1、道昌中华人民共和国国家标准GB 25555-2010 食品安全国家标准食品添加剂L乳酸钙2010-12-21发布2011-02-21实施中华人民共采口国卫生部发布数码防伪GB 25555-2010 前言本标准的附录A为规范性附录。I GB 25555一2010食品安全国家标准食品添加剂L-乳酸钙1 范围本标准适用于以发酵法生产的L-乳酸与碳酸钙(或氢氧化钙)合成制得的食品添加剂L-乳酸钙。2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。3 化学名称、分子式、
2、结构式和相对分子质量3. 1 化学名称-是基丙酸钙3.2 分子式C6 HIO Ca06 xHz O(x=05) 3.3 结构式O H nu OHHm 。+ + 组unL O 阻止丁。3.4 相对分子质量218.22C元水物)(按2007年国际相对原子质量)4 技术要求4. 1 感官要求:应符合表1的规定。表1感官要求项目要求检验方法色泽白色气味元异味取适量实验室样品，置于清洁、干燥的玻璃培养皿中，在自然光线下，从上方及侧面观察其色泽及外观，嗅其气味组织状态颗粒或粉末1 GB 25555-2010 4. 2 理化指标:应符合表2的规定。表2理化指标项目指标检验方法立体化学纯度(L体)/% 96.
3、0 附录A中A.4总乳酸钙(以干基计)，w/%98. 0101. 0 附录A中A.5干燥减量，w/%22. 027. O(五水);15. 020. O(三水h附录A中A.65. 08. O(一水);三二3.0(元水)水溶解试验通过试验附录A中A.7游离酸和游离碱试验通过试验附录A中A.8挥发性脂肪酸试验通过试验附录A中A.9钱及碱金属，w/%、二、1. 0 附录A中A.10氯化物(以Cl计)，w/%主二0.05 附录A中A.ll硫酸盐(以SO，计)，w/%主0.075 附录A中A.12 铁(Fe),w/% 运二0.005 附录A中A.13碑(As)/ (mg/kg) 4二2 附录A中A.14铅
4、(Pb)/ (mg/kg) 飞、2 附录A中A.15领(Ba)试验通过试验附录A中A.16氟化物(以F计)，四/%运二0.001 5 附录A中A.172 GB 25555-2010 A.1 曹示附录A(规范性附录)检验方法试验方法规定的一些试验过程可能导致危险情况。操作者应采取适当的安全和防护措施。A.2 一般规定除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682-2008中规定的三级水。试验方法中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T602和GB/T603之规定制备。A.3 鉴别试验A. 3.1 试剂和材料A. 3
5、.1.1 硫酸。A. 3. 1. 2 高锺酸饵榕液:3.2g/L。A. 3.1.3 草酸锻溶液:40g/L。A. 3.1.4 盐酸溶液:1+30A. 3.1.5 乙酸溶液:1+20。A.3.2 分析步骤A.3.2.1 钙盐的鉴别取约0.5g实验室样品，溶于10mL水，滴加草酸镀溶液，即产生白色沉淀。分离沉淀，加入乙酸溶液，沉淀不溶解;再加入盐酸溶液，沉淀完全溶解。A. 3. 2. 2 乳酸盐的鉴别取约0.5g实验室样品，加10mL热水溶解，滴加硫酸使其呈酸性，加高健酸饵溶液，加热，即发出乙醒的气味。A.4 立体化学纯度(L体)的测定A. 4.1 方法提要用高效液相色谱法，在选定的工作条件下，通
