1、ICS 65. 160X 87药易中华人民共和国国家标准GB/T 13596-2004代替GB/T 13596-1992烟草及烟草制品有机氯农药残留量的测定启二小口亡名!d云念干、.l-曰C1曰ILKTobacco and tobacco products-Determination of organochlorine pesticide residues-Gas chromatographic method（ISO 4389：2000，MOD)2004-12-14发布2005-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会-pGB/T 13596-2004前
2、勺本标准修改采用国际标准ISO 4389:2000(1烟草及烟草制品有机氯杀虫剂残留量的测定气相色谱法。本标准与ISO 4389:2000相比做了下列编辑性修改：删除ISO 4389:2000的前言；增加了“烟草萃取装置”的规格。本标准与GB/T 13596-1992烟叶中有机氯杀虫剂残留量的测定方法相比主要变化如下：删除GB/T 13596-1992的“主题内容与适用范围”(1992年版的第1章）；增加了“范围”；删除GB/T 13596-1992的“取样”(1992年版的第2章）；增加了“规范性引用文件”（见本版的第2章）；删除GB/T 13596-1992的“测定”(1992年版的第3章
3、）；增加了“原理”；增加了“试剂与材料”；增加了“仪器”；增加了“采样及试样制备”；增加了“操作步骤”；增加了“结果的表述”；增加了“重复性、再现性和回收率”；修改了GB/T 13596-1992的“测试报告”(1992年版的第4章；本版的第10章）；增加了附录A“色谱图示例”；增加了附录B实验室间试验研究结果”；增加了“参考文献”。本标准的附录A、附录B是资料性附录。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会（TC144）归口。本标准起草单位：国家烟草质量监督检验中心。本标准主要起草人：徐亮、唐纲岭、张威、廖晓玲、宗维勇、刘惠民。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB/
4、T 13596-19920 GB/T 13596-2004烟草及烟草制品有机氯农药残留量的测定气相色谱法1范围本标准规定了烟草及烟草制品中有机氯农药残留量的气相色谱测定方法。本标准适用于表1中有机氯农药残留量的测定。应在表1中列出的检测限以内测定各农药的残留量。注1：对于不同类型的烟叶，本方法不会因非有机氯农药物质产生的干扰色谱峰而对测定结果造成误差。但这并不是说本方法适用于所有种类、形态的烟草及烟草制品。因此，对未知原因造成的明显偏高的测定结果要加以仔细研究。有分析人员建议在这种情况下使用质谱检测器确证色谱图中物质的化学结构。注2: ISO 175。中有表1列出的有机氯农药的俗名相对应的化学
5、名和结构式。表1适合于本标准检测的杀虫剂及其检测限砚2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 5606. 1卷烟第1部分：抽样GB/T 19616烟草成批原料取样的一般原则（GB/T 19616-2004 , ISO 4874:2000,MOD)GB/T 13596-2004ISO 648实验室用玻璃器皿单标线吸量管ISO 1042实验室用玻璃器皿一一单标线容
6、量瓶ISO 3696分析实验室用水规格及检验方法3原理粉碎后的干燥样品与弗罗里硅土混合，于索氏提取器中用正己烷萃取农药残留。无需进一步的净化处理，直接使用配有电子捕获检测器的气相色谱仪测定农药残留含量。4试剂与材料水应为蒸馏水或同等纯度的水，至少应达到ISO 3696二级水水平。所有试剂应适用于农药残留量分析。所有溶剂应依照与样品测定（萃取和气相色谱测定）相同的程序做空白试验以检查其纯度，溶剂色谱图的基线上应没有明显会影响农药残留测定的峰出现。4.1正己烷，需熏蒸馏并验证。4.2甲苯，需熏蒸馏并验证。4.3标准物质：表1中所列物质的有证标准物质，纯度至少95%（质量分数）。注3：反式氯丹用来指
