1、ICS 59.080.01 辆T04 G雪中华人民=l:I二.;、和国国家标准纺织品第3GB/T 20944.3-2008 抗菌性能的评价部分:振荡法Textiles-Evaluation for antibacterial activity一一Part 3: Shake flask method 2008-04-29发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2008-12-01实施发布G/T 20944.3-2008 .L. _._ 目。吕GB/T 20944纺织品抗菌性能的评价分为三个部分:第1部分:琼脂平皿扩散法;十第2部分:吸收法;第3部分:振荡法。本部分为GB
2、/T20944的第3部分。本部分由中国纺织工业协会提出。本部分由全国纺织品标准化技术委员会基础分委会(SAC/TC209/SC 1)归口。本部分主要起草单位:深圳市北岳海威化工有限公司、国家纺织制品质量监督检验中心、上海市纺织科学研究院南方测试中心、中国人民解放军特种防护服装质量检测中心、杭州新华诺芙特卫生材料有限公司、浙江笑雪服饰有限公司、浙江浪莎袜业有限公司、中国针织工业协会。本部分主要起草人2邹海清、王俊起、于a友斌、刘晨、张华、倪济云、李洪、盛军棋、刘爱莲、王智。本部分首次发布。I 1 范围纺织品抗菌性能的评价第3部分:振荡法GB/T 20944.3-2008 GB/T 20944的本
3、部分规定了采用振荡法测定纺织品抗南性能的定量试验和评价方法。本部分适用于羽绒、纤维、纱线、织物，以及特殊形状的制品等各类纺织产品，尤其适用于非溶出型抗商纺织产品。本部分不涉及抗菌产品安全性的评价。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T20944的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T 12490纺织品色牢度试验耐家庭和商业洗涤色牢度(GB/T12490 2007 , ISO 105-C
4、06: 1994 ,MOD) 3 术语和定义下列术语和定义适用于GB/T20944的本部分。3.1 抗菌性能antibacterial activity 纺织品所具有的能抑制织物上的细菌生长繁殖的性能。3.2 对照样control fabric 用于验证试验微生物生长条件的、不经任何处理的100%棉织物。注:巳被证明采用色牢度试验用的棉标准贴衬织物，经离温蒸煮和蒸馆水洗涤后作为对照样是合适的。4 安全预防措施安全须知:本试验所采用的试验菌能使人感染致病，应采取一切必要的预防措施，免除对人员和环境的危害，试验应由经过培训的人员进行。5 原理将试样与对照样分别装入一定浓度的试验菌液的三角烧瓶中，在
5、规定的温度下振荡一定时间，测定三角烧瓶内菌液在振荡前及振荡一定时间后的活菌浓度，计算抑菌率，以此评价试样的抗菌效果。6 试验器具6.1 分光光度计:检测波长475nm或660nm适合于测试试验菌液的浓度。6.2 恒温培养箱:温控精度为士lC。6.3 水浴锅z温度能保持在46C士2C。6.4 恒温振荡器(摇床):温度精度为士lC。GB/T 20944.3-2008 6.5 冰箱z温度能保持在5C10C0 6.6 玻璃门冷藏箱z温度能保持在5C10C。6. 7 高压灭菌锅z温度能保持在121C，压力能保持在103kPa。6.8 带塞三角烧瓶:容量为250mL。6.9 培养皿:直径90mm。6. 1