6、过色谱柱使样品溶液中L体乳酸钙和D体乳酸钙组分分离，用紫外吸收检测器检测，用面积归一化法定量，计算总乳酸钙中L体乳酸钙的含量，即为L-乳酸钙的立体化学纯度。3 GB 25555一2010A.4.2 试剂和材料硫酸铜溶液:0.001mol/Lo A.4.3 仪器和设备A. 4. 3.1 高效灌相色谱系统(HPLC)A. 4. 3. 1. 1 高压泵:元脉冲，能将流速保持在O.1 mL/min10. 0 mL/min。A.4.3.1.2 定量环:5L。A. 4. 3. 1. 3 紫外光检测器:可变波长。A. 4. 3. 1.4 数据处理系统:色谱工作站或数据处理机。A.4.3.2 抽滤系统抽滤系统
7、使用孔径为0.45m的纤维素醋膜滤纸(用于流动相的预处理)。A.4.3.3 过滤系统过滤系统使用孔径为0.45m的纤维素醋膜滤纸(用于样品的预处理)。A.4.3.4 微量进样针HPLC专用，50L、100L(或自动进样器)。A.4.4 色谱分析条件推荐的色谱柱及典型操作条件见表A.1，立体化学纯度(L体)的测定典型高效液相色谱图见图A.1。保留时间IL体乳酸钙约18.5min，D体乳酸钙约23.5min(保留时间会有变动，以标准样品出峰时间为准)。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。表A.1色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱往长150mm，柱内径4.6mm，以配位交换型光学活性固
8、定相涂敷于ODS二氧化硅的填料手性色谱柱柱温20 C40 C，控制精度土1C流动相硫酸铜溶液流动速度/(mL/min)1. 0 检测器检测波长/nm254 进样量/L5(注入乳酸浓度约为0.1%)，D体与L体分离度在1.0以上4 GB 25555-2010 国.LFNl2 。-Rl国.巳|。-2|盯.NH|口.CH|n m / t 1一-L体乳酸钙;2一一D体乳酸钙。立体化学纯度(L体)测定典型高效液相色谱图图.1分析步骤.4.5 样晶制备称取实验室样品约0.15g，精确至0.001g，加热水溶解后，转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀备用。. 4. 5.1 测定根据仪器说明书，调节仪器
9、至表A.1所示的操作条件，待仪器稳定后即可开始测定。用微量注射器或用自动进样器进样，用色谱数据处理机或工作站处理计算结果，以面积归一化法定量。.4.5.2 结果计算立体化学纯度(L体)即总乳酸钙中L体乳酸钙的含量Xj，数值以%表示，按公式(A.l)计算:Xj=一主_1._ X 100% AI+Ad .4.6 ( A.1 ) 式中:AI一一L体乳酸钙组分的峰面积;Ad一一D体乳酸钙组分的峰面积。取两次平行测定结果的算术平均值为报告结果。两次平行测定结果的绝对差值不大于0.2%。总乳酸钙(以干基计)的测定.5 方法提要在碱性条件下，以干燥减量后的试样消耗络合剂乙二股四乙酸二锅标准滴定液的体积计算其
10、总乳酸钙的含量，用钙试剂竣酸铀指示剂的颜色变化判断滴定的终点。.5.1 试剂和材料.5.2 5 氢氧化铀溶液:100 g/L。.5. 2.1 GB 25555一2010A. 5.2. 2 盐酸溶液:1+4.A. 5. 2. 3 乙二胶四乙酸二铀标准滴定溶液:c(EDTA)=0.05mol/L. A. 5. 2. 4 钙试剂竣酸铀指示剂:称取0.1g钙试剂竣酸铀盐，加10g在约110.C干燥过的氯化铀研磨，混匀。A.5.3 分析步骤称取约0.3g A. 6. 1中干燥物A，精确至0.0002 g，溶于已加有2mL盐酸溶液的50mL水中，边搅拌边滴加15mL乙二胶四乙酸二铀标准滴定溶液，再加5mL