7、示氯丹的存在（它们为工艺混合物）。如果使用本方法检测到了a一硫丹建议采用其他合适的方法测定a一硫丹、R一硫丹和硫丹硫酸盐的残留总和。4.4内标储备液：称取0. 02 g灭蚁灵于100 MI,容量瓶中，精确至0. 000 1 g，用正己烷（(4.1)稀释至刻度。使用灭蚁灵作为内标物。它是一种已不再使用的杀虫剂（参见附录A) o注4：灭蚁灵是俗名，其化学名称是十二氯五环（5. 2. 1. 01.10. 3.9 058 ) dodecachloropentacyclo(5. 2. 1. 026. 039. 058 )decane。4.5内标工作液：移取5 ml,内标储备液（(4.4)于200 ml-
8、容量瓶中，用正己烷（(4.1)稀释至刻度，得到灭蚁灵浓度约为5 ug/mL的内标工作液。内标工作液应避光贮存于00C -4条件下，可至少稳定六个月。4.6农药标准液农药标准液避光贮存于00C -4条件下，可至少稳定六个月。4.6. 1单一标准储备液分别称取0. 02 g每种农药标准品（(4. 3)到各自的100 ml、容量瓶中，精确至0. 000 1 g，用正己烷(4.1)稀释定容，配制成浓度约为200 ug/mL的每种农药单一标准储备液。乙体一六六六在正己烷中溶解度低，应用甲苯（4. 2 )溶解。4.6.2混合储备液A移取各农药单一标准储备液5 mI.(4. 6. 1)于200 mI.容量瓶
9、中，用正己烷（4. 1)稀释定容，得到各农药标准品浓度约为5 fig/ml，的混合储备液A乙体一六六六用甲苯（4.2)溶解。4.6.3混合储备液B移取混合储备液A(4.6.2)1 mL于10 MI,容量瓶中，用正己烷（4.1)稀释定容，得到各农药标准品浓度约为0. 5 tg/mL的混合储备液Bo4.6.4工作标准液各移取混合储备液A(4. 6. 2)和内标工作液（4. 5)1 ml.于100 mL容量瓶中，用正己烷（4.1)稀释定容，得到各农药标准品及内标浓度约为0. 05 t.g/ml.的工作标准液。4.7弗罗里硅土，150 tm-250 t.m(60目一80目）。4.7.1弗罗里硅土的质量
10、是实现本方法的关键因素之一。弗罗里硅土应有充分的活性以保留萃取液中的杂质，同时能够使农药残留洗脱。弗罗里硅土应首先按4. 7.2预处理。只有通过4.7. 3验证的弗罗里硅土才可使用。4.7.2将供验证的弗罗里硅土置于石英柑祸内，在马弗炉中550灼烧至少5h，在无干燥剂的干燥器 GB/T 13596-2004中冷却后，转入圆底烧瓶，每100 g加5m工子水，在旋转烧瓶中充分混合约1h。进行4. 7. 3的验证之前，应将弗罗里硅土置于密闭玻璃容器中平衡至少48 ha4.7.3通过萃取狄氏剂的正己烷溶液检查弗罗里硅土的活性。该溶液中狄氏剂浓度与含I !g/g狄氏剂的烟草或烟草制品的萃取液浓度相当。若
11、狄氏剂的回收率在95以上，说明预处理后弗罗里硅土的活性是合适的。每次制备弗罗里硅土均应进行活性检查。5仪器玻璃器具使用前应充分洗涤，应避免使用塑料容器和密封油脂，否则会给溶剂引人杂质。容量瓶和移液管应达到ISO 1042和ISO 648中A级品的要求。常用实验仪皿及下述各项：5. 1旋转蒸发仪。5.2粉碎机，配2 mm(10目）筛网。5.3烘箱，鼓风式。5.4马弗炉。5.5电热套。5.6索氏提取器，用于连续萃取（见图1).一刃34 , J*口I I、FY2号口1试料与弗罗里硅土的混合物；2弗罗里硅土；3-1号玻璃滤片。图1烟草萃取装置GB/T 13596-20045.7回流冷凝管。5.8干燥器
12、。5.9石英琳祸。5. 10气相色谱仪按照制造商操作手册运行气相色谱仪。进样口、柱箱和检测器应分别配有独立的加热单元。以下条件适合于某一型号的仪器，供参考。采用其他条件应预先验证其适合性。a)温度进样口温度应为1800C -2100C，检测器温度应为2900C 3400C。采用其他任何条件应保证所有检测组分能很好的分离，且色谱图与示例（参见图A. 1)相似。合适的条件如下：初始温度：400C ;初始时间：2 min;程序升温1：以200C /min速率由40升至150C;程序升温2：以30C/min速率由150升至2700C ;顶温时间：在270保持15 min;总运行时间：62. 5 min