6、0 旋涡式振动器。6.11 -级生物安全柜。6. 12 试管、吸管、烧瓶等实验室常用器具7 培养基和试剂7.2 蛋琼蒸灭注:建议使用现有商业化7.1 营养肉汤牛肉膏蛋白吗蒸铺7.3 7.4 0.03 moI/L PBS( 磷酸氢二锅磷酸二氢伺蒸馆水8 试验菌种8. 1 菌种革兰氏阳性细菌2金黄色葡萄球菌Sta户hylococcusaureus (ATCC 6538) ; 革兰氏阴性细菌:大肠杆菌Escherichiacoli (8099或ATCC11229、ATCC8739、ATCC29522二者中的一种)，或肺炎克雷白氏菌Klebsiella户eumoniae(ATCC 4352)，根据需要
7、选一种s白色念珠菌Candidaalbicans (ATCC 10231)。注1:可使用加入世界菌种保藏联合会(WFCC)的菌种保藏机构提供的、与上述商种等效的试验商。注2:如果需要，可采用其他的试验菌种，培养基成分、培养温度和培养方法应根据要求调整。2 GB/T 20944.3-2008 8.2 菌种转种及保存冻干菌激活后接种斜面试管培养，然后贮存于冰箱(5.C10.C)，作为保存商。每一个月应转种一次，转种后放于冰箱(5.C10.C)保存，转种次数不应超过10代。若转种后保存时间超过一个月，不能用于下一次转种。8.3 标识对每个菌种应标注如下信息:a) 供应冻f菌的菌种保藏机构名称;b)
8、冻干菌的名称和编号;c) 冻干菌的批号;d) 冻干菌激活日期;e) 保存菌的贮藏中。37.C:1: 1. 或稀释法测定9. 1. 2 细菌用吸管从入另一支装有9缓冲液(7.。的试瓶巾。充分混匀，稀飞存保写白叫mi备态培制色的序-14.班程配菌养t菌培们珠预斗念步hvt咱两叫活t1从的21菌旦旦取一接种环，在沙氏琼脂平板(7.3)上划线，于37.C土I.C，培养18h24 h。用接种环从平板中挑出典型的菌落，接种于沙氏琼脂培养基(7.3)试管斜面，37.C:1:1.C，培养18h24 h，得新鲜培养物，再往此试管中加入5mL o. 03 mol!L PBS缓冲破(7.4)0反复吹吸，洗下新鲜菌苔
9、。然后用5mL吸管将洗脱液移至另一支元菌试管中，用旋涡式振动器混合20s或在于上振摇80次，使其充分混匀，即制成了接种菌悬液。此菌悬液含量采用分光光度计法或稀释法测定，活菌数应达到lXI08CFU/mL 5XI08 CFU/mL。此新鲜菌液应在4h内尽快使用，以保证接种菌的活性。9.2.2 白色念珠菌接种菌攘的准备用吸管从白色念珠菌悬液(9.2.1)中吸取2mL 4 mL，移入装有9mL o. 03 mol/L PBS缓冲液(7.4)的试管中，进行10倍系列稀释操作，充分棍匀。吸取5mL移入装有45mL o. 03 mol/L PBS缓3 GB/T 20944.3-2008 冲液(7.4)的三
10、角烧瓶中，充分混匀。稀释至含活菌数2.5X 105 CFU/mL3 X 105 CFU/mL，用来对试样接种(可在此三角烧瓶中适量加入直径2mm3 mm的小玻璃球振摇，以利撞碎结块的菌团，使接种菌液更均匀)。此接种菌液应在4h内尽快使用，以保持接种菌的活性。10 试样的准备10.1 样品洗涤试样如需洗涤，应选用10.1.1或10.1. 2的洗涤方法的一种进行操作，并在试验报告中注明采用的洗涤方法。10. 1. 1 耐洗色牢度试验机洗涤方法从抗菌织物大样中取3个小样(每个尺寸10cmX 10 cm，剪成2块)，按GB/T12490中的试验条件ilM进行洗涤，采用ECE元磷标准洗涤剂。下述程序相当