11、氢氧化铀溶液和0.1g钙试剂竣酸铀指示剂，用乙二肢四乙酸二铀标准滴定液滴定至溶液呈现蓝色为终点。A.5.4 结果计算总乳酸钙含量的质量分数t屿，数值以%表示，按公式(A.2)计算z式中:(V/1000) c1 v 1 r, 0,1 W2=只、lVV70z V一一试料消耗乙二股四乙酸二铀标准滴定溶液体积的数值，单位为毫升(mL); c 乙二胶四乙酸二铀标准滴定溶液浓度的准确数值，单位为摩尔每升(mol/L); m 试料质量的数值，单位为克(g); M一一乳酸钙(CsH lO CaOs )的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔(g/moD(M=218. 2)。( A.2 ) 取两次平行测定结果的算术平均
12、值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于0.2%。A.6 干操减量的测定A.6.1 分析步骤称取约1.5g实验室样品，精确至0.0002 g，置于预先在(120士2).C干燥至质量恒定的扁形称量瓶中，铺成3mm以下的层。在(120土2)OC的恒温干燥箱中干燥4h，置于干燥器中冷却30min称量。保留部分干燥物(此为干燥物A)用于总乳酸钙含量的测定。A.6.2 结果计算干燥减量的质量分数1屿，数值以%表示，按公式(A.3)计算:式中zW3=旦二旦_l_X 100% m m 干燥前试料质量的数值，单位为克(g); mj一一干燥后试料质量的数值，单位为克(g)。.(A. 3) 取两次平行测定结
13、果的算术平均值为报告结果。两次平行测定结果的绝对差值不大于0.2%。A.7 水溶解试验A.7.1 试剂和材料A.7. 1. 1 硝酸溶液:1+2。A.7. 1.2 糊精溶液:20g/L。A.7. 1.3 硝酸银溶液:17 g/L。GB 25555-2010 A.7. 1.4 浊度标准溶液:含氧(Cl)O.Olmg/mL。量取c(HCl) = o. 1 mol/L盐酸标准溶液14.1mL, 置于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度。量取该溶液10.00mL，置于1000 mL容量瓶中，加水稀释至刻度。A.7.2 分析步骤称取1.0g实验室样品，精确至0.01g，置于25mL比色管中，加20mL水，在
14、水浴上加热溶解，作为试验溶液;取另一只比色管，加入(0.20士O.02) r浊度标准溶液，加水至20mL，加1mL硝酸溶液、0.2 mL糊精溶液和1mL硝酸银溶液，摇匀，避光放置15min，作为标准比浊溶液。在无阳光直射情况下，目视轴向及侧面观察，试验溶液的浊度不得大于标准比浊溶液的浊度。A.8 游离酸和游离醋试验A. 8.1 试剂和材料A. 8.1. 1 氢氧化铀标准榕液:c(NaOH)二0.1mol/L , A. 8. 1. 2 酣献指示液:10g/L。A. 8. 2 分析步骤称取1.0g实验室样品，精确至0.01g，溶于20mL元二氧化碳的水，加3滴酣默指示液，不应有粉红色产生;:110
15、O. 5 mL氢氧化铀标准溶液，应呈粉红色。A.9 挥发性脂肪酸试验称取约0.5g实验室样品，精确至0.01g，置于干燥蒸发皿中，加1mL硫酸，搅拌，在水浴上加热，不应有脂肪酸气味逸出。A.10 镶及暗金属含量的测定A. 10. 1 方法提要样品中的钙在酸性条件下与草酸生成难溶的草酸钙沉淀，过滤，滤液中的钱及碱金属和硫酸加热生成硫酸盐，再过滤，滤液蒸干，灼烧后定量。A. 10.2 试剂和材料A.10.2.1 盐酸。A. 10.2.2 硫酸。A.10.2.3 氨水。A. 10.2.4 草酸溶液:150 g/L。A.10.2.5 甲基红指示液:1g/L。A.10.3 分析步骤称取1.0g实验室样品
