1、ICS 65.020.20 B 38 备案号： DB42 湖 北 省 地 方 标 准 DB 42/T 1272 2017 冬虫夏草培植技术规程 Technical regulations for cultivation of Cordyceps sinensis （报批稿） 2017 05 16发布 2017 09 01实施 湖北省质量技术监督局 发布 DB42/T 1272-2017 I 目 次 前言 . III 引言 . V 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 环境与设施 . 1 4.1 场地环境 . 1 4.2 培植厂房设施 . 2 4.3 土壤 .
2、 2 4.4 植物饲料 . 2 4.5 水 . 2 4.6 土壤、饲料和水混合 . 2 5 工艺流程及技术要求 . 2 5.1 培植工艺流程图 . 2 5.2 虫种繁育 . 2 5.3 菌种培育 . 3 5.4 冬虫夏草培植 . 3 5.5 冬虫夏草采收及采后处理 . 4 6 生产管理及病虫害防治 . 4 6.1 环境维护 . 4 6.2 严格检疫 . 4 6.3 防止病害传播 . 4 附录 A（规范性附录） 冬虫夏草培植的消毒除菌方法 . 5 A.1 培植区域使用前消毒灭菌 . 5 A.2 培植区域日常消毒灭菌 . 5 A.3 进入培植区域器物消毒除菌 . 5 A.4 病、弱个体灭活处理 .
3、 5 参考文献 . 6 DB42/T 1272 2017 III 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009标准化工作导则 第 1部分：标准的结构和编写 给出的规则 编制。 本标准由湖北省 农业科学院 归口 。 本标准起草单位：宜昌山城水都冬 虫夏草有限公司、广东东阳光药业有限公司、西藏高原雪都冬虫 夏草有限公司。 本标准主要起草人：李 文佳、李全平、朱巧洪、钱正明、贺媛、李文庆、张宗耀、华献春。 DB42/T 1272 2017 V 引 言 冬虫夏草目前在湖北省已经实现规模化产业培植。经查阅，冬虫夏草的培植技术尚无国家标准、 行业标准和地方标准。为促进该产业的规范化生产，保证所生产产品质
4、量的稳定可靠，满足市场消费者 需要，从源头有效缓解冬虫夏草野生资源日益减少濒临灭绝的问题，特制定冬虫夏草培植技术规程。 DB42/T 1272 2017 1 冬虫夏草培植技术规程 1 范围 本标准规定了冬虫夏草培植的术语和定义、环境与设施、工艺流程 及 技术要求、生产管理 及病虫害 防治 等。 本标准适用于冬虫夏草的培植。 2 规范性 引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 2762 食品安全国家标准 食品中污染物限量 GB 2763 食品安全国家标准 食品中
5、农药最大残留限量 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB 50073 洁净厂房设计规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 冬虫夏草 Cordyceps sinensis 冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌 Cordyceps sinensis (Berk.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫 上的子座和幼虫尸体的复合体。待子座出土约 3cm 7cm，子实体未成熟时挖取，除去似纤维状的附着物 及杂质。冬虫夏草繁育品为 模拟原生态条件下抚育而成的冬虫夏草。 3.2 虫种 host insect species 冬虫夏草的虫种蝙蝠蛾科昆虫属于鳞翅目 Lepidoptera，有喙亚目
6、 Glossata，外孔次亚目 Exoporia， 蝙蝠蛾总科 Hepialoidae。目前研究发现虫草蝠蛾 Hepialus armoricanus、 小金蝠蛾 Hepialus xiaojincusis、 比如蝠蛾 Hepialus biruensis、 蒲氏蝠蛾 Hepialus Pui、 玉树蝠蛾 Hepialus yushuensis 等 60种（邱乙等 2015）。 3.3 菌种 strain 冬虫夏草菌种为中国被毛孢 Hirsutells sinensis Liu， Guo， Yu-et Zeng（ 1989） ，隶属于子囊 菌门 Ascomycota 粪壳菌纲 Sordario
