1、 ICS:65.020.30 B 40 备案号： 23073-2008 四川省地方标准DB51DB51/T799-2008鸡蛋中五种磺胺类药物残留量检测方法高效液相色谱（HPLC）法 Determination of Five Sulfonamides Residues in Eggs by High Performance Liquid Chromatography 2008-06-06 发布 2008-16-15 实施四川省质量技术监督局发布DB51/T799-2008 I 目 次 前言 . II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 制样 1 4 测定方法 1 5 检测方法灵敏度、准
2、确度、精密度 3 附录A （资料性附录） 磺胺类药物色谱图 . 4 DB51/T799-2008 II 前 言 为了规范我省畜禽产品鸡蛋的生产和销售过程，保障人民的身体健康，我国规定鸡蛋中磺胺类药物总量不超过0.1mg/kg。因此,研究出一种操作简便、快速、灵敏的磺胺类药物残留量检测方法,对于畜禽产品的安全具有现实意义，我们在总结国内外相关检测方法的基础上，制订了用高效液相色谱法测定鸡蛋中磺胺类药物残留量的标准。 本标准按GB/T1.12000 标准的结构和编写规则进行编制，GB/T 1.22000标准化工作导则 第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法进行修改。 本标准附录A是资料性附录
3、。 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准发布。 本标准起草单位：四川省兽药残留监控中心、四川省兽药监察所。 本标准主要起草人：谢青、彭莉、岳秀英、熊浩山、官艳丽、吴晓岚 王海波。 DB51/T799-2008 1 鸡蛋中五种磺胺类药物残留量检测方法 高效液相色谱（HPLC）法 1 范围 本标准规定了鸡蛋中磺胺类药物残留量检测的制样和高效液相色谱（HPLC）测定方法。 本标准适用于鸡蛋中磺胺类药物的残留量测定。定量限为20g/Kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容
4、）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682-1992 分析实验室用水规则和试验方法 3 制样 3.1 样品的制备 取适量新鲜或冷藏的空白和供试去壳全蛋，匀浆混合使之均匀、密封。 3.2 样品的保存 -20以下冰箱中贮存备用。 4 测定方法 4.1 方法提要或原理 鸡蛋中的磺胺类药物用乙腈提取，正己烷脱脂，碱性氧化铝萃取柱净化，旋转蒸发仪蒸干。用高效液相色谱仪测定，外标法定量。 4.2 试剂和材料 以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的
5、一级水。 4.2.1 对照品：SMM，SM 2，SMZ，SDM，SQ标准品：纯度99 SIGMA公司 4.2.2 WATERS 碱性氧化铝 SPE 柱（2g 10 mL）或相当者 4.2.3 乙腈 甲醇 色谱纯 4.2.4 正己烷，正丙醇，冰乙酸,无水硫酸钠 4.2.5 五种磺胺标准贮备溶液 取五种磺胺标准品约 10mg，精密称定，用甲醇溶解并稀释成浓度为100g/mL 的标准贮备液，置-20保存，保存期不超过一年。 4.2.6 五种磺胺标准溶液 准确量取五种磺胺标准贮备溶液适量， 用流动相依次稀释成浓度为 10、 25、50、100、250 g/L 的标准溶液。置 4冰箱中保存，保存期不超过
6、一个月。 4.3 仪器和设备 4.3.1 高效液相色谱仪，配紫外检测器 4.3.2 电子天平 感量 0.01g 4.3.3 电子天平 感量 0.00001g 4.3.4 组织匀浆机 DB51/T799-2008 2 4.3.5 漩涡混合仪 4.3.6 振荡器 4.3.7 冷冻离心机 4.3.8 固相萃取装置 4.3.9 旋转蒸发仪 4.3.10 离心管 50mL 4.3.11 鸡心瓶 50mL 4.3.12 分液漏斗 100mL 4.3.13 微孔滤膜 0.45m 4.4 测定步骤 4.4.1 试料的制备 试料的制备包括： 取冷冻样品于室温解冻，将解冻后的样品作为供试样品。 取冷冻空白样品于室
7、温解冻，将解冻后的空白样品作为空白样品。 取空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加样品。 4.4.2 提取 称取供试样品5.0g（精确到0.05g）于离心管中，加入乙腈20mL，无水硫酸钠4g，在涡旋混合仪上混匀后并振荡10 min，3000r/min,离心5min，将上层液全部转入分液漏斗中，再加入乙睛10mL按上述步骤重复提取，合并两次上清液，加入正己烷15mL，混匀静止，取下层液体于鸡心瓶中，加入正丙醇5mL，于500C减压旋转蒸干，加95%的乙睛5mL于鸡心瓶中，充分涡旋溶解残留物，备用。 4.4.3 净化 用95%的乙睛5mL活化碱性氧化铝柱。取上述备用液，以每34秒1滴的流速
8、通过预处理后的碱性氧化铝柱，再用95%的乙睛5mL洗涤鸡心瓶过柱，不收集。最后 用70%的乙睛10mL洗脱并用鸡心瓶收集洗脱液，加入正丙醇5mL，于500C减压旋转蒸干，用流动相1mL溶解残余物，充分涡旋，用0.45m滤膜过滤，滤液供高效液相色谱仪测定。 4.4.4 标准曲线的制备 将浓度为10g/L、25g/L、50g/L、100g/L、250 g/L的系列标准溶液，供高效液相色谱仪测定。 4.4.5 测定 4.4.5.1 液相色谱条件 色谱仪：Waters 2695 高效液相色谱仪（配紫外检测器）或相当者 色谱柱：Waters SymmetryC18 (4.6mm250mm，5m) 或相当
9、者 柱温：30 流速：1.0mL/min 进样量：20L 流动相：乙腈-甲醇-水-乙酸（V/V 2+2+9+0.2） 4.4.5.2 测定法 积计算，即得。标准溶液及试样溶液中磺胺类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。标准溶液的色谱图见附录A中图A。 4.4.6 空白试验 除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。 4.5 结果计算和表述 按下式计算试样中磺胺类药物的残留量： AC V sX= A m sDB51/T799-2008 3 式中: X 试样中磺胺类药物的残留量(g/kg)； A 试样溶液中磺胺类药物的峰面积； AS 标准溶液中磺胺类药物的峰面积； cs 标准溶液中磺
10、胺类药物的浓度(g/L)； V 溶解残余物的体积(L)； m 供试鸡蛋试样的质量 (kg)。 注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留 3 位有效数字。 5 检测方法灵敏度、准确度、精密度 5.1 灵敏度 本方法在鸡蛋中的检测限为10g/kg，定量限为20g/kg。 5.2 准确度 本方法在鸡蛋中20g/kg100g/k g添加浓度的回收率为70%110%。 5.3 精密度 本方法的批内变异系数CV17%； 批间变异系数CV26%。 DB51/T799-2008 4 附 录 A （资料性附录） 磺胺类药物色谱图 图 图 A 磺胺类药物标准溶液色谱图(100 g/L) 峰1：磺胺二甲基嘧啶（SM 2） 峰2：磺胺间甲氧嘧啶（SMM） 峰3：磺胺甲恶唑（SMZ） 峰4：磺胺二甲氧嘧啶（SDM） 峰5：磺胺喹恶啉（SQ） 图