13、,b）气流速率根据仪器操作手册及分析人员的经验设定气流速率，合适的气流速率如下：载气：氦气，4 ml./min;一尾吹气：氮气，30 mL/rnin;隔垫吹扫：5 mL/min;分流流量：30 mL/minoc)进样模式进样量2 t.L，不分流进样，进样后分流阀关闭1 min,5.10.1进样方式自动进样器或其他合适的进样装置。对于手动进样，推荐使用进样体积在1 I.L-5 (AL之间的微量注射器。进样前，用正己烷洗针至少10次，用待测液洗针五次，进样后，用正己烷洗针五次。5.10.2色谱柱推荐使用熔融石英毛细管柱，长30 m，内径0. 32 mm，固定相DB-5 (5甲基苯基硅氧烷），膜厚0
14、. 25 fLm。色谱柱应能使所有被测组分达到很好的分离度，如示例色谱图所示（参见图A. 1) o5.10.3检测器使用电子捕获检测器，灵敏度应达到能够检出进样量2夙涵，浓度0.001 5 Kg/mL的p, p-DDT（峰高两倍于基线噪音）。6采样及试样制备6.1采样烟叶抽样依据GB/T 19616，卷烟抽样依据GB/T 5606. 1。注意确保抽取的样品应能代表被检产品。6.2试样制备烟叶（或烟丝）放人烘箱，50下保持2h，烘后水分应为5左右。研磨样品，过2 mm筛网（5.2)，注意研磨温度不应超过500C。若接收的样品已研磨，应确保其水分含量不超过10000试样应在密闭容器中避光保存，如果
15、测试前需存放一个月以上，应放入冰箱内于一8以下保存。 GB/T 13596-20047操作步骤7.1试料称取5g试料于50 mL烧杯中，精确至。.01 g，加入5g处理后的弗罗里硅土（(4.7)，充分混合。然后按7. 2和7.3所述步骤操作。7.2萃取向索氏提取器中加入5g处理后的弗罗里硅土（4. 7 )，转移按7. 1准备好的试料到弗罗里硅土上，注意不要混合，以形成彼此独立的两层。对于回收率验证试验，在此步骤用移液管移取适量的农药标准溶液，加在试料层顶部。移取60 mL正己烷（(4. 1)和1 mL内标工作液（4. 5 )到合适的圆底烧瓶（容积150 mL-250 mL) e安装索氏提取器，
16、确保每一连接处密封良好，打开电热套（5. 5）加热。调节加热温度和索氏提取器上的旋塞使回流速度至少达到200 mL/h。调节旋塞使正己烷液面恒定保持在试料以上，并保持圆底烧瓶中溶剂不被蒸干，萃取时间4. 5 h.萃取结束后，冷却至少30 min。用萃取液进行气相色谱分析，无需定容。7.3检测器线性度的检查分别移取10 ml, 5 mL, l mL混合储备液A(4. 6. 2)于三个100 MI,容量瓶中，每个容量瓶移人1 mL内标工作液（4.5)，用正己烷定容（4.1)。取100 mL和200 ml-容量瓶各一只，分别移入1 mL混合储备液B(4. 6. 3) ,100 ml、容量瓶加入1 m
17、L内标工作液（4. 5),200 mL容量瓶加入2 mL内标工作液（4. 5 )，用正己烷定容。各溶液农药浓度分别约为0. 5 rg/mL, 0. 25 pg/mL, 0. 05 beg/mL,0. 005 fLg/mL,0. 002 5 rtg/mL,这一系列溶液用于检查电子捕获检测器的响应是否呈线性。检查只需在初次使用检测器或检测器及其相关电路维护之后进行。7.4标准曲线如果检测器的响应呈线性，可以采用单一水平标准曲线。单一水平标准曲线应使用工作标准液（4.6.4)。7.5气相色谱测定打开气相色谱仪（(5.10)，平衡系统。用工作标准液（4.6. 4)进样三次检查结果的重复性，单个结果的偏
18、差不应超过平均值的士5%。每个样品进样两次，由标准曲线得出单个测定值，计算平均值。工作标准液和样品萃取液的示例色谱图参见图A. l和图A. 2所示。8结果的表述内标法计算农药含量。每个农药的相应响应系数Ep由式（1)计算：A E宜p,。立二竺上。1）一FApsi C i51式中：A pst工作标准液（(4. 6.4)农药的峰面积或峰高；A ist工作标准液内标（灭蚁灵）的峰面积或峰高；rpt工作标准液农药的浓度，单位为微克每毫升（tcg/ml.) ;List工作标准液内标的浓度，单位为微克每毫升（f g1ml.) o以干基计的农药残留量Rp，以微克每克表示，由式（2 )计算：。ApEQist1
