1、书 书 书 中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 犛 犖 犜 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 血 清 分 型 方 法 犛 犲 狉 狅 狋 狔 狆 犻 狀 犵 狅 犳 犔 犻 狊 狋 犲 狉 犻 犪 犿 狅 狀 狅 犮 狔 狋 狅 犵 犲 狀 犲 狊 发 布 实 施 中 华 人 民 共 和 国 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布书 书 书 中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行业标准 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 血 清 分 型 方 法 中 国 标 准 出 版 社 出 版 北 京 复 兴 门 外
2、三 里 河 北 街 号 邮 政 编 码 ： 网 址 电 话 ： 中 国 标 准 出 版 社 秦 皇 岛 印 刷 厂 印 刷 开 本 印 张 字 数 千 字 年 月 第 一 版 年 月 第 一 次 印 刷 印 数 书 号 ： 定 价 元书 书 书 前言本 标 准 的 附 录 为 规 范 性 附 录 。 本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出 并 归 口 。 本 标 准 起 草 单 位 ： 中 华 人 民 共 和 国 北 京 出 入 境 检 验 检 疫 局 。 本 标 准 主 要 起 草 人 ： 曾 静 、 魏 海 燕 、 张 西 萌 、 王 金 花 、 陈 广
3、 全 、 张 惠 媛 、 饶 红 、 付 溥 博 、 畅 晓 辉 、 张 昕 、 汪 琦 、 马 旭 。 本 标 准 系 首 次 发 布 的 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 。 犛 犖 犜 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 血 清 分 型 方 法 范 围 本 标 准 规 定 了 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 的 血 清 分 型 方 法 。 本 标 准 适 用 于 对 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 进 行 血 清 分 型 ， 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 的 溯 源 可 参 照 本 方 法 。 规 范 性 引 用 文 件下 列 文
4、件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为 本 标 准 的 条 款 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 随 后 所 有 的 修 改 单 （ 不 包 括 勘 误 的 内 容 ） 或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 标 准 ， 然 而 ， 鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究 是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准 。 食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 检 验 实 验 室生
5、物 安 全 通 用 要 求 设 备 和 材 料 台 式 离 心 机 ： 犵 。 冰 箱 ： 。 浊 度 计 。 加 热 器 。 接 种 针 。 试 管 ： 。 试 管 架 ： 适 用 于 试 管 。 移 液 器 ： 适 用 于 ， ， 。 恒 温 水 浴 ： 。 无 菌 载 玻 片 。 生 物 安 全 柜 。 培 养 基 和 试 剂 动 力 琼 脂 ： 见 第 章 。 胰 蛋 白 磷 酸 盐 肉 汤 （ ） ： 见 第 章 。 甲 醛 溶 液 。 灭 菌 生 理 盐 水 ： 见 第 章 。 含 甲 醛 生 理 盐 水 ： 见 第 章 。 抗 血 清 。 抗 血 清 。 方 法 提 要 待 测
6、菌 株 应 是 经 鉴 定 确 证 为 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 的 纯 培 养 物 ， 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 的 抗 血 清 与 李 斯 特 属 其 他 种 之 间 存 在 交 叉 反 应 现 象 ， 所 以 错 误 鉴 定 的 或 不 纯 的 培 养 物 ， 在 进 行 血 清 型 鉴 定 时 会 得 出 错 误 的 结 果 ； 抗 原 ， 又 称 鞭 毛 抗 原 ， 抗 原 位 于 细 菌 鞭 毛 上 ， 在 鉴 定 抗 原 时 应 使 用 有 运 动 性 犛 犖 犜 的 菌 株 ； 应 先 鉴 定 抗 原 ， 后 鉴 定 抗 原 。 单 核 细
