1、书 书 书 中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 犛 犖 犜 代 替 进 出 口 贝 类 腹 泻 性 贝 类 毒 素 检 验 方 法 第 部 分 ： 小 鼠 生 物 法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀 狅 犳 犱 犻 犪 狉 狉 犺 犲 狋 犻 犮 狊 犺 犲 犾 犾 犳 犻 狊 犺 狆 狅 犻 狊 狅 狀 狊 犻 狀 狊 犺 犲 犾 犾 犳 犻 狊 犺 犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱 犲 狓 狆 狅 狉 狋 犘 犪 狉 狋 ： 犕 狅 狌 狊 犲 犫 犻 狅 犾 狅 犵 狔 犿 犲 狋 犺 狅 犱 发 布 实 施 中 华
2、人 民 共 和 国 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布书 书 书 前言 进 出 口 贝 类 食 品 中 腹 泻 性 贝 类 毒 素 检 验 方 法 共 分 为 两 部 分 ： 第 部 分 ： 荧 光 磷 酸 酶 抑 制 法 ； 第 部 分 ： 小 鼠 生 物 法 。 本 部 分 为 的 第 部 分 。 本 部 分 代 替 出 口 贝 类 腹 泻 性 贝 类 毒 素 检 验 方 法 。 本 部 分 与 相 比 ， 主 要 变 化 如 下 ： 将 原 标 准 名 称 修 订 为 贝 类 中 腹 泻 性 贝 类 毒 素 检 验 方 法第 部 分 ： 小 鼠 生 物 法 ； 将 范
3、 围 进 行 了 简 化 和 修 改 ； 增 加 了 术 语 和 定 义 ； 试 剂 和 材 料 中 增 加 了 吐 温 生 理 盐 水 的 具 体 配 制 方 法 ； 在 结 果 计 算 和 表 述 中 ， 增 加 了 报 告 表 述 方 式 ； 增 加 了 健 康 和 安 全 的 提 示 条 款 。 本 部 分 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出 并 归 口 。 本 部 分 起 草 单 位 ： 中 华 人 民 共 和 国 辽 宁 出 入 境 检 验 检 疫 局 、 中 华 人 民 共 和 国 云 南 出 入 境 检 验 检 疫 局 、 中 华 人 民 共 和 国
4、 山 东 出 入 境 检 验 检 疫 局 。 本 部 分 主 要 起 草 人 ： 曹 际 娟 、 王 秋 艳 、 郑 秋 月 、 徐 杨 、 王 刚 、 于 兵 、 郑 惠 芳 、 赵 昕 、 吴 振 兴 。 本 部 分 所 代 替 标 准 历 次 版 本 发 布 情 况 为 ： 。 犛 犖 犜 进 出 口 贝 类 腹 泻 性 贝 类 毒 素 检 验 方 法 第 部 分 ： 小 鼠 生 物 法 范 围 的 本 部 分 规 定 了 贝 类 及 其 制 品 中 腹 泻 性 贝 类 毒 素 的 小 鼠 生 物 测 定 方 法 。 本 部 分 适 用 于 贝 类 及 其 制 品 中 腹 泻 性 贝 类
