1、lCS 67040C 53 a亘中华人民共和国国家标准GBT 2 1 2342007铁强化酱油中乙二胺四乙酸铁钠的测定Determination of sodium iron()ethylenediaminetetraacetate，trihydrate(NaFeEDTA3H20)in iron fortified soy sauce2007-10-29发布 2008-04-01实施丰窭发布中国国家标准化管理委员会仅19刖 昌GBT 212342007本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、佛山市海天调味食品有限公司负责起草。本标准主要起草人：霍军
2、生、黄建、魏峰、黄文彪、于波、孙静。铁强化酱油中乙二胺四乙酸铁钠的测定GBT 21234-20071范围本标准规定了铁强化酱油中乙二胺四乙酸铁钠(NaFeEDTA)的测定方法。本标准适用于铁强化酱油中乙二胺四乙酸铁钠的测定。本标准第一法的检出限为0030 btgmL，当取样为25 mL时，最低检出浓度为60 PgmL，最佳线性范围为02*gmL20 ugmL。第二法的最低检出限为024 pgmL，当取样为30 mL时，最低检出浓度为40 pgmL，最佳线性范围为40“gmL24 pgmL。第一法 高效液相色谱法2原理铁强化酱油试样，经甲醇沉淀后，过滤，稀释，用反相离子对高效液相色谱法将乙二胺四
3、乙酸铁钠中的FeEDTA一与试样中的杂质分离，经紫外检测器254 nm波长处检测，根据色谱峰保留时间定性，标准曲线法峰面积定量。3试剂本方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水。31甲醇：色谱纯。32 40四丁基氢氧化铵水溶液(TBAOH)。33甲酸稀溶液：将88甲酸用水稀释10倍进行配制。34乙二胺四乙酸铁钠标准物：纯度(以NaFeEDTA3H：O计)99O。35 75甲醇溶液：将体积为750 mL的甲醇加到体积为250 mL的水中，混匀。36乙二胺四乙酸铁钠标准储备溶液：准确称取乙二胺四乙酸铁钠标准物01 g，置人50 mL棕色容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇
4、匀，此溶液浓度为2 000,ugmL。于冰箱中避光保存，推荐15日内使用。37乙二胺四乙酸铁钠标准中间溶液：准确吸取乙二胺四乙酸铁钠标准储备溶液250 mL，置于50mL棕色容量瓶中，用75甲醇溶液定容，摇匀，此溶液浓度为100*gmL。于冰箱中避光保存，推荐15日内使用。38 乙二胺四乙酸铁钠标准使用溶液：分别吸取乙二胺四乙酸铁钠标准中间溶液10 mL、20 mL、40mL、60mL、80mL、10。0mL于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀后，即得到乙二胺四乙酸铁钠标准系列，分别含NaFeEDTA3HzO为20 pgmL、40 pgmL、80 pgmL、120-gmL、160 pgmL
5、、200_gmL。临用时配制。4设备与仪器41实验室常用设备。42高效液相色谱仪：具有紫外检测器。43酸度计。1GBT 2123420075分析步骤51试样处理吸取铁强化酱油试样250 mL，置于50 mL棕色容量瓶中，加75甲醇溶液定容，摇匀。于避光处静置50 rain后，滤纸过滤。吸取滤液500 mL，置于50 mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，用045 ptm滤膜过滤，即得试样液，供仪器测定用。52高效液相色谱分析521 色谱条件(参考条件)5211分析柱：Zorbax c8柱46mm150mm，5am。5212流动相：吸取40四丁基氢氧化铵水溶液325 mL，置于烧杯中，加水13
6、0 mL，再用甲酸稀溶液将pH调至330，将此溶液转移至1 000mL容量瓶中，加125mL甲醇，用水稀释至刻度，摇匀，脱气后使用。5213紫外检测器检测波长：254 nm。5214进样量：20“L。5215流速：10 mLmin。522标准曲线的制备分别用38中的标准使用溶液20 HL进行HPLC分析，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，或计算回归方程。523试样分析取试样液20“L进行HPLC分析。5231定性：与标准品色谱峰的保留时间比较定性。5232定量：在实验条件下，对试样液进行测定。取其峰面积平均值从标准曲线上查得或根据回归方程计算其含量。6结果计算试样中乙二胺四乙酸铁钠含
7、量按式(1)计算： x一半淼州，式中：x 试样中乙二胺四乙酸铁钠的含量，单位为毫克每毫升(mgmL)；X， 由标准曲线上查到的乙二胺四乙酸铁钠含量，单位为微克每毫升(“gmL)；y。 试样液定容体积，单位为毫升(mL)；y试样的体积，单位为毫升(mL)；计算结果保留三位有效数字。7精密度在重复条件下获得的两次重复测定结果的相对差值不得超过算术平均值的10。8分离色谱图铁强化酱油试样液中的分离色谱图见图1。002800260024、00220020趔0018墨：。0，1：00120010000800060004000200009原理GBT 2 1234-2007 U 一200 400 600 8
