞刮下，作盲传，继续如前法接种于新的细胞单层，培养后观察结果，如仍无包涵体则确定为阴性，如有包涵体则确定为阳性。当碘染色见包涵体形态不典型或不能确定结果时，可用95%的乙醇WS 238-2003脱色2 min-3 min，以荧光标记的单克隆抗体染色后重新进行鉴定。姬姆萨染色的方法与碘染色基本相同，只是在甲醇固定后，加。. 2 mL姬姆萨染液，染30 min。吸去染液，以磷酸缓冲液洗片后，取出盖玻片，自然干燥后镜检。也可直接用免疫荧光法染衣原体包涵体以

16、进行鉴定。这种方法的优点是，可在培养后较早时间内(36 h-48 h)进行鉴定，非常敏感、特异。缺点是需要荧光显微镜，且价格昂贵。该方法的操作步骤如下:a)用吸管将培养孔中的培养基吸去，加人0. 2 mL甲醇。固定细胞10 min后吸去甲醇;b)加人0. 1 mL荧光标记的单克隆抗体，在36下孵育30 min;c)吸去单抗，取出圆形盖玻片，用去离子水漂洗30 min;d)用滤纸吸干水分，将圆形盖玻片有细胞的一面朝下，用试剂盒中提供的封片液将其贴在载玻片上;e)将玻片置于荧光显微镜下观察(10X40倍)。A.3.2.4结果碘染色和姬姆萨染色均可用光学显微镜检查。但是姬姆萨染色时，用暗视野显微镜检

17、查，相对于周围的暗色背景来说，衣原体包涵体呈柠檬黄色，带有荧光，易于为初学者所识别。碘染色后，由于包涵体富含糖原，因此被染成深棕色，位于胞浆。免疫荧光染色，阳性者可见发苹果绿色荧光的包涵体。A. 3. 2. 5注意事项A.3.2.5.1 McCoy细胞浓度应合适，产生的细胞单层密度不宜过密或过疏，否则会影响衣原体的生长。应该事先摸索好适宜的细胞接种浓度。A.3.2.5.2细胞过于老化、受到污染或因毒性作用而破坏时，可能产生假阴性结果。此时，需要换用新鲜、无污染的细胞，有时需采用其他检测方法。A. 3. 2. 5. 3应该保存好制备培养基的各种试剂的来源及批号、用量及配制方法，以便追溯问题的来源

18、。在配好培养基后，应该首先检查它对细胞及已知阳性衣原体株的生长支持情况，有无污染，然后才能正式用于临床标本的检测。A. 3. 2. 5. 4胎牛血清是培养基中的关键成分，应该符合质量要求。每批血清应事先检测是否适合衣原体的生长。A. 3. 2. 5. 5放线菌酮的浓度对衣原体生长的影响也很大，应该事先摸索，将不同稀释度的放线菌酮加人培养基，以决定最合适的工作浓度。A. 4沙眼衣原体直接免疫荧光法目前已有商品化沙眼衣原体直接免疫荧光检测试剂盒。试剂盒中有抗衣原体的小鼠单克隆抗体、阳性对照片和阴性对照片。A. 4. 1方法A. 4. 1. 1将标本涂于玻片上。空气中干燥，滴0. 5 ml,丙酮固定

19、。A. 4. 1. 2标本片及阳性、阴性对照片各加30 pL抗体试剂，涂匀。A. 4. 1. 3置于湿盒中在室温孵育15 min。用蒸馏水冲洗，空气中干燥A. 4.1. 4加1-2滴封固液，覆以盖玻片在荧光显微镜下(lox 100倍)观察。A. 4.2结果阳性标本中可见到原体，它为单个、针尖样大小、发出中等度到高强度的苹果绿色荧光的颗粒。对于泌尿生殖道标本，如果每片中原体数)10个时，结果为阳性。少数情况下，可在片中可见到比原体大2-3倍的衣原体颗粒，这可能是未成熟的衣原体、网状体或原体与网状体的中间类型。A. 4. 3注意事项观察结果需要有一定的经验。要注意，有时会出现“人工假象”，即某些颗

20、粒物质(白细胞、上皮细5WS 238-2003胞、色素颗粒)、细菌和酵母菌等会发出非特异性荧光，有些细菌表面粘附的免疫球蛋白也能与荧光抗体结合而出现荧光。但是，它们的形态和大小与原体不同，荧光是黄绿色而非苹果绿色，且染色不均匀，而原体表面的荧光染色是均匀一致的。为确保检测结果的准确性，观察者应事先进行培训，仔细辨认镜下各种成分的形态，积累经验。此外，高质量的荧光显微镜和试剂也都是保证试验可靠性的必要条件。A. 5沙眼衣原体酶联免疫吸附试验已有商品化沙眼衣原体酶联免疫吸附试验试剂盒。将沙眼衣原体单克隆抗体包被微量板孔，捕获标本中的沙眼衣原体抗原，通过酶联显色反应而判断结果。A. 5. 1方法A.