7、胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 抗 原 和 抗 原 的 关 系 见 表 。 表 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 血 清 型 抗 原 结 构 血 清 型 抗 原 抗 原 ， ， ， ， ， ， （ ） ， ， ， ， ， ， ， ， （ ） ， ， ， ， （ ） ， （ ） ， 检 验 流 程 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 血 清 分 型 流 程 见 图 。 图 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 血 清 分 型 程 序 图 犛 犖 犜 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 血 清 分 型 方 法 犎 抗 原 鉴 定 将 活 化 的 待 测 菌 株 用
8、接 种 针 垂 直 穿 刺 接 种 于 动 力 培 养 基 ， ， 培 养 。 典 型 的 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 在 半 固 体 培 养 基 上 呈 伞 状 生 长 。 挑 取 生 长 在 动 力 培 养 基 伞 状 菌 苔 边 缘 ， 接 种 于 液 体 培 养 基 ， ， 培 养 。 在 培 养 液 中 加 入 甲 醛 溶 液 ， 使 甲 醛 的 终 浓 度 为 （ 在 的 培 养 液 中 加 入 的 甲 醛 溶 液 ） ， 处 理 菌 体 细 胞 。 离 心 收 集 菌 体 ， 犵 ， 离 心 。 重 悬 菌 体 细 胞 于 含 甲 醛 生 理 盐 水 中 ， 调
9、整 菌 体 细 胞 浓 度 ， 该 菌 悬 液 为 标 准 菌 悬 液 ； 也 可 以 用 经 甲 醛 处 理 的 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 菌 悬 液 进 行 抗 原 凝 集 反 应 ， 其 凝 集 反 应 结 果 应 与 用 甲 醛 生 理 盐 水 洗 涤 的 标 准 菌 悬 液 相 同 。 在 试 管 中 分 别 加 入 经 稀 释 的 抗 血 清 ， ， 和 ， 与 等 体 积 经 甲 醛 处 理 的 菌 悬 液 充 分 混 匀 ， 同 时 用 灭 菌 生 理 盐 水 代 替 抗 血 清 作 为 阴 性 对 照 ， 水 浴 保 温 ； 在 水 浴 保 温 之 后 ，
10、用 肉 眼 观 察 是 否 有 凝 集 反 应 发 生 。 凝 集 反 应 表 现 为 ： 形 成 沉 淀 ， 上 清 液 清 澈 ， 有 凝 集 反 应 发 生 ， 为 阳 性 反 应 ， 可 判 定 相 应 抗 原 ； 如 无 凝 集 反 应 发 生 ， 则 可 判 断 为 阴 性 反 应 。 犗 抗 原 鉴 定 将 活 化 的 待 测 菌 株 接 种 于 液 体 培 养 基 ， 培 养 ， 犵 ， 离 心 收 集 菌 体 ， 如 果 用 玻 片 法 进 行 凝 集 反 应 ， 用 培 养 基 洗 涤 菌 体 细 胞 一 次 ； 如 果 用 试 管 法 进 行 凝 集 反 应 ， 用 含
11、甲 醛 生 理 盐 水 洗 涤 菌 体 细 胞 一 次 。 玻 片 法 用 含 甲 醛 生 理 盐 水 重 悬 菌 体 细 胞 ， 制 成 高 浓 度 的 菌 悬 液 （ 菌 悬 液 的 浊 度 等 于 或 高 于 ） ， 置 抗 血 清 于 灭 菌 玻 片 上 ， 与 等 体 积 的 菌 体 抗 原 充 分 混 合 ， 同 时 用 ， 灭 菌 生 理 盐 水 与 等 体 积 的 菌 体 抗 原 混 合 作 为 阴 性 对 照 。 用 手 握 住 载 玻 片 的 两 边 ， 在 黑 色 背 景 衬 托 下 ， 接 近 灯 光 进 行 观 察 。 如 果 凝 聚 反 应 不 典 型 ， 用 试
12、管 法 进 行 凝 集 反 应 。 试 管 法 试 管 法 鉴 定 抗 原 的 方 法 与 鉴 定 抗 原 的 方 法 基 本 相 同 。 所 不 同 的 是 将 等 体 积 混 合 的 抗 血 清 和 菌 体 抗 原 ， 保 温 后 ， 在 冰 箱 过 夜 ， 观 察 凝 集 反 应 结 果 ； 或 是 在 水 浴 保 温 过 夜 ， 观 察 凝 集 反 应 结 果 。 血 清 型 结 果 判 定 根 据 抗 原 和 抗 原 凝 集 反 应 结 果 从 表 查 到 相 应 的 血 清 型 。 安 全 措 施 为 了 保 护 试 验 室 人 员 的 安 全 ， 所 有 培 养 物 和 废 弃
13、物 应 小 心 处 置 。 并 按 中 有 关 规 定 执 行 。 犛 犖 犜 书 书 书 犛 犖 犜 附录犃 （ 规 范 性 附 录 ） 培 养 基 和 溶 液 配 制 犃 犛 犐 犕 动 力 琼 脂 犃 成 分 胰 胨 多 价 胨 硫 酸 铁 胺 硫 代 硫 酸 钠 琼 脂 蒸 馏 水 犃 制 法 将 上 述 各 成 分 加 热 混 匀 ， 调 ， 分 装 小 试 管 ， 高 压 灭 菌 ， 备 用 。 犃 胰 蛋 白 磷 酸 盐 肉 汤 （ ） 犃 成 分 胰 大 豆 琼 脂 酵 母 抽 提 物 蒸 馏 水 犃 制 法 用 孔 径 为 细 菌 过 滤 器 过 滤 除 菌 。 犃 生 理 盐 水 将 氯 化 钠 溶 解 于 蒸 馏 水 中 ， 分 装 ， 高 压 灭 菌 ， 。 犃 含 甲 醛 的 生 理 盐 水 将 氯 化 钠 溶 解 于 蒸 馏 水 中 ， 加 的 甲 醛 ， 分 装 ， 高 压 灭 菌 ， 。 犜 犖 犛 书 号 ： 定 价 ： 元