16、，精确至0.01g，加水40mL，再加1mL盐酸，煮沸1min，迅速加40mL草酸溶液和2滴甲基红指示液，用氨水中和至溶液刚好呈黄色，冷却至室温。移人100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，放置4h或过夜。用干燥滤纸过掘，取50mL澄清滤液，置于预先于(800士25)OC干燥至质量恒定的增揭中，加0.5mL硫酸，在水浴上蒸发至近干，在电炉上加热至硫酸蒸气逸尽，于(800土GB 25555-2010 25)OC灼烧至质量恒定。残渣质量不得大于5.0mg。.11 氯化物的测定按中华人民共和国药典)2005年版二部附录回A的规定进行。称取o.1 g实验室样品，精确至0.001 g，其所呈浊度不得大于标
17、准比浊溶液。量取(5士0.02)mL氧化物(Cl)标准溶液(0.01mg/mL) 制备标准比浊溶液。.12 硫酸盐的测定按中华人民共和国药典)2005年版二部附录V1B的规定进行。称取试样0.20g，精确至0.001g , 其所呈浊度不得大于标准比浊溶液。量取(1.5土0.02)mL硫酸盐(S04)标准溶液(0.1mg/mL)制备标准比浊溶液。.13 铁的测定按中华人民共和国药典)2005年版二部附录回G的规定进行。称取O.5 g实验室样品，精确至0.01 g，加25mL水，置于水浴中加热溶解，冷却后为试验溶液，其所呈颜色不得深于标准比色溶液。量取(2.5士0.02)mL铁(Fe)标准溶液(0
18、.01mg/mL)制备标准比色溶液。.14 呻的测定按GB/T5009. 76呻斑法进行。测定时称取1.0g实验室样品，精确至0.01g，加10mL热水溶解。限量标准液的配制z用移液管移取2.00mL呻(As)标准溶液(相当于O.002 mg As) ，与试样同时同样处理。.15 铅的测定按GB/T5009. 75限量试验进行。样品处理为:称取3.0g试样，精确至0.01g，加热水30mL 溶解，移入分液漏斗中，加1%硝酸至40mL。量取0.60mL铅(Pb)标准溶液(相当于0.006mg Pb)制备铅限量标准液。.16 钮试验称取1.0g实验室样品，精确至0.01g，加20mL热水溶解，分为
19、两等份置于2个25mL比色管中，一份加1mL硫酸钙饱和溶液混匀，另一份加1mL水，放置15min后比较，样品管所呈混浊不得大于对照管。.17 氟化物的测定. 17. 1 方法提要在高氯酸介质中，通过蒸汽蒸馆使氟自样品中分离，氟与茜素氨竣络合剂和硝酸髓的混合剂形成蓝色络合物，在620nm处测定其吸光度，根据工作曲线计算试样的氟化物含量。GB 25555-2010 A.17.2 试剂和材料A. 17.2. 1 丙酬。A.17.2.2 高氯酸。A.17.2.3 氢氧化铀溶液:4g/L。A.17.2.4 氢氧化铀溶液:40g/Lo A.17.2.5 硝酸银溶液:2g/100 mL。A.17.2.6 盐
20、酸:1十10。A. 17.2.7 硝酸锢榕液z称取0.22g硝酸锢，用少量乙酸溶液(3+47)溶解，加水至约450mL，用乙酸铀榕液(250g/L)调节pH为5.0，再加水稀释至500mL，置冰箱内(60C_80C)保存，生霉后则重配。A.17.2.8 缓冲液(pH4.7):称取44g乙酸铀，榕于400mL水中，加22mL冰乙酸，再缓缓加冰乙酸调节pH为4.7，然后加水稀释至500mL。A.17.2.9 氟标准溶液:0.01mg /mL。称取经105oC干燥2h的氟化铀0.221g，精确至0.0002 g。溶于水，移入100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，贮于聚乙烯瓶中备用，置冰箱中保存，此氟
21、标准储备液浓度为1.0mg/mL。临用前，吸取(1士0.02)mL氟标准储备液，稀释至100mL，混匀，贮于聚乙烯瓶中。此为0.01 mg/mL的氟标准溶液。A. 17.2.10 酣敢指示液:10 g/L。A.17.2.11 茜素氨竣络合剂榕液z称取O.193 g茜素氨竣络合剂，加少量水及氢氧化铀榕液(40g/L) 使其溶解，加0.13g乙酸铀，用1mol/L乙酸调节pH为5.0(红色)，加水稀释至500mL，贮于棕色瓶中，置冰箱内(6oC-8 OC)保存，出现沉淀时应重配。A. 17.3 仪器和设备A. 17.3.1 分光光度计:带有光程为30mm的石英比色皿，吸光度精度为士0.004(A)