7、mycetes 肉座菌目 Hypocreales 线虫草科 Ophiocordycipitaceae （ Sung et al. 2007）。 4 环境与设施 4.1 场 地环境 选择人力资源充足，交通便利，生态环境良好，水资源丰富，空气和水环境良好的场地。 DB42/T 1272 2017 2 4.2 培植厂房设施 厂房须符合 GB 50073的洁净厂房要求。其中 100万级洁净区面积占总面积的 35%， 10万级洁净区面积 占总面积的 34%，一般区间占总面积的 31%。洁净区与周围的空间维持一定的压差，按工艺要求决定正压 与负压差，气流分布均匀， 高效过滤器的检漏大于 99.97%，辅助
8、车间采取通风措施，室内的静压值低于 洁净区。 温度调节范围可 -10 25 ， 相对空气湿度范围 30% 99%，光照强度范围 0 lx 100 000 lx。 4.3 土壤 a) 土壤要求 土壤有机质含量在 3% 16%， pH 5.0 8.0之间，土壤粒径集中在 0.05 mm 0.25 mm之间，壤质砂土， 有少量的石砾，具强度生草腐殖质累积与弱度氧化还原特征。 b) 土壤处理 经过定点取样检测采集合格的土壤。土壤经流水线消毒后，调节至 25% 55%之间的合适湿度，呈具 一定的凝聚性但不粘黏，透气良好的松散物理结构状态。采用规定的消毒检测流程可将土壤重复循环使 用。 4.4 植物饲料
9、a) 植物饲料来源 所用的饲料应为冬虫夏草产区天然或种植的蓼科、蔷薇科、伞形科、百合科、毛茛科、桔梗科、豆 科等科属植物的地下根茎部分（张泽锦等 2009；李文佳等 2016）；主要为蓼科的珠芽蓼、小大黄、圆 穗蓼等，一般主根肥厚有时多须根（张泽锦等 2009；李文佳等 2016） 。 b) 植物饲料要求 品质新鲜、无腐烂、无异味及杂质，有效利用率 90%以上；重金属含量符合 GB 2762；农药残留符合 GB 2763。 4.5 水 冬虫夏草的培植用水需要符合 GB 5749。 4.6 土壤、饲料和水混合 仿照青藏高原冬虫夏草产地土壤及天然植物根茎空间分 配结构，铺设培植土壤和饲料植物。土层
10、厚 度 10 cm 30 cm。根据具体土壤质地与植物饲料根茎质量密度差别，单位范围内土壤与饲料重量比为 1:0.5 1:2。 5 工艺流程及技术要求 5.1 培植工艺流程图 5.2 虫种繁育 5.2.1 建立野生蝙蝠蛾成虫繁育基地 模拟野生生长环境 植入卵 幼虫 +植入菌 僵虫 冬虫夏草 DB42/T 1272 2017 3 在冬虫夏草产区建立 成 虫繁育基地。根据实际的气候状况，调整基地内土壤水分含量，增加可食植 物的物种多样性与数量。 5.2.2 获得蝙蝠蛾卵 收集野生蝙蝠蛾成虫，使其集中交配产卵，收集蝙蝠蛾卵，在完全自然的生长状态下，完成卵、幼 虫、蛹阶段的生 长发育，蛹羽化为成虫，所
11、产大量卵作为冬虫夏草培植的虫源。 5.3 菌种培育 5.3.1 采集原始菌 5、 6月份，于冬虫夏草产区西藏、青海、四川采集优质冬虫夏草。从采集的冬虫夏草中分离菌种， 经过菌种鉴定，确定为冬虫夏草菌 Cordyceps sinensis (Berk.)Sacc.，应用于生产。 5.3.2 培养基的组成 加富 PDA培养基： 20%去皮马铃薯煮沸 30 min后过滤取滤液，葡萄糖 2% 3%，酵母粉 1%，蛋白胨 0.5%， 磷酸二氢钾 0.1%，无水硫酸镁 0.02% 0.025%，水， pH 6.5 6.8。 培养基的所有材料应符合相应 标准和国家相关规定的要求。 5.3.3 1级培养 用接
12、种针纵横切割斜面菌种为块状，挑取 3 mm 3 mm的菌块按装量 250 mL的量接种于 500 mL容量的 1级摇瓶中，匀浆机捣碎，摇床培养。通过生物量测定及微生物检测的结果剔除生长过慢及被污染的摇 瓶。 5.3.4 2级培养 将 1 级培养的菌液按 10% 20%的量扩至装量于 500 mL 的 1000 mL容量的 2 级摇瓶中，如上培养， 设置温度 14 20 ，转速 100 r/min 150 r/min，剔除生长过慢及被污染的摇瓶。 5.3.5 3 8 级培养 与 5.3.4同样方法扩至 3 8级摇瓶 ，培养，通过生物量测定及微生物检测的结果剔除生长过慢及被 污染的摇瓶。 5.3.
