1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖犜代替进出口肉及肉制品中盐霉素残留量检测方法酶联免疫法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犛犪犾犻狀狅犿狔犮犻狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犿犲犪狋犪狀犱犿犲犪狋狆狉狅犱狌犮狋狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犈狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狊狅狉犫犲狀狋犪狊狊犪狔发布实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布版权所有 禁止翻制、电子发售书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口肉及肉制品中盐霉素残留量检测方法酶联免疫法中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街号邮政编码：网址电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本印张字数千字年月第一版年月第一
2、次印刷印数书号：定价元版权所有 禁止翻制、电子发售书书书前言本标准按照给出的规则起草。本标准代替出口肉及肉制品中盐霉素残留量检验方法滤纸片法。本标准与相比，主要技术变化如下：将原标准的检测方法滤纸片法变更为酶联免疫法；将原标准中文名称出口肉及肉制品中盐霉素残留量检验方法滤纸片法修订为进出口肉及肉制品中盐霉素残留量检验方法酶联免疫法；修改了适用的范围；删除了原标准的抽样内容。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局，中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人：赵良娟、贺艳、孙哲平、张宏伟、郑文杰、赵宏、高旗利、候丽萍、闫煜。本标准
3、所代替标准的历次版本发布情况为：。犛犖犜版权所有 禁止翻制、电子发售进出口肉及肉制品中盐霉素残留量检测方法酶联免疫法范围本标准规定了进出口肉及肉制品中盐霉素残留量的酶联免疫测定方法。本标准适用于进出口鸡肉中盐霉素残留量的检测，其他肉及肉制品可参照执行。试剂和材料除另有规定外，所用化学试剂均为分析纯，或为更高级别。水为去离子水。盐霉素酶联免疫定量测定试剂盒）（参见附录）。）给出该信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对某一产品操作步骤的认可。如果其他产品的操作步骤有不同，需经实验评估后采用。甲醇。氯化钠。二氯甲烷。氢氧化钠。的氯化钠溶液：称取氯化钠加去离子水溶解定容至。甲醇氯化钠溶液：甲醇加入到
4、的氯化钠溶液中混匀。氢氧化钠氯化钠溶液：称取氢氧化钠加氯化钠溶液溶解定容至。复溶工作液：用去离子水将浓缩复溶液按体积比进行稀释。环境可保存个月。洗涤工作液：用去离子水将浓缩洗涤液按体积比进行稀释。环境可保存个月。盐霉素标准品：标准品纯度。盐霉素标准品溶液的配制：准确称取适量的盐霉素标准品，用复溶工作液配制成标准贮备溶液，于条件下保存。仪器和设备酶标仪：波长。匀浆机。振荡器。天平：量程，感量。离心机：犵。氮气吹干仪。洗板机。微量加样器：、。微量多通道加样器：、。犛犖犜版权所有 禁止翻制、电子发售试样的制备和保存试样的制备从所取全部样品中取出有代表性样品约，充分搅碎，混匀，采用四分法，将样品分成两
5、等份，装入洁净容器，加封并做标识。试样的保存试样放置条件下保存。测定方法方法提要本方法的测定基础是间接竞争性酶联免疫反应，样本中的盐霉素与微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗盐霉素抗体，加入酶标二抗后，用底物显色，样本吸光值与其所含盐霉素的含量成负相关，按绘制的校正曲线定量计算即可得出盐霉素的含量。样品处理称取试样均质物至离心管中，加入甲醇氯化钠溶液，剧烈振荡，犵以上离心；移取上清液加入氢氧化钠氯化钠溶液，混合均匀，再加入二氯甲烷，振荡，犵离心；除去上层，取下层至试管中，于水浴氮气吹干；用复溶工作液溶解干燥的残留物；取用于分析。酶联免疫法测定操作条件所有操作应在室温下（）进行，盐霉素试剂盒中所有试剂
6、的温度均应回升至室温（）后方可使用。测定步骤测定中吸取不同的试剂和样品溶液时应更换吸头。在酶标板中分别加入不同浓度的盐霉素标准溶液和样品待测液；每个标准溶液和样品待测液均做孔平行。再在每个孔中加入的抗体工作液；轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后，室温避光反应。弃掉酶标板中的液体，用洗涤工作液孔充分洗板次次。每孔再加入酶标二抗，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后，室温避光反应。弃掉酶标板中的液体，用洗涤工作液重复洗板次次。每孔加入底物液液，再加底物液液，轻轻振荡混匀，室温避光反应后，每孔加入终止液，轻轻振荡混匀，内在酶标仪上读出每孔吸光值。空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。犛犖犜版权所有 禁止翻制、
7、电子发售结果表述百分吸光率的计算：标准品或样本的吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（标准）的吸光度值，再乘以，见式（）：吸光度值犅犅（）式中：犅标准溶液或样本溶液的平均吸光度值；犅标准溶液的平均吸光度值。以标准品吸光率为纵坐标，以盐霉素标准品浓度（）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中盐霉素实际残留量。也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算，所得结果表示至一位小数。检测限、回收率检测限本方法的检测限为。回收率本方法中盐霉素添加浓度及回收率的试验数据：添加浓度为时，平均回收率为；添加浓度为时，平均回收率为；添加浓度为时，平均回收率为；添加浓度为时，平均回收率为。确证试验如被测样品中盐霉素残留量的值大于检测限时，应用其他方法进行确证。犛犖犜版权所有 禁止翻制、电子发售书书书犛犖犜附录犃（资料性附录）盐霉素酶联免疫定量测定试剂盒犃盐霉素酶联免疫定量测定试剂盒本标准酶联免疫测定步骤中使用的试剂盒包括：孔酶标板块（包被有偶联抗原）；标准液：，；高浓度盐霉素标准品：；酶标二抗；抗体工作液；底物液液；底物液液；终止液；浓缩洗涤液；浓缩复溶液。犃盐霉素标准曲线盐霉素标准曲线见图。图犃盐霉素标准曲线犜犖犛书号：定价：元版权所有 禁止翻制、电子发售