19、00 R.竺！一P一士二。（2）Aim（100一zc)GB/T 13596-2004式中：A,一一样品萃取液（7.2)农药的峰面积或峰高；A样品萃取液内标的峰面积或峰高；Qt萃取剂内标的质量，单位为微克（t.g) (约5拼9）；m试料质量，单位为克（g),二一一样品的水分百分含量，（质量分数）。9重复性、再现性和回收率本方法精度的共同试验研究结果参见附录Bo10测试报告测试报告应包含采用的方法和得到的以干基计结果（f,g/g)。应分别列出每种农药的残留量。报告还应包含本方法未规定的、或是选择性的操作条件，以及可能对结果产生影响的其他情况。报告应包含样品的唯一性资料。 GB/T 13596-20
20、04附录A（资料性附录）色谱图示例）兰1 2MM p 匕 140 000一洲嗓一114，120 000一一4汾 7一，9100 000一.r二咬甲一。a;。 一留叫8N80 000一，众110 1160 000一I r 1！11N40 000一i Ii 1I - 1 11 0。T, 60 1一20”。I I I I I ml I I I Will比I I I l0 10 20 30 40tmin1 a-HCH; 10一一一。，p-DDE;2六抓苯；11一一a-硫丹；3-声HCH; 12一一狄氏剂；4 Y-HCH；13- p.p-DDE;5一一S-HCH; 14一一。，p-DDD;6七氛；15一
21、一p , p-DDD;7艾氏剂；16一一。,p-DDT;8-Heptachlor epoxide; 17-p,扮DDT;9-抓丹；18灭蚁灵。图A. 1每种农药浓度0. 05 w岁mL工作标准溶液的色谱图GB/T 13596-20044乞鹜巴 140 000一“”互“000三：“r“： 6”。”。三“”“三。，“”。五一M M M cp ap M M 01 t0 ep tCOno O M N N立口一1111111111！III I I0 10 20 30 40tmin图A. 2无农药残留烟草样品的色谱图 GB/T 13596-2004附录B（资料性附录）实验室间试验研究结果一项由12个实验室
22、参加，用四个农药添加水平样品（F, , Fz , Fs , Fa）进行的共同试验研究得出了表B. 1所列出的平均回收率（Rec. )、重复性标准偏差（S,）和重现性标准偏差（SR).表B. 1共同试验研究结果F, Fz F, F, 7v JA / Rec. / ig1JAt/ Rec. / fbUt1 Rec. / FbaI/ Rec. / J fS SR S, SR S. SR S, S,z (rlglg)(lag/g) (0o) (Kg/g) (Yo) (lag/g) (%) (fg/g) (0o)0.0995 79 12 27 0.4975 102 14 18 0.9950 105 8
23、13 4.9750 95 11 18 0.027- 0. 1000 89 17 25 0.5000 99 10 15 1.0000 100 6 11 5.0000 86 5 14 0.02Pq -iA A 0.1005 100 26 34 0.5025 101 15 16 1.0050 109 9 19 5.0250 100 7 29 0.01T -iA A 0.1020 62 13 27 0.5100 88 7 18 1.0200 96 9 15 5.1000 90 12 22 0.020.1000 109 9 19 0.5000 105 16 18 1.0000 105 8 13 5.00