5、 毒 素 的 检 验 。 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 部 分 的 引 用 而 成 为 本 部 分 的 条 款 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 随 后 所 有 的 修 改 单 （ 不 包 括 勘 误 的 内 容 ） 或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 部 分 ， 然 而 ， 鼓 励 根 据 本 部 分 达 成 协 议 的 各 方 研 究 是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 适 用 于 本 部 分 。 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和
6、 试 验 方 法 实 验 动 物环 境 及 设 施 术 语 和 定 义 下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 的 本 部 分 。 腹 泻 性 贝 类 毒 素犱 犻 犪 狉 狉 犺 犲 狋 犻 犮 狊 犺 犲 犾 犾 犳 犻 狊 犺 狆 狅 犻 狊 狅 狀 狊 ， 犇 犛 犘 化 学 结 构 以 大 田 软 海 绵 酸 （ ， 简 称 ） 及 其 衍 生 物 为 代 表 的 ， 摄 食 后 可 产 生 以 腹 泻 为 主 要 特 征 的 存 在 于 贝 类 体 内 的 海 洋 生 物 毒 性 物 质 的 总 称 。 鼠 单 位犿 狅 狌 狊 犲 狌 狀 犻 狋 ， 犕 犝 对 体 重 为 的
7、只 雄 性 小 白 鼠 腹 腔 各 注 射 贝 类 提 取 液 后 ， 使 只 或 只 小 鼠 在 死 亡 的 毒 力 为 个 鼠 单 位 。 试 样 保 存 和 制 备 试 样 保 存 样 品 要 有 充 分 的 代 表 性 并 尽 可 能 没 有 个 体 差 异 。 同 时 ， 还 要 有 充 分 的 个 数 。 去 壳 贝 肉 、 带 壳 的 或 罐 装 的 等 ， 均 应 采 取 足 够 的 个 数 并 使 贝 肉 达 以 上 。 远 离 实 验 室 不 能 及 时 送 检 的 样 品 ， 除 了 在 常 温 下 品 质 不 会 发 生 变 化 的 ， 应 将 样 品 置 于 合 成
8、树 脂 袋 内 冷 冻 送 检 。 如 为 带 壳 样 品 ， 应 按 的 方 法 开 壳 ， 去 除 水 分 后 冷 冻 送 检 。 样 品 的 制 备 生 鲜 带 壳 样 品 的 前 处 理 用 清 水 彻 底 洗 净 贝 类 外 壳 ， 切 断 闭 壳 肌 ， 开 壳 ， 用 清 水 淋 洗 内 部 去 除 泥 沙 及 其 他 外 来 物 ， 取 出 贝 肉 。 不 应 以 加 热 或 加 药 物 的 方 法 开 壳 。 注 意 不 要 破 坏 闭 壳 肌 以 外 的 组 织 ， 尤 其 是 中 肠 腺 （ 又 称 消 化 盲 囊 ， 组 织 呈 暗 绿 色 或 褐 绿 色 ） 。 将
9、去 壳 贝 肉 放 在 孔 径 约 的 金 属 筛 网 上 ， 沥 水 ， 按 制 备 检 样 。 冷 冻 样 品 的 前 处 理 在 室 温 下 ， 使 冷 冻 样 品 呈 半 冷 冻 状 态 。 带 壳 冷 冻 样 品 ， 按 方 法 清 洗 、 开 壳 、 淋 洗 取 肉 ， 此 时 的 犛 犖 犜 贝 肉 仍 呈 冷 冻 状 态 ， 除 去 贝 肉 外 部 附 着 的 冰 片 ， 轻 轻 抹 去 水 分 后 ， 按 制 备 检 样 ； 事 先 已 去 除 水 分 的 冷 冻 去 壳 样 品 ， 室 温 缓 化 后 ， 按 制 备 检 样 。 制 备 检 样 对 于 可 以 切 取 中