11、于5次洗涤z水温40.C士3.C，洗涤剂浓度0.2% , 150 mL榕液，钢珠10粒，洗45min.洗涤后取出试样，在40.C士3.C和100mL的水中清洗两次，每次1min.重复此程序，直至规定的洗涤次数。为防止残留的洗涤剂干扰抗菌性能测试，最后个程序结束时充分清洗样品，然后晾干或烘干。10. 1. 2 家用双桶洗衣机洗涤方法从抗商织物大样中取20g以上的小样，试验条件为40.C士3.C，豁比1: 30 , AATCC 1993 WOB 元磷标准洗涤剂浓度0.2%.P述程序相当于5次洗涤(以20g布样为例，实际试验应根据试样按比例增加水量及洗涤剂):在洗衣机中加入40.C士3.C热水6L，
12、试样20g及陪洗织物180g，洗涤剂12g，开机洗涤25min。排水，6L自来水注洗2min。取出织物，离心脱水1min.再用6L自米水注洗2min, 取出织物，离心脱711 min。重复此程序，直至规定的洗涤次数。为防止残留的洗涤剂干扰抗菌性能测试，最后一个程序结束时应充分清洗样品，然后晾干或烘干。10.2 试样将抗菌织物样及对照样分别剪成约5mmX5 mm大小的碎片，称取0.75g士0.05g作为一份试样，用小纸片包好。根据试验需要称取多份试样，每份试样均用小纸片包好。未经抗菌处理织物样若需检测也按此规定剪碎、称量并用小纸片包好。10.3 试样灭菌将装有试样的小纸包放入高压灭菌锅，于121
13、.C、103kPa灭菌15min。备用。若试样不宜采用高压蒸汽灭菌，可采用其他方法灭菌，但所用的灭菌方法不应影响抗菌性能和检测结果;对同一个检测样本的试样、对照样应采用同一种灭菌方法。门试验操作11. 1 试样及试剂装瓶准备9个250mL三角烧瓶。在其中3个烧瓶中各加入对照样0.75g土0.05g，3个烧瓶中各加入抗菌织物试样O.75 g土0.05g，另3个烧瓶不加试样作为空白对照。然后在每个烧瓶中各加入70 mL:l:O. 1 mL 0.03 mol/L PBS缓冲液(7.的。若需要，可另增加3个三角烧瓶，各装入O.75 g士0.05g未经抗菌处理织物试样，并各加入70 mL:l:O. 1
14、mL 0.03 mol/L PBS缓冲液(7.4)，以考察未经抗菌处理织物试样的相关性能。注:空白对照用于观察试验菌的接种浓度，并观察试验菌在试验期内的活性，防止因其自身的衰减获得虚高的试验结果。11. 2 0接触时间制样用吸管往3个对照样烧瓶和3个对照烧瓶中各加入5mL接种菌液(9.1.2或9.2.2)。盖好瓶塞，4 GB/T 20944.3-2008 放在恒温振荡器上，在240C士lC，以250r/min300 r/min，振荡1min士5s，然后进行下一步0接触时间取样。11. 3 0接触时间取样用吸管在0接触时间制样的6个烧瓶中各吸取1mL士0.1mL潜液，移入装有9mL土0.1mL
15、O. 03 mol/L PBS缓冲液(7.4)的试管中，充分混匀。用10倍稀释法再进行1次稀释，充分?昆匀。吸取1 mL土0.1mL移入灭菌的平皿，倾注营养琼脂培养基(7.2)或沙氏琼脂培养基(7.3)约15mL。每个102稀释倍数的试管分别吸液制作两个平板作平行样。室温凝固，倒置平板，3TC士lOC培养24h48 h (白色念珠菌48h 72 h)。记录每个平板中的菌落数。注3对照样接种0接触时间取样并倾注平板培养后，在此10稀释倍数平板中，金黄色葡萄球菌及大肠籽菌的平均菌落数宜控制在200CFU 250 CFU的范围，白色念珠菌的平均菌落数宜控制在150CFU 200 CFU的范围，否则影
16、响试验精确度。11. 4 定时振荡接触用吸管往3个抗菌织物试样烧瓶中各加入5mL接种商液(9.1. 2或9.2.2)，盖好瓶塞。已完成0接触时间取样且盖好瓶塞的另6个烧瓶不需再加接种液。再将此9个试样的烧瓶置于恒温振荡器上，在240C士lOC，以150r/min，振荡18h。注:若另增加了3个未经抗菌处理织物试样，则在此试样烧瓶中也各加入5mL接种菌液(9.1. 2或9.2.2)，并盖好瓶塞。与其他试样在相同条件振荡18h。11. 5 稀释培养及菌落数的测定到规定时间后，从每个烧瓶中吸取1mL士0.1mL试液，移入装有9mL士O.1 mL O. 03 mol/L PBS 缓冲液(7.4)的试管