21、 5. 1. 1标本采集标本采集方法基本同前所述。采后，置于试剂盒提供的试管中，立即检测。如需要成批检测，可在20C-8冷藏保存7d。如需保存更长时间，标本应存放在一70-C ,A.5.1. 2标本的处理标本及阴、阳性对照取出后均应放置达室温。加人处理液A1mL，置室温10 min，振荡30 s，加处理液B 100 pL，振荡10s。经处理的标本在20C-8可放24 h,超过24 h应放在一70冰箱。检测前，所有储存过的标本均须于室温下振荡30 s,A. 5.1. 3检测A. 5.1. 3. 1自冰箱取出包被有衣原体单克隆抗体微量板，预温至室温。每次试验，设定A孔为底物空白对照，C,D,E孔为

22、阴性对照，其余孔为测试标本。A.5A. 5.A.5.A. 5.A。5.A. 5A.5)0.A. 61.3.2取出100 pL对照及临床标本于孔中，加盖，室温孵育1 h,1.3.3每孔中(除A外)加50 uL兔抗衣原体多克隆抗体，室温孵育1 ha1.3.4每孔中(除A外)加50 IL辣根过氧化酶标记的抗兔抗体，室温孵育1 h,1.3.5用冲洗液冲洗每孔5遍。1.3.6每孔加100 kL底物工作液，加盖，避光室温孵育30 min,1.3.7每孔加100 kL终止液，1h内用酶标仪读取结果(测定波长492 mn，参考波长620 nm) ;2结果A值)闹值的标本为阳性。闹值为阴性对照A值的平均值加常数

23、0. 1。阳性对照A值须800，阴性对照A值须0.080，底物空白对照A值须(。035，试验方可认为有效。沙眼衣原体快速抗原检测抗原快速检测法操作步骤随不同的试剂盒而有不同。基本方法如下。A. 6. 1将标本置于含。. 6 mL抗原提取液的塑料管中，置80水浴中10 min以释放抗原。A. 6.2将拭子沿管壁挤压，弃之。A. 6. 3加5滴提取液于检测板的加样孔，15 min后观察结果。A. 6. 4阳性标本在结果孔中见一条细线，阴性标本无细线。另外，无论标本为阳性或阴性，都应在质控孔显示一条细线，表明试剂质量合格，试验步骤正确。A. 7解服支原体培养解脉支原体具有尿素酶，能分解尿素产氨，使含

24、酚红指示剂液体培养基pH值上升，颜色由黄色变为红色。此时可初步判断解服支原体培养阳性。进一步确证，需要将液体培养物转种到固体培养基上，可生长成具特征性油煎蛋样集落。sWS238-2003A. 7. 1材料A.7.1.1液体培养基:支原体基础(肉汤)培养基80 mL，马血清或小牛血清10 mL,酵母浸液10 mL,10%尿素溶液。.5 mL 1. 5 mL,0.4%酚红溶液。.5 mL，青霉素500 U/mL-2 000 U/mL，用1 mol/L盐酸调pH值至5.5-6.5，用小试管分装后置冰箱中备用，每管1. 5 mL-2.0 mL,A. 7. 1. 2固体培养基:在100 mL支原体肉汤培

25、养基中，加人琼脂1. 2 g-1. 4 g，高压灭菌后冷却到50左右，逐一加人上述添加剂。摇匀，倒人无菌平皿中，待凝固后，置冰箱中备用。A. 7.2方法A. 7. 2. 1拭子取材后，置于含培养液的小管，搅动数次，提起对准管壁挤压，弃之。A. 7.2.2培养液置370C温箱中培养，每日观察。最适宜的培养条件为含500-10写二氧化碳(C02)环境、湿度为6000-80写。A. 7.2.3培养16 h-24 h后，若培养液颜色发生改变，转种于固体培养基。方法是将0. 1 mL培养液接种在直径为60 mm琼脂平皿上，轻轻转动或用无菌L形玻璃棒使菌液分布均匀。A. 7. 2. 4将固体培养基置于如上

