1、GB ICS 65. 150 B 52 中华人民共和国国家标准GB 20555-2006 虾、，.J.Jl口本日Ea- EE-EE -EE- l 刷刷刷刷刷刷刷刷刷A斗HHHMMMMMO UUUU川们们们们川口UUUUHHHHHHHnu -tttttnU HHHHHHHHnu 啤呻EEEEEEE巧iEa-EEE-ftA lA UUUUUO MMMMMM川川牛iuu们们们nu-. | . Oriental river prawn 2006-12-01实施2006-09-29发布发布中华人民共和国国家质量监督检验检痊总局中国国家标准化管理委员会目。昌本标准的第4章为强制性条款，其余为推荐性条款。本
2、标准的附录B、附录C为规范性附录，附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。GB 20555-2006 本标准起草单位:农业部淡水鱼类种质监督检验测试中心、中国水产科学研究院长江水产研究所。本标准主要起草人:邹世平、许映芳、伍刚、汪登强、徐忠法、周瑞琼、陈华彬。I GB 20555-2006 日本沼虾1 范围本标准给出了日本沼虾Macrobrachinni p ponense (de Haan) 的学名与分类、主要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特性和检测方法。本标准适用于日本沼虾的种质检测与鉴定。2 规范性引用文件下列文件
3、中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 18654. 1 养殖鱼类种质检验第1部分:检验规则GB/T 18654. 12 养殖鱼类种质检验第12部分z染色体组型分析3 学名与分类3. 1 学名日本沼虾Macrobrachium niponense (de Haan) 。3.2 别名青虾、河虾。3.3 分类地位节肢动物门(Arthropoda)、甲壳纲(Crustacea)、十足目C
4、Decapoda)、游泳亚目(Natatia)、长臂虾科(Palaemonidae)、沼虾属(Macr呻rachium)。4 主要形态构造特征4.1 外部形态特征4. 1. 1 外形体形圆筒形，分头胸部和腹部两部分。头胸部较粗大，往后渐细，腹部后部更为狭小。体外披一层坚硬的几丁质外骨髓，头胸甲前端中央延伸出一平直锐利的额角，其上、下缘均有排列整齐的呈锯齿状的额角齿。额角基部两侧各有一具柄的复眼，其下方有两对触角。头胸甲的两侧各具两个刺，一个位于第二触角基部称触角刺，另一个位于触角刺的后下方称肝刺。腹部第二腹节的侧甲前后缘复盖在第一和第三腹甲上。体节20个:头部5节，胸部8节，头胸部的体节愈合在
5、一起，腹部7节。除腹部第七节外，每个体节各有附肢一对。头部附肢特化为第一、第二触角(第二触角的鳞片长约为其宽的三倍)，大颗(具有三节的颗须)和第一、第二小颗;胸部附肢前三对为颗足，后五对为步足。顿足为双叉肢型，步足为单肢型，第一、第二步足为整状，第一对比第二对细小;腹部附肢分化为6对游泳足，双肢型。日本沼虾的外部形态见图1和图20雌雄日本沼虾的外形区别参见附录A。1 GB 20555-2006 4. 1. 2 体色体色常随4. 1. 3 可数性4. 1. 3. 1 额角4. 1.3. 2 体节:4. 1. 3. 3 附肢:头4. 1. 4 可量性状日本沼虾主要可项目第二步足/体长体长/第五步足
6、基部间距额角长/头胸甲长4.2 内部构造特征4.2.1胃见表1。1 日本沼虾主要可量性0.69 :1: 0.03 胃为囊状，胃里具有角质膜和角质突起。4.2.2鲤位于头胸部两侧的腮腔里，为头胸甲所覆盖，鲸腔内有8对叶状的鲍小片。4. 2. 3 性腺雌虾O. 81土0.0723. 97土3.23 0. 65 :1: 0.03 位于头胸部心脏和消化腺之间，肝膜脏的上方。雄虾的精巢呈白色，表面多皱纹，前端分左右两叶，2 GB 20555-2006 两侧各有一根曲折的输精管，向外开口于第五步足的基部内侧;雌虾的卵巢呈椭圆形，前端狭窄，分成左右两叶，后端愈合，两侧各有一根输卵管通向第三步足基部内侧的生殖