17、中，充分混匀。用10倍稀释法系列稀释军合适稀释倍数。用吸管从每个稀释倍数的试管中分别吸取1mL士0.1mL移入灭菌的平皿，倾注营养琼脂培养基(7.2)或沙氏琼脂培养基(7. 3)约15mL，每个稀释倍数的试管分别吸液制作两个平板作平行样。室温凝固，倒置平板，3TC士lC培养24h 48 h(白色念珠菌48h 72 h)。选择菌藩数在30CFU 300 CFU之间的合适稀释倍数的平板进行计数。若最小稀释倍数平板中的菌落数30，则按实际数量记录;若无菌落生长，则菌落数记为1。两个平行平板的菌落数相差应在15%以内，否则此数据无效，应重作试验。12 结果的计算及评价12. 1 活菌浓度的计算根据两个
18、平板得到的商落数，按式(1)计算每个试样烧瓶内的活菌浓度(保留两位有效数)。K = ZXR 式中zk 每个试样烧瓶内的活菌浓度(CFU/mL); Z一两个平板直落数的平均值;R一一稀释倍数。12.2 试验有效性的判断. . . . . ( 1 ) 根据式(2)计算试验菌的增长值Fo对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌等细菌，当F大于或等于1.5; 对白色念珠菌，当F大于或等于0.7，且对照烧瓶中的话菌浓度比接种时的活菌浓度增加时，试验判定为有效。否则试验元效，需重新进行试验。F = 19W, - 19Wo . ( 2 ) 式中gF一一一对照样的试验菌增长值;W广-3个对照样18h振荡接触后烧瓶内的活菌浓
19、度的平均值(CFU/mL); 5 GB/T 20944.3-2008 Wo -3个对照样0接触时间烧瓶内的活菌浓度的平均值(CFU/mL)。12.3 抑菌率的计算振荡接触18h后，比较对照样与抗菌织物(或未抗菌处理织物)试样烧瓶内的活菌浓度，按式(3)计算抑菌率(保留两位有效数)。W，一门。/y=一百丁二x100% . ( 3 ) 式中2Y一一试样的抑菌率;W，-3个对照样18h振荡接触后烧瓶内的活菌浓度的平均值(CFU/mL); Q，一一-3个抗菌织物(或3个未抗菌处理织物)试样18h振荡接触后烧瓶内的活菌浓度的平均值(CFU/mL)。12.4 结果的表达以抑菌率的计算值作为结果。当抑菌率计
20、算值为负数时，表示为0;当抑菌率计算值二三0时，表示为注。12.5 抗菌效果的评价对金黄色葡萄球菌及大路杆菌的抑菌率二三70%，或对白色念珠菌的抑菌率二三60%，样品具有抗菌效果。13 试验报告6 试验报告应包括下列内容:a) 试验是按本部分进行的EM 样品和对照样的描述;c) 样品的预处理(例如，消毒、洗涤次数hd) 试验菌种名称、编号及接种浓度;e) 对照样的增长值F，包括W，和Wo;f) 试样的Q，;g) 抑菌E答:h) 抗菌效果的评价;i) 试验人员和试验日期;j) 试样的洗涤方法;k) 任何偏离本部分的情况。OON|的.叮叮mONH阁。国华人民共和国家标准纺织品抗菌性能的评价第3部分:振荡法GB/T 20944. 3-2008 中祷中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销印张O.75 字数13千字2008年6月第一次印刷善开本880X 1230 1/16 2008年6月第一版定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533 书号:155066 1-31591 GB/T 20944.3-2008