10、肠 腺 的 贝 类 （ 如 ： 扇 贝 、 贻 贝 及 牡 蛎 等 ） ， 称 量 贝 肉 后 ， 仔 细 切 取 全 部 中 肠 腺 ， 将 中 肠 腺 称 量 后 作 为 检 样 备 用 ， 注 意 不 要 使 中 肠 腺 内 容 物 污 染 制 样 工 具 ； 不 便 切 取 中 肠 腺 的 贝 类 样 品 ， 称 量 贝 肉 后 ， 可 将 全 部 贝 肉 细 切 、 混 合 ， 作 为 检 样 。 测 定 方 法 方 法 提 要 用 丙 酮 提 取 贝 类 中 毒 素 ， 再 转 移 至 乙 醚 中 ， 经 减 压 蒸 干 后 ， 再 以 吐 温 生 理 盐 水 为 分 散 介 质
11、， 制 备 吐 温 生 理 盐 水 混 悬 液 ， 将 该 混 悬 液 注 射 入 小 鼠 腹 腔 ， 观 察 小 鼠 存 活 情 况 ， 计 算 其 毒 力 。 仪 器 和 设 备 旋 转 蒸 发 器 。 圆 底 烧 瓶 ： 、 、 、 。 均 质 器 ： 转 速 以 上 。 布 氏 漏 斗 。 天 平 ： 感 量 。 带 塞 刻 度 试 管 ： ， 具 刻 度 。 分 液 漏 斗 。 冰 箱 ： 和 。 一 次 性 注 射 器 （ ） 及 注 射 器 针 头 （ ） 。 试 剂 和 材 料 除 另 有 规 定 外 ， 所 有 化 学 试 剂 均 为 分 析 纯 或 生 化 试 剂 ， 水
12、为 符 合 规 定 的 一 级 水 。 丙 酮 ， （ ） 。 无 水 乙 醚 ， （ ） 。 吐 温 生 理 盐 水 ： 称 取 吐 温 （ ） ， 溶 于 生 理 盐 水 （ 氯 化 钠 ） 中 ， 并 定 容 至 。 小 白 鼠 ： 体 重 为 的 健 康 品 系 雄 性 小 鼠 。 测 定 步 骤 试 样 提 取 将 检 样 置 于 均 质 杯 内 ， 加 倍 量 丙 酮 均 质 至 少 。 如 为 小 均 质 杯 ， 可 分 两 次 操 作 。 将 均 质 好 的 物 质 倒 入 布 氏 漏 斗 中 抽 滤 ， 收 集 抽 提 液 。 对 残 渣 分 别 用 残 渣 倍 量 的 丙
13、酮 再 抽 滤 两 次 ， 其 抽 提 液 与 所 得 抽 提 液 合 并 。 将 抽 提 液 移 入 的 圆 底 烧 瓶 中 ， 调 整 旋 转 蒸 发 器 水 浴 温 度 为 ， 减 压 浓 缩 去 除 丙 酮 直 至 在 液 体 表 面 分 离 出 油 状 物 。 将 浓 缩 液 移 入 分 液 漏 斗 内 ， 以 乙 醚 和 少 量 的 水 洗 下 粘 壁 部 分 ， 轻 轻 振 荡 （ 不 能 生 成 乳 浊 液 ） ， 静 置 分 层 后 去 除 水 层 （ 下 层 ） 。 用 相 当 乙 醚 半 量 的 蒸 馏 水 洗 乙 醚 层 两 次 ， 再 将 乙 醚 层 移 入 或 的
14、圆 底 烧 瓶 中 ， 减 压 浓 缩 （ 旋 转 蒸 发 器 ， ） 去 除 乙 醚 。 用 少 量 乙 醚 将 浓 缩 物 移 入 或 圆 底 烧 瓶 中 ， 再 次 减 压 浓 缩 去 除 乙 醚 。 以 吐 温 生 理 盐 水 将 全 部 浓 缩 物 在 刻 度 试 管 中 稀 释 到 ， 充 分 振 摇 ， 制 成 均 匀 吐 温 生 理 盐 水 混 悬 液 。 此 时 液 量 相 当 于 预 先 测 定 的 去 壳 贝 肉 的 质 量 ， 以 此 悬 浮 犛 犖 犜 液 作 为 试 验 原 液 进 行 动 物 实 验 。 以 试 验 原 液 注 射 小 鼠 ， 内 只 或 只 小