22、。A.17.3.2 测氟蒸馆装置示意图见图A.204 7 1一一水蒸气发生器(1000 mL烧瓶); 2一一橡皮塞;3一一5mm玻璃管54一一三通管和螺丝夹;5一-200c温度计z6一一250mL三口烧瓶57一一一加热套或电炉z8一一玻璃弯管F9 -一一500mm直形冷凝管z10一一一250mL容量瓶。圄A.2测氟蒸锢装置示意图9 GB 25555-2010 A. 17.4 分析步骤A. 17.4.1 氟标准曲线的绘制分别吸取omL、0.5mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0mL、2.5mL氟标准溶液置于6根50mL比色管中，每根比色管加入(5士0.02)mL茜素氨殷络合剂溶液和(3士0.
23、02)mL缓冲液，棍匀。慢慢加入(5士0.02)mL硝酸铺溶液，振摇，再加(10士0.02)mL丙圃，加水至50mL，混匀，室温放置25mino移入30 mm的石英比色皿中，于波长620nm处测定吸光度;以氟质量为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。A. 17.4.2 测定称取2g实验室样品，精确至0.01g，置于250mL三口烧瓶中，加玻璃珠56粒，缓慢加入高氯酸10 mL，用约8mL的水冲洗瓶壁，加硝酸银试液46滴;按测氟蒸馆装置示意图(见图A.2)接好装置，瓶塞上的温度计应密塞，温度计的水银球应插入试验溶液中，冷凝器末端的玻璃弯管插入己加入约90 mL氢氧化铀溶液(A.17.2.
24、3)和2滴酣酥的250mL容量瓶中。水蒸气发生器中加入500mL水，510粒玻璃珠;并滴加氢氧化铀溶液(A.17.2.4)使成碱性。打开螺丝夹，加热至近沸。关闭螺丝夹，将水蒸气通人250mL三口烧瓶，同时加热三口烧瓶，调节水蒸气的进入量使温度上升后保持在135 oC140 .C之间;如果容量瓶中溶液褪色，补加适量的氢氧化铀溶液(A.17. 2. 3)，保持馆出液呈碱性，直至200mL，停止蒸懵;用氢氧化铀溶液(A.17.2.3)和盐酸溶液调节pH为中性(用精密pH试纸检验)，再加盐酸溶液2滴，加水至250mL，摇匀，为试验溶液。从容量瓶中吸取(25士0.02)mL样品溶液于比色管中，加(5士0
25、.02)mL茜素氨援络合剂溶液和(3土0.02)mL缓冲液，混匀。慢慢加入(5士0.02)mL硝酸铺溶液，振摇，再加(10士0.02)mL丙酣，加水至50mL，混匀，室温放置25min。移入30 mm的石英比色皿中，在波长620nm处测定吸光度。根据预先做好的标准曲线查出氟的质量。A. 17.5 结果计算氟化物(以F计)的质量分数t屿，数值以%表示，按公式(A.4)计算z式中z10m, 4一一:X 100% 1000m m , 注人分光光度计试样中的氟的质量，单位为毫克(mg); m 试料的质量，单位为克(g)。10 ( A.4 ) EON-mmmmN阁。国华人民共和国家标准食品安全国家标准白L-乳酸钙食晶潘加荆GB 25555一一2010* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张1字数20千字2011年2月第一次印刷开本880X12301/16 2011年2月第一版* 书号:155066. 1-41396 18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533定价GB 25555-2010 打印日期:2011年2月21日F002
