1、ICS 65.020.30 B 45 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13752011 鸡蛋中三聚氰胺的残留测定 气相色谱质谱法 Determination of melamine residues in eggs by GC-MS method 2011 - 03 - 16 发布 2011 - 04 - 16 实施安徽省质量技术监督局 发布DB34/T 13752011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省畜牧兽医局提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。
2、 本标准主要起草人：李珲、许世富、汤春莲、陶小平、丁作坤、陈文帮。 DB34/T 13752011 1 鸡蛋中三聚氰胺的残留测定气相色谱质谱法 1 范围 本标准规定了鸡蛋中三聚氰胺的残留检测的气相色谱质谱（GC-MS）测定方法。 本标准适用于鸡蛋中三聚氰胺残留的定性定量检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 试样制备 按 GB/T 14699.1 抽取有代表
3、性的不少于 500 g 的鸡蛋样品，经过匀浆后装入磨口瓶中在-18冰箱保存备用。 4 原理 试样经超声提取、固相萃取净化后，进行硅烷化衍生，衍生产物采用选择离子监测质谱扫描模式（SIM），用化合物保留时间和质谱碎片的丰度比定性，外标法定量。 5 试剂和材料 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的二级水。 5.2 吡啶：优级纯。 5.3 乙酸铅。 5.4 衍生化试剂：N,O-双三甲基硅基三氯乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷（TMCS）(99+1),色谱纯。 5.5 乙酸铅溶液：称取 22 g 乙酸铅用水溶解后定容至 1 L。 5.6 甲醇水溶液：准确
4、量取 50 mL 甲醇和 50 mL 水，混匀后备用。 5.7 三氯乙酸溶液：称取 10 g 三氯乙酸，用水溶解并定容至 1 L，备用。 5.8 固相萃取柱（SPE）：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60 mg/3 mL，或相当者。使用前依次用 3 mL 甲醇、5 mL 水活化。 5.9 氨化甲醇溶液：准确量取 5 mL 氨水和 95 mL 甲醇，混匀后备用。 5.10 微孔滤膜：0.22 m，有机相。 5.11 氮气：纯度 99.99。 5.12 三聚氰胺标准品：纯度 99.0。 DB34/T 13752011 2 5.13 三聚氰胺标准储备液（1 m
5、g/mL）：准确称取 100 mg（精确到 0.1 mg）三聚氰胺标准品，用甲醇水溶液（5.5）溶解并稀释至 100 mL，摇匀， 4 保存，有效期 90 d。 5.14 三聚氰胺工作液（10 g /mL）：准确吸取三聚氰胺标准储备液（5.8）1 m L 于 100 mL 容量瓶中，用甲醇水溶液（5.5）定容至刻度，摇匀，4 保存，有效期 30 d。 5.15 三聚氰胺标准溶液：准确移取三聚氰胺工作液（5.13）适量，分别用甲醇水溶液（5.5）稀释为0.00、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 g/mL 的标准溶液，摇匀，4 保存，有效期 7 d。 6 仪器和设备 6.
6、1 气相色谱-质谱仪（GC-MS）：配有电子轰击电离离子源（EI）。 6.2 电热恒温箱。 6.3 分析天平：感量为 0.0001 g 和 0.01 g。 6.4 离心机：转速不低于 4000 r/min。 6.5 超声波清洗器。 6.6 涡旋混合器。 6.7 氮气吹干仪。 6.8 固相萃取装置。 7 测定步骤 7.1 试样提取 称取匀浆后的鸡蛋 5 g (精确至 0.01 g),于 5 0 mL 具塞塑料离心管中，加入 25 mL 三氯乙酸溶液（5.6），涡旋振荡 30 s，再加入 15 mL 三氯乙酸溶液（5.6），超声提取 15 min，加入 2 mL 乙酸铅溶液（5.4），用三氯乙酸溶
7、液（5.6）定容至刻度，充 分混匀后，转移上层提取液至 50 mL 离心管中，4000 r/min 离心 10 min，备用。 7.2 试样净化 准确移取 7.1 项下上清液 5 mL，至活化好的固相萃取柱（5.7 ）中，依次用 3 mL 水、3 mL 甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽近干后用 3 mL 氨化甲醇溶液（5.8）洗脱，收集洗脱液，50 水浴氮气吹干。 7.3 衍生化 取 7.2 项下氮气吹干残留物，加入 600 L 的吡啶（5.1）和 200 L 衍生化试剂（5.3），混匀，70 下反应 30 min 后， 放冷后供GC-MS法定性定量检测， 同时分别取三聚氰胺标准溶液(5.14)800
8、 L，氮气吹干，做同步衍生。 7.4 气相色谱-质谱测定 7.4.1 GC-MS 参考条件 a) 色谱柱：5苯基二甲基聚硅氧烷石英毛细管柱，30 m0.25 mm（i.d.）0.25 m，或相当者； b) 流速：10 mL/min； c) 程序升温：70 保持 1 min，以 10/mi n 的速率升温至 200，保持 10 min； d) 传输线温度：200； DB34/T 13752011 3 e) 进样口温度：250； f) 进样方式：不分流进样； g) 进样量：1 L； h) 电离方式：电子轰击电离（EI）； i) 电离能量：70 eV； j) 离子源温度：230； k) 扫描模式：选
9、择离子扫描，定性离子 m/z99、171、327、342，定量离子 m/z327。 7.4.2 定量测定 待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应对净化液稀释，重新衍生化后再进样分析。 7.4.3 定性判定 以标准样品的保留时间和监测离子（m/z99、171 和 342）定性，待测样品中 4 个离子（m/z99、171、327 和 342）丰度比与标准品的相对离子丰度比相差不大于 20。 8 结果计算 按照下式计算试样中各种药物的含量： 1000mAs1000VCsAX= . (1) 式中： X 试样中各种药物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A 试样溶液对应
10、的色谱峰面积响应值； As 标准溶液对应的色谱峰面积响应值； V 定容体积，单位为毫升（mL）； Cs 标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； m 试样质量，单位为克（g）。 平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 本方法在生鲜乳中的检出限为 0.05 mg/kg。 9.2 准确度 本方法在添加浓度为 0.2 mg/kg 时回收率均为 70110。 9.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV10，批间变异系数 CV15。 DB34/T 13752011 4 A A 附 录 A （资料性附录） 色谱图 A.1 三聚氰胺标准溶液衍生物选择离子色谱图 图A.1 三聚氰胺标准溶液衍生物选择离子色谱图 A.2 三聚氰胺标准溶液衍生物选择离子质谱图 图A.2 三聚氰胺标准溶液衍生物选择离子质谱图 （定性离子：m/z99、171、327 和 342） _
