1、Norme internationale INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.MEX b) un ballon distillation et raction; c) un rfrigrant; d) une plaque chauffante rglage contrl. Le ballon distillation et raction doit tre un ballon de 500 ml fond plat, parois paisses, quip dun joint sphrique et dun logement des
2、tin recevoir un thermometre gradu de 0 360 OC conforme aux spcifications de IISO/R 1770, dsigna- tion 9/75. Le gnrateur de vapeur et le ballon distillation doivent tre raccords par un robinet trois voies. La troisieme voie doit tre utilise pour vacuer la vapeur travers un rfrigrant lorsquelle nest p
3、as utilise. Ceci permet de maintenir la vitesse constante dbullition lorsque tion. Attention - Lensemble I lon change le ballon distilla- de lappareillage doit tre entoure dun cran de protection. 5.6 Spectrophotomtre, couvrant les longueurs dondes comprises entre 425,455 et 485 nm et muni de cuves d
4、e 10 mm dpaisseur. 6 chantillonnage Effectuer lchantillonnage selon la mthode spcifie dans IISO 4874. 7 Mode opratoire 7.1 Prparation de lchantillon Broyer lchantillon dans un broyeur de laboratoire de faon que lensemble de lchantillon broy passe au travers dun tamis de 2 mm douverture de maille. Ml
5、anger entierement lchantillon broy. 7.2 Prises dessai Peser 0,Ol g prs, 1 g de lchantillon prpar ci-dessus. 7.3 Dtermination Si ncessaire, la digestion alcaline peut tre prcde dune prdigestion acide (voir annexe A). 7.3.1 Digestion alcaline Transfrer la prise dessai dans le ballon distillation et ra
6、c- tion. Ajouter 50 ml de la solution dhydroxyde de sodium (4.4), une petite quantit de lagent anti-moussant (4.8) et quelques granuls (4.9). Introduire un thermomtre 0 360 OC dans le logement prvu contenant Ihuile haut point dbullition (4.10) et chauffer avec prcaution, en remuant de temps en temps
7、 le contenu du ballon. Faire rduire le contenu dans le ballon jusqu ce que le thermomtre indique une temprature de 165 OC, ceci prend environ 10 15 min. Laisser refroidir pen- dant 5 min. 7.3.2 Distillation (voir annexe B) Faire dbuter la production de vapeur et placer lprouvette gra- due de 100 ml
8、(5.2), contenant 10 ml de la solution dacide sulfurique (4.6) de faon que lextrmit du tube rallonge de sortie du rfrigrant soit en-dessous de la surface de lacide. Ajouter 0,5 g de chlorure de fer(ll) (4.7) et 15 g de granuls de zinc (4.3) au contenu du ballon distillation. Raccorder imm- diatement
9、le ballon lappareillage et commencer la distillation par admission de la vapeur dans le ballon et en chauffant son contenu une temprature de 200 + 10 OC. Durant la distilla- tion, maintenir un courant rapide deau froide dans le rfrig- rant. Maintenir le ballon cette temprature durant la distilla- ti
10、on afin de sassurer que 100 ml de distillat sont recueillis en 2 SO48764980 (FI Vers la production de vapeur Isolation rsistant Plaque chauffante Eau froide- Q Vers les eaux rsid uai res I I I I I prouvette I 1 gradue I I I 1 I 1 I LJ Figure - Appareillage pour la dbtermination de Ihydrazide malique
11、 dans le tabac 20 min environ. Rincer lextrmit du tube de rallonge de sortie du rfrigrant dans le distillat. Refroidir le distillat et filtrer a tra- vers lentonnoir plaque filtrante en verre fritt (5.4) et recueillir le filtrat dans le bcher de 250 ml, en rinant lprouvette et lentonnoir avec enviro
12、n 5 ml deau. Ajouter dans le bcher quelques granuls rgulateurs dbullition et vaporer le con- tenu sur une plaque chauffante jusqu obtenir environ 6 ml, mais pas moins. On peut galement concentrer le distillat dans un vaporateur rotatif. Si ncessaire, le distillat peut tre purifi avant de procder la
13、suite des oprations (voir annexe A). 7.3.3 Rbaction avec le 4-dimthylaminobenzald6hyde Refroidir le distillat obtenu comme dcrit en 7.3.2, le transfrer quantitativement dans une fiole jauge de 25 ml (5.1) et ajouter 2 ml de la solution 4-dimthylaminobenzaldhyde (4.1) avant dajuster au trait repre av