8、 00 1000 12 CO 1400 1600 18 00 20 00 22 00 2400train图1 铁强化酱油试样液中的分离色谱图第二法比色法乙二胺四乙酸铁钠在酸性溶液中(pH05)中完全解离，游离的Fe”与显色剂硫氰酸铵(NH；SCN)反应生成红色络合物，该络合物在含有乙醇或丙酮的有机溶液中较为稳定，于波长480 lalal处有最大吸收，且吸光度与浓度成线性关系。利用可见分光光度法，通过与未酸化处理的试液做空白比对，计算乙二胺四乙酸铁钠含量。而其他铁营养强化剂，Fe”与显色剂NH。SCN生成无色络合物，Fe”与显色剂NH。SCN在酸化或未酸化溶液中都同样生成红色络合物，可比对扣除。
9、10试剂本方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水。101 乙二胺四乙酸铁钠标准物：纯度(以NaFeEDTA3H：O计)99o。102 75甲醇溶液：将体积为750 mL的甲醇加到体积为250 mL的水中，混匀。103过硫酸铵。104无水乙醇。105盐酸溶液：量取盐酸500 mL，加水稀释至1 000 mL，摇匀。106 15硫氰酸铵显色剂：称取硫氰酸铵75 g，置500 mL容量瓶中，加水250 mL，溶解后加丙酮75 mL，用水稀释至刻度，摇匀。107丙酮一水溶液：于500 mL容量瓶中，加75 mL丙酮，用水稀释至刻度，摇匀。108乙二胺四乙酸铁钠标准储备溶液
10、：准确称取乙二胺四乙酸铁钠标准物01 g，置人50 mL棕色容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，此溶液浓度为2 000 vgmL。于冰箱中避光保存，推荐15日内使用。11仪器111实验室常用设备。112可见分光光度计。3GBT 21234-200712分析步骤121标准曲线的制备准确吸取乙二胺四乙酸铁钠标准储备溶液0 mL、10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL分别置于50 mL容量瓶中，加75甲醇溶液定容，摇匀。精确吸取稀释后的不同浓度标准溶液500mL分别置于50mL容量瓶中，加水500mL，加显色剂150mL，用无水乙醇定容，摇匀，以水为空白词零点，在A
11、一480 nm处分别测定其吸光度A。；再分别精确吸取不同浓度标准溶液500 mL于50 mL容量瓶中，加盐酸溶液50 mL，加显色剂150 mL，用无水乙醇定容，摇匀，即得不同浓度的标准溶液，NaFeEDTA3H20浓度分别为0xgmL、40 ugmL、80 tlgmL、120 vtgmL、160,ugmL、200 pgmL、240 pgmL。以水为空白调零点，在一480 am处分别测定其吸光度A。计算不同浓度AA=A-A。，以浓度为横坐标、A为纵坐标绘制标准曲线或计算线性回归方程。122试样处理精密吸取铁强化酱油试样3 mL，置于50 mL容量瓶中，加75甲醇溶液稀释并定容，于避光处静置30
12、min后，滤纸过滤，取滤液500mL四份，分别置于四个50mL的棕色容量瓶中。试样液1配制：在其中一个容量瓶中加水500 mL，过硫酸铵0100 g，15硫氰酸铵显色剂150 mL，加无水乙醇定容，摇匀。试样液2配制：于另一个容量瓶中加盐酸溶液500 mL，过硫酸铵0100 g，15硫氰酸铵显色剂150 mL，加无水乙醇定容，摇匀。试样液3配制：于另一个容量瓶中加水500 mL，过硫酸铵0100 g，加150 mL丙酮一水溶液，再用无水乙醇定容，摇匀。试样液4配制：于另一个容量瓶中加盐酸溶液500 mL，过硫酸铵0100 g，加150 mL丙酮一水溶液，再用无水乙醇定容，摇匀。123测定于A一
13、480 nm处测定试样液1、2、3、4的吸光度，分别为A#、A#、AH+、AH-。注：由于Fe”与硫氰酸铵生成的红色络合物对光、热不稳定，试验应在30C以下并避光操作。13结果计算试样中乙二胺四乙酸铁钠的吸光度值按式(2)计算。A#=A#一A样一(AH十一A7r_)式中：A#试样液2的吸光度值；A#试样液1的吸光度值；AH+试样液4的吸光度值；AH十试样液3的吸光度值。根据A#值，从标准曲线上得到测定试样液中7,z胺四乙酸铁钠含量置(vgmL)，供计算试样中乙二胺四乙酸铁钠含量用。试样中乙二胺四乙酸铁钠的含量按式(3)计算。 x一半淼式中：x试样中乙二胺四乙酸铁钠的含量，单位为毫克每毫升(mgmL)；X：由式(2)计算后从标准曲线上得到的乙二胺四乙酸铁钠含量，单位为微克每毫升(tgmL)；GBT 21234-2007V。试样液定容体积，单位为毫升(mL)；y试样的体积，单位为毫升(mL)；计算结果保留三位有效数字。14精密度在重复条件下获得的两次重复测定结果的相对差值不得超过算术平均值的10。