13、6 发酵培养 将摇瓶菌液按体积比 15% 20%接种量接入发酵罐中，再逐级发酵放大，进行生物量测定及微生物 检测。取样检查是否污染，无污染 则 可用于生产。 5.3.7 侵染菌体调配 a)菌丝的获得 洁净环境下，发酵菌液用离心机（ 1000 r/min,15 min）获得菌丝。 b)分生孢子的收集与计数 用接种针直接挑取不同部位的固体发酵菌丝块，并记下重量，用吐温 80液洗下分生孢子，离心（ 1000 r/min,15 min）收集，再用血球计数板在显微镜下计 数，可计算平均每克固体培养基所含的冬虫夏草分 生孢子量。 c)高效侵染菌源的配 制 按照子囊孢子 50000个 /L 80000 个
14、/L、分生孢子 20000 个 /L 50000 个 /L、菌丝 300 mg/L 600 mg/L的比例混合调配成高效侵染菌体。 5.4 冬虫夏草培植 DB42/T 1272 2017 4 5.4.1 寄主幼虫饲育 将蝙蝠蛾卵按照不同批次均匀投放于按 4.6的规定 备好的培植生态环境中，护理至 90%以上寄主幼虫 发育至 4 6龄适宜侵染的龄期。龄期与幼虫的种类以及所用菌种的浓度与 侵染 力状态相关。 5.4.2 接种 冬虫夏草菌对蝠蛾幼虫的接种采用针刺、喂食、涂抹、浸泡及 喷雾等方法，根据幼虫大小和菌的状 态，采用一种或几种组合的接种方式。 5.4.3 接种后管理 接种后幼虫，待其状态恢复
15、后，重新植入其培植环境中继续发育为僵虫，并长出子座，形成冬虫夏 草。 5.5 冬虫夏草采收及采后处理 5.5.1 冬虫夏草的采收 待冬虫夏草子座出土 3 cm 7 cm，子实体未成熟时，用特制的冬虫夏草采收工具小心拨开土层，将 冬虫夏草连同其纤维状附着物一同取出，用特制的刷子轻柔刷去虫体表面的泥土、菌膜和虫卵，即获得 冬虫夏草。 5.5.2 采收检验 剔除断草、瘪草、腐烂草。 5.5.3 冬虫夏草储存运输 保存和运输在低温环境下，温度控制在 0 以下 ，密封 包装以防止虫害和鼠害，同时做好防撞措施。 6 生产管理及病虫害防治 6.1 环境维护 定期巡视检查，观察记录环境状况和幼虫、僵虫、鲜草生
16、长发育状况，维持土壤和空气的温湿度， 调整光照，定期进行空间消毒、除菌，维持环境洁净度。 6.2 严格检疫 采取预防为主 ， 综合防治的方针。每一批冬虫夏草培植前均须将所使用的厂房区域进行彻底消毒除 菌，进入生产培植厂区的原材料、器具等均需灭菌 ， 有害病原菌白僵菌、绿僵菌、拟青霉菌不得于原材 料及环境中检出（方法见附录 A）。 6.3 防止病害传播 各饲育单位相对隔离，禁止不同饲育空间的器具、物品等在未经消毒情况下 交叉使用，严格防范幼 虫传染病的发生和流行。及时清除发现的病、弱虫及病草等不健康个体，带离饲育区，作灭活处理（方 法见附录 A）。如发现病弱异常个体超过 一定比例控制限 ，整个饲
17、育单位灭活，清空，彻底消毒后，再 次启用。 DB42/T 1272 2017 5 附 录 A （规范性附录） 冬虫夏草培植的消毒除菌方法 A.1 培植区域使用前消毒灭菌 采用二氧化氯消毒机进行空间消毒，二氧化氯浓度为 10 mg/m3 15 mg/m3， 消毒 3 h 4 h，通风换 气。检测沉降菌，合格后方可启用洁净区。 A.2 培植区域日常消毒灭菌 每周进行地面、墙壁和 工作台的灭菌 。 用 75%酒精纱布擦洗培养架、工作台。部分区域采用紫外照 射 20 min 30 min。 A.3 进入培植区域器物消毒除菌 布制品、小件玻璃、金属器物，高压蒸汽灭菌（ 121 ， 20 min）。 大件
18、机械设备用 75%酒精喷雾，擦拭表面或在厂房缓冲区紫外消毒，臭氧熏蒸 1 h。 A.4 病、弱个体灭活处理 发现的病、弱个体须将其投入专用的封闭灭菌筒中，及时带离培植区域，用专用蒸汽灭菌锅，湿热 灭菌法将其灭活，尸体远离厂区深埋处理。 DB42/T 1272 2017 6 参 考 文 献 1 邱乙，程元柳，彭成，等中国冬虫夏草寄主昆 虫研究 J时珍国医国药， 2015， 26： 720 722； 2 Sung GH， Hywel-jones NL， Sung JM， et al Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fugiJ Studies in Mycology， 2007， 57： 5-59； 3 张泽锦叶萌周祖基等冬虫夏草寄主昆虫饲养研究进展 J中草药， 2009 40； 85 87； 4 李文佳，李全平，魏再鸿，等土壤和植 物对冬虫夏草寄主昆虫规模化饲养的影响 J菌物学报， 2016， 35： 467 475。 _