26、所述的培养环境中，经3d-5d孵育后，在低倍显微镜下观察解脉支原体集落形态。A. 7.3结果若液体培养基发生由黄变红的颜色变化，透明无混浊，则可初步判断为有支原体生长。大多数情况下，解腺支原体在24 h内可获得阳性结果。如果培养基发生颜色变化，但液体又有混浊，则应排除杂菌污染，可用孔径为0. 45 pm的滤膜过滤后，再接种于液体培养基中观察。在固体培养基上，解腺支原体的菌落很小，只有15 pm-50 um，核心呈粗颗粒状，具极窄的边，有时呈油煎蛋样。阴性结果需观察5 d-7 d。如用Dienes法染色，集落为特异的蓝色。一般细菌的菌落不着色，容易鉴别。A. 7.4注意事项A. 7. 4. 1标

27、本采集后应尽快接种，不能让拭子干燥。A.7.4.2若暂时不能接种，则应将标本放人1 mL运送培养基(或培养基的基础培养液)中，低温保存。A. 7.4.3观察液体培养基培养结果时，应特别注意培养基有无混浊现象。如有混浊，应将培养物过滤后作再接种观察。WS238-2003附录B(资料性附录)非淋菌性尿道炎治疗方案B1处理和治疗原则B.1.1及时有效的治疗可治愈患者，缩短病程，防止产生并发症和后遗症，预防传染给他人。B. 1. 2治疗宜选用对沙眼衣原体和解脉支原体均有作用的广谱抗菌药物。剂量要适宜，疗程要充足。B2治疗方案B. 2. 1初发非淋菌性尿道炎B. 2. 1. 1推荐方案B.2.1.1.1

28、多西环素100 mg，口服，1日2次，共7 d-10 d;或B.2. 1. 1.2阿奇霉素1g，顿服，需在饭前1h或饭后2h服用。8.2. 1.2替代药物B. 2.1.2. 1氧氟沙星300 mg，口服，1日2次，共7d;或B. 2. 1. 2. 2米诺环素100 mg，口服，1日2次，共7d-10 d;或B.2.1.2.3红霉素500 mg，口服，1日4次，共7d-10d;或B. 2.1. 2. 4四环素500 mg，口服，1日4次，共7 d-10 d,B. 2. 2复发性或持续性非淋菌性尿道炎B. 2. 2. 1尚无有效的治疗方案，推荐方案为B. 2. 2. 1. 1甲硝哩0.4 g,1日

29、2次，共5d，加红霉素500 mg，口服，1日4次，共14 d;或B. 2. 2. 1. 2唬乙红霉素800 mg，口服，1日4次，共7 d.B.2.3孕妇非淋菌性尿道炎(宫颈炎)B. 2.3. 1红霉素500 mg，口服，1日4次，共7d;或B. 2. 3. 2红霉素250 mg，口服，1日4次，共14d;或B. 2. 3. 3琉乙红霉素800 mg，口服，1日4次，共7d;或B. 2. 3. 4阿奇霉素1g，一次顿服。B. 2. 3. 5禁用多西环素和氧氟沙星。B. 3注意事项B. 3. 1沙眼衣原体对常用的抗生素尚未产生有显著临床意义的耐药，偶见有耐四环素沙眼衣原体菌株的报道。解脉支原体

30、对四环素耐药的菌株在一些地区已达5% -10%如果四环素类药物治疗无效，可改用大环内醋类药物。B. 3.2除上述药物外，大环内酷类药物罗红霉素、克拉霉素、交沙霉素，氟哇诺酮类药物如左旋氧氟沙星、司帕沙星和培氟沙星等均有一定疗效，但尚需积累更多的临床应用经验WS 238-2003参考文献习卫生部疾病控制司.性病诊疗规范(试行)及性病治疗推荐方案.200。年8月2全国性病麻风病控制中心.1999年全国性病疫情分析报告，性病情况简报，2000,(3):1-173王千秋沙眼衣原体感染的流行与控制.国外医学皮肤性病学分册，1995,21(4):193-1954叶顺章，张木有.现代性传播疾病实验诊断技术.

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