15、鼠 死 亡 时 ， 需 将 试 验 原 液 进 一 步 稀 释 ， 再 注 射 小 鼠 。 稀 释 前 ， 应 先 振 荡 使 试 液 成 均 匀 悬 浮 液 ， 再 取 其 部 分 以 吐 温 生 理 盐 水 稀 释 。 小 白 鼠 试 验 选 择 体 重 为 的 健 康 品 系 雄 性 小 鼠 只 ， 随 机 分 组 ： 检 测 样 品 组 和 空 白 对 照 组 （ 吐 温 生 理 盐 水 ） ， 只 组 。 以 振 荡 器 使 待 测 液 （ 试 验 原 液 或 其 稀 释 液 ） 成 为 均 匀 悬 浮 液 。 分 别 取 待 测 液 或 吐 温 生 理 盐 水 腹 腔 注 射 。
16、注 射 时 若 有 一 滴 以 上 提 取 液 溢 出 ， 应 将 该 只 小 鼠 丢 弃 ， 并 重 新 注 射 一 只 小 鼠 。 记 录 注 射 完 毕 时 间 和 小 鼠 停 止 呼 吸 时 的 死 亡 时 间 ， 未 死 亡 的 应 连 续 观 察 。 观 察 时 限 内 ， 在 空 白 对 照 组 小 鼠 正 常 的 情 况 下 ， 检 测 样 品 组 若 出 现 只 或 只 小 鼠 死 亡 ， 则 应 按 表 进 行 最 小 染 毒 量 动 物 实 验 或 最 大 稀 释 度 实 验 。 表 注 射 量 与 毒 力 的 关 系 试 验 液 注 射 量 检 样 量 毒 力 （ ）
17、原 液 原 液 倍 稀 释 液 倍 稀 释 液 倍 稀 释 液 倍 稀 释 液 以 中 肠 腺 为 检 样 时 ， 相 当 于 含 有 中 肠 腺 的 去 壳 肉 量 。 结 果 计 算 和 表 述 观 察 时 限 内 ， 在 空 白 对 照 组 小 鼠 正 常 的 情 况 下 ， 若 检 测 样 品 组 无 小 鼠 死 亡 或 仅 有 只 小 鼠 死 亡 ， 则 报 告 该 检 测 样 品 中 毒 力 为 ： 。 观 察 时 限 内 ， 在 空 白 对 照 组 小 鼠 正 常 的 情 况 下 ， 若 检 测 样 品 组 有 只 或 只 小 鼠 死 亡 ， 则 按 进 行 动 物 实 验 ，
18、并 根 据 表 ， 计 算 检 测 样 品 中 毒 力 并 报 告 结 果 ， 或 报 告 该 样 品 的 毒 力 为 大 于 。 健 康 和 安 全 任 何 含 量 大 于 的 样 品 即 被 认 为 是 有 害 的 ， 人 类 食 用 不 安 全 。 腹 泻 性 贝 类 毒 素 是 一 种 有 毒 的 混 合 物 ， 为 避 免 腹 泻 性 贝 类 毒 素 的 危 害 ， 应 戴 手 套 进 行 检 验 操 作 。 橡 胶 手 套 、 玻 璃 制 品 等 用 过 的 器 材 应 在 的 次 氯 酸 钠 溶 液 中 浸 泡 以 上 ， 以 使 毒 素 分 解 。 同 样 ， 废 弃 的 提
19、取 液 等 也 应 以 上 述 溶 液 处 理 。 所 有 对 含 有 丙 酮 及 乙 醚 溶 液 的 操 作 应 在 通 风 橱 中 进 行 。 小 鼠 尸 体 应 按 要 求 焚 烧 处 理 ， 其 排 放 物 应 达 到 污 物 焚 烧 排 放 规 定 要 求 。 犛 犖 犜 书 书 书 犜 犖 犛 中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行业标准 进 出 口 贝 类 腹 泻 性 贝 类 毒 素 检 验 方 法 第 部 分 ： 小 鼠 生 物 法 中 国 标 准 出 版 社 出 版 北 京 复 兴 门 外 三 里 河 北 街 号 邮 政 编 码 ： 网 址 电 话 ： 中 国 标 准 出 版 社 秦 皇 岛 印 刷 厂 印 刷 开 本 印 张 字 数 千 字 年 月 第 一 版 年 月 第 一 次 印 刷 印 数 书 号 ： 定 价 元