7、孔。5 生长与繁殖5.1 生长5.1 . 1 幼体阶段在幼体变态阶段，每相隔1d3 d蜕一次皮，每蜕皮一次则进入一个新的生长期。约经9次蜕皮幼体即进入外形与成体相似的幼虾阶段。幼体阶段生长实测值见表2。表且，自苯霄吉阿矿体也长实测值幼体发育期平均体长/mmI 2.2 H 2.3 E 2.6 N k了-、去lh.2.9 2. 8 V i时5-6 川、2.9-昌、53.3 VI 5-8 3. 8 飞4.6 6.3 9.3 14. 2 开始死亡，8月开始5. 2. 3 抱卵量不同体长、体重抱卵虾的抱卵数见表3。表3日本沼虾不同体长、体重个体抱卵虾的抱卵数体长/mm体重/g抱卵数/粒29-35 0.6
8、1.7 254985 3639 1.13.0 5931 291 4043 2. 83. 5 6751 750 4445 1. 94. 8 7922 713 3 GB 20555-2006 表3(续)体长/mm体重/g抱卵数/粒4649 2. 26. 7 1 2723 115 5059 2. 27. 5 1 1604 240 6472 4. 89. 3 3 9205 003 6 遗传学特性6. 1 细胞遗传学特性体细胞染色体数:2n= 104。染色体臂数(NF):l78。核型公式为2n=74m+8 st+22 t。日本沼虾染色体组型见图3。t辈辈靠事电事电毒2 3 4 5 6 7 8 9 10
9、11 A 事重毒I, 革事瞩12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 B 篝攘攘攀瞩曾遭摩毒组警疆E23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 B 锦馨毒革毒集事事34 35 36 37 38 39 40 41 B C 靠毒辈辈警辈辈靠遭屠擎镰42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 D 10m 图3日本沼虾染色体组型图6.2 生化遗传学特性经电泳染色，日本沼虾肌肉组织苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶有五条酶带。日，本沼虾肌肉组织MDH同工酶图谱见图4，其酶带扫描图见图5，酶带相对活性与相对迁移率见表4。十图4日本沼虾肌肉组织M
10、DH同工酶图谱4 GB 20555-2006 圈5日本沼虾肌肉组织MDH同工酶酶带扫描圈表4日本沼虾肌肉组织MDH同工酶相对活性和相对迁移率酶带项目MDH, MDH, MDH3 MDH, MDH5 相对活性/c%)6.5 8. 9 15.0 36.1 33. 5 相对迁移率o. 13 0.17 0.23 0.28 0.32 7 检测方法7. 1 生物学检测随机抽取50尾日本沼虾进行生物学检测，先称体重，然后测量体长、第二步足长、第五步足基部间距、头胸甲长、额角长，最后进行比值计算。抱卵量计数是选取抱卵虾后，把卵取下放在培养皿中进行计数。体长是从眼柄基部到尾扇末端的长度。第二步足长是从第二步足基
11、部到其末端的长度。第五步足基部间距为第五对步足基部底端两侧之间的距离。头胸甲长是从额角尖端到头胸甲背部中央末端之间的长度。额角长是从额角尖端到其在头胸甲上之隆起处之间的距离。7.2 染色体检测7.2. 1 预处理与低渗选取活力强、不同性成熟度的雄虾，从其腹部注射秋水仙素(2g/g)，在250C下暂养5h左右后，解剖取出精巢，置于含低渗液0.075 mol/L的氯化梆(KC!)榕液的小烧杯中，于370C温箱中保温30 min 。7.2.2 固定小心移去低渗液，沿烧杯壁缓慢加入新鲜配制的卡诺氏(Carnoy)冷固定液(乙醇与冰乙酸的体积比为3比1)，在40C低温下固定2h左右，在这中间更换新鲜固定