14、ec de leau. Boucher la fiole, bien mlanger et conserver labri de la lumiere pendant environ 30 min. 7.3.4 Mesurages spectrophotom m, est la masse, en grammes, de tabac prleve consti- tuant la prise dessai; mwl est la teneur moyenne en eau de lchantillon. Une correction doit tre faite pour toute dilu
15、tion ultrieure (voir 7.3.4). Prendre comme rsultat, la moyenne de deux valeurs, tant entendu que les conditions de rptabilit (8.2) sont satisfaites. 8.2 Rptabilit La diffrence entre les rsultats de deux dterminations effec- tues simultanment ou successivement sans attendre entre les deux oprations,
16、par le mme oprateur, ne doit pas tre sup- rieure 5 % de leur valeur moyenne, lorsque la valeur moyenne est suprieure 10 pg/g, ou 1 pg/g lorsque la valeur moyenne est infrieure 10 pg/g. 8 Expression des rsultats 9 Procs-verbal dessai 8.1 Mode de calcul et formule Lire sur la courbe dtalonnage, la qua
17、ntit dhydrazide mali- que prsente dans la solution de lchantillon dessai. La teneur en hydrazide malique, exprime en microgrammes par gramme de tabac, est donne par la formule : -f-L 100 mo IOO- m, Le proces-verbal dessai doit indiquer la mthode utilise et les rsultats obtenus. II doit, en outre, me
18、ntionner tous les dtails opratoires non prvus dans la prsente Norme internationale, ou considrs comme facultatifs, (par exemple, un mode op- ratoire particulier dcrit dans lannexe A), ainsi que les inci- dents susceptibles davoir agi sur les rsultats. Le pro&-verbal dessai doit donner tous les rense
19、ignements ncessaires lidentification complte de lchantillon. ISO 48764980 (FI Annexe A Modes opratoires particuliers facultatifs A.1 Gnralits A.l.l Les protines prsentes dans le tabac peuvent parfois causer un exces de mousse pendant la digestion alcaline et les stades de distillation. Lintroduction
20、 du stade de prdigestion acide dcrit en A.2 dtruit les matires protiniques et rduit la formation de mousse. A.1.2 Certains tabacs, spcialement ceux contenant une proportion importante de bases, contiennent des substances naturelles qui interferent avec la raction et donnent une cou- leur rouge avec
21、le 4-dimthylaminobenzaldhyde. Un traite- ment du .distillat avec du charbon actif comme dcrit en A.3, limine cette interfrence. A.1.3 Aucun de ces modes opratoires ne doit tre utilis, sauf si loprateur les considere comme ncessaires pour les chantillons particuliers soumis lessai. A.2 Prdigestion ac
22、ide A.2.1 Ractifs supplmentaires requis A.2.1.1 Acide chlorhydrique, solution environ 3 M. Diluer 270 ml dacide chlorhydrique environ 1,18 g/ml 1 000 ml avec de leau distille et mlanger. A.2.1.2 Hydroxyde de sodium, solution 700 g/l. A.2.2 Mode opratoire Transfrer la prise dessai dans le ballon dist
23、illation et rac- tion. Ajouter 50 ml de lacide chlorhydrique (A.2.1 .l) et une petite quantit de cire de paraffine. Chauffer le ballon et faire bouillir le contenu a vitesse modre jusqu ce que le volume soit rduit un volume compris entre 20 et 25 ml. Laver les parois du ballon avec environ 25 ml dea
24、u et faire bouillir de nouveau jusqu ce que le volume soit compris entre 20 et 25 ml. Laisser refroidir. NOTE - Le tabac partiellement digr peut tre laiss dans cet tat pour la nuit, mais si lhydroxyde de sodium a t ajout, la mthode doit tre termine aussi vite que possible. Ajouter lentement et en re
25、muant, 50 ml de la solution dhydroxyde de sodium (A.2.1.2) et procder la digestion alcaline comme en 7.3.1. A.3 Nettoyage au charbon A.3.1 Ractif supplmentaire requis A.3.1.1 Charbon actif) A.3.2 Mode opratoire Agiter le distillat obtenu comme dcrit en 7.3.2 avec 2 g de charbon actif (A.3.1.1) durant 1 min et filtrer avant de procder la concentration 6 ml dcrite en 7.3.2. 1) Un matriau appropri est disponible dans le commerce. Des dtails peuvent tre obtenus auprs du Secrtariat de IISO/TC 126 (DIN, Allema- gne, R. F.) ou du Secrtariat central de IISO. 5