24、00 88 8 16 0.020.1020 100 13 19 0.5100 105 13 15 1.0200 107 12 16 5.1000 101 13 25 0.023t 0.1000 83 13 24 0.5000 100 14 14 1.0000 107 8 14 5.0000 103 7 25 0.02# ,-; 爛nullEnullnullnullnull绊nullnullEnullnullYnullpnull1 nullf技贾倚拔倱nullnulld匍nullnull/nullnullnullnullenull淖酌助劝null掰nullnullnullnullnullnull
25、null8nullnullnullnull2DPnullnullhnullnullnull烛sPnull8魇nullnullnullnullnullIIQnullnull摒nullnullnull乞nullX跪Pnullnullnullnullnull操偃讲搽毪nullnull熟忐null3nullnullnullnull曡null8nullnullnull俊2屟堰咤nullnullnullnullhnullnull鑠00H(, 0.1025 84 15 29 0.5125 89 16 19 1.0250 97 16 18 5.1250 91 11 24 0.02IX f 0.0995 86
26、8 23 0.4975 96 6 14 0.9950 102 4 10 4.9750 99 6 18 0.020. 1010 105 12 25 0. 5050 106 9 11 1. 0100 110 4 7 5. 0500 101 8 19 0.03a-R, 0. 1010 73 14 36 0. 5050 81 9 15 1. 0100 83 10 18 5.0500 77 10 23 0.031k K 0. 1015 84 15 34 0. 5075 87 23 27 1. 0150 93 13 22 5.0750 95 14 31 0.02p,p-AAf# 0.1000 104 10
27、121 0.5000 115 6 17 1.0000 120 4 15 5.0000 112 6 21 0.02#4CKM 0.0995 53 12 35 0.4975 59 30 31 0.9950 58 19 41 4.9750 78 26 43 0.0313-al YT 0.1000 12 17241 0.5000 12 19 21 1.0000 14 15 21 5.0000 12 9 22 0.02o, p-AAA 0. 1005 111 9 201 0. 5025 109 6 10 1. 0050 114 5 101 5. 0250 100 1 9 12 0.03p, p-Aag
28、0. 1010 117 14 29 0. 5050 113 8 20 1. 0100 116 6 19 5. 0500 119 13 25 0.02o,p=A A A 0.1015 106 lll27 0.5075 109 10 18 1.0150 109 7 14 5.0750 102 8 10 0.04p, p=t 7 15 0. 1005 104 13 24 0.5025 111 8 21 1.0050 117 5 22 5. 0250 116 11 21 0.06每个实笛槭室对每扛个添加水平的样品进行了两次测定，因此在每个添加水平上每种农药共灿null8null霾null定结果。详细的
29、统计评价报告见参考文献3口。GB/T 13596-2004表B. 2依据IUPAC（国际理论和应用化学联合会）规则命名表题 GB/T 13596-2004参考文献1 ISO 1750：1981,Pesticides and other agrochemicals-Common names2 The Pesticide Manual，9th Edition,British Crop Protection Council3 Document 94/3a of CORESTA subgroup on pesticide residue. Kreuter,U.，Haib. ,. Results ofstatistical evaluation of joint experiment on organochlorine pesticide residues in tobacco usingmethod 93/14