12、液2次3次。7.2.3 染色体标本的制片、染色、计数与组型分析按GB/T18654.12的规定执行。7.3 生化遗传分析7.3. 1 样品的采集与保存样品活体运回后，随机取健康、活拨的个体，去头、去壳，取肌肉组织(1g/尾2g/尾)，每个个体作为一个样品编号后放入样品袋中，在低温(一250C)冰箱保存。或取样后直接进入下一步操作。7.3.2 样晶制备按1g样品加5mL样品缓冲液(见附录B中的电极缓冲液)的比例分别加入到置于冰浴的玻璃匀浆器中匀浆，然后在40C左右的温度、12000 r/min条件下离心30mino取上清液置冰箱中保存备用。7.3.3 电泳分离采用9.5%浓度的聚丙烯眈胶凝胶。电
13、极缓冲液和凝胶制备见附录B。水平电泳，电泳温度为100C。前电泳为电流60mA , 10 min;点样后(每孔点样量约为8L)预电泳10min，电流45mA;正式GB 20555-2006 电泳16mA, 3. 5 h，然后电流45mA再电泳10mno 电泳结束后，电泳胶板放入预先配制好并在370C恒温箱中保温的染色液中染色。苹果酸脱氢酶同工酶染色液配方见附录C。待染色好后用自来水快速洗3次5次以去除染色液，再用7%的乙酸终止染色并固定。7.3.4 扫描测定用薄层激光扫描仪对染色后的电泳胶板图谱进行扫描(扫描波长为370nm)，得到酶谱扫描图、相对活性及相对迁移率。7.4 检验规则与结果判定按
14、GB/T18654. 1的规定执行。6 GB 20555-2006 附录A(资料性附录)雌雄日本沼虾的外形区别用肉眼区别20mm以上的日本沼虾的雌雄较为容易，而分辨20mm以下个体的雌雄则比较困难。其外形区别主要有以下几个方面:一一达到性成熟的同龄虾中，雄性个体较大，而雌性个体较小。距，呈八字形一一雌雄虾第二构，位于内雄都前，而雌虾则没有。7 GB 20555-2006 附录B(规范性附录)电极缓冲液和凝肢的制备B.l 电极缓冲液的制备三是甲基氨基甲皖(Tris)75. 1 g，甘氨酸19.3 g，加少量蒸馆水洛解后，再加蒸情水定容至5 000 mL，用Tris调整pH到8.9，制成母液。使用
15、时用蒸锢水稀释母液1倍制成电极缓冲液。B. 2 凝肢的制备A液z丙烯酷胶(Acr)33.3g，甲叉双丙烯酷胶(Bis)0.9g，加蒸馆水100mL榕解。充分溶解后过滤，加四甲基乙二胶(TEMED)O.34 mL，再定容至150mL。B液:过硫酸镀(AP)0.5g，加蒸馆水至33mL溶解。C掖:1份电极缓冲液母液加1份蒸锢水。使用时，将A液21.4 mL、B液2.4mL、C液25mL、蒸馆水1.2 mL混合成胶浓度为9.5%的凝胶50 mL 8 GB 20555-2006 附录C(规范性附录)苹果酸脱氢酶同工酶染色液的配制A液z辅酶I(NAD)500mg，l%氯化硝基四氮瞠蓝(NBT)300 m
16、g，吩嗦甲醋硫酸盐(PMS)20mg, 加蒸锢水定容至100mL。B液:DL-苹果酸2.68g，碳酸铀(NaC03)2.78 g，加蒸馆水至200mL。C液:0.5mol/L Tris-HCl染色缓冲液(pH为7.1)。使用时，按A液+B液+C液+蒸馆水为10+10+25十90的比例配制成染色液。9 CON-m山的ON阁。国和人民共家标准本泪虾GB 20555-2006 坦国日A-由t9哈中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销9号印张1字数16千字2006年12月第-次印刷开本880X 1230 1/16 2006年12月第一版峰定价12.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066 1-28578 GB 20555-2006
