1、ICS 11.220B 41备 案 号 ： DB42湖 北 省 地 方 标 准DB42/T 792 2012猪 乙 型 脑 炎 乳 胶 凝 集 抗 体 检 测 方 法 Method of the latex agglutination for the detection of antibodies againstswine epidemic encephalitis 2012 -01- 06发 布 2012 -03-01实 施湖 北 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布 DB42/T 7922012 I 目 次前 言 .II引 言 .III1 范 围 .12 术 语 和 定 义 .13 实
2、验 原 理 .1 4 实 验 条 件 .15 实 验 材 料 .16 样 品 处 理 .17 实 验 方 法 .28 结 果 判 定 .29 注 意 事 项 .2附 录 A.3 DB42/T 7922012 II 前 言本 标 准 按 GB/T 1.1-2009 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分 ： 标 准 的 结 构 和 编 写 给 出 的 规 则 起 草 。本 标 准 由 华 中 农 业 大 学 提 出 。本 标 准 由 湖 北 省 农 业 厅 归 口 。本 标 准 起 草 单 位 ： 华 中 农 业 大 学 动 物 医 学 院 、 武 汉 科 前 动 物 生 物 制 品 有 限
3、 责 任 公 司 、 湖 北 省 动 物 疫病 预 防 控 制 中 心 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 曹 胜 波 、 金 梅 林 、 陈 焕 春 、 宋 念 华 、 黄 少 梅 、 李 淑 云 、 董 晓 辉 。 DB42/T 7922012 III 引 言乙 型 脑 炎 （ Japanese encephalitis, JE） 是 一 种 急 性 自 然 疫 源 性 虫 媒 传 播 的 人 畜 共 患 传 染 病 ， 可 对 人类 的 健 康 造 成 极 大 的 危 害 ， 被 卫 生 部 列 为 乙 类 传 染 病 。 猪 是 乙 型 脑 炎 主 要 的 传 染 源 之 一 ， 可
4、 与 蚊 虫 一 起形 成 循 环 传 播 ， 严 重 危 害 养 猪 业 。 国 家 农 业 部 将 猪 乙 型 脑 炎 归 于 二 类 动 物 疫 病 。 为 有 效 预 防 和 控 制 乙 型脑 炎 ， 在 加 强 预 防 和 免 疫 的 同 时 ， 临 床 上 急 需 一 种 特 异 、 敏 感 、 快 速 、 便 于 操 作 的 诊 断 方 法 ， 以 用 于 检测 猪 乙 型 脑 炎 病 毒 的 抗 体 。 DB42/T 7922012 1 猪 乙 型 脑 炎 乳 胶 凝 集 抗 体 检 测 方 法1 范 围本 标 准 规 定 了 猪 乙 型 脑 炎 乳 胶 凝 集 抗 体 检 测
5、 的 方 法 的 术 语 和 定 义 、 实 验 原 理 、 实 验 条 件 、 实 验 材 料 、样 品 处 理 、 实 验 方 法 、 结 果 判 定 和 注 意 事 项 等 。本 标 准 适 用 于 猪 血 清 、 全 血 和 乳 汁 中 猪 乙 型 脑 炎 病 毒 抗 体 的 检 测 。2 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件 。乳 胶 (latex)： 泛 指 聚 合 物 微 粒 分 散 于 水 中 形 成 的 胶 体 乳 液 。 3 实 验 原 理乳 胶 凝 集 试 验 也 称 间 接 乳 胶 凝 集 试 验 ， 是 将 抗 原 或 抗 体 结 合
6、在 聚 苯 乙 烯 乳 胶 微 粒 表 面 ， 然 后 与 相 应的 抗 原 或 抗 体 作 用 ， 在 电 解 质 存 在 的 适 宜 条 件 下 ， 微 粒 发 生 凝 集 ， 从 而 观 察 反 应 的 结 果 。4 实 验 条 件4.1 实 验 室实 验 操 作 宜 在 常 温 （ 18 25 ） 进 行 。4.2 仪 器台 式 低 温 高 速 离 心 机 、 微 量 移 液 器 、 冰 箱 、 玻 片 、 吸 头 。 4.3 人 员注 意 个 人 防 护 和 环 境 保 护 。5 实 验 材 料5.1 猪 乙 型 脑 炎 病 毒 致 敏 的 乳 胶 抗 原 ： 为 乳 白 色 均 匀
7、 胶 状 液 ， 如 出 现 分 层 ， 使 用 前 轻 轻 摇 匀 。5.2 猪 乙 型 脑 炎 病 毒 阳 性 对 照 血 清 。5.3 阴 性 对 照 血 清 。5.4 样 品 稀 释 液 配 制 见 附 录 A。6 样 品 处 理 6.1 血 清 DB42/T 7922012 2 按 常 规 方 法 采 血 及 分 离 血 清 ， 血 清 宜 清 亮 。6.2 全 血用 针 尖 刺 破 待 检 动 物 耳 静 脉 ， 用 吸 头 吸 取 血 液 一 滴 ， 置 于 载 玻 片 上 。6.3 乳 汁按 常 规 方 法 采 集 乳 汁 ， 经 3000 r/min离 心 10 min， 取
8、 上 清 液 作 样 品 。7 实 验 方 法取 样 品 (血 清 、 全 血 或 乳 汁 )、 阳 性 对 照 血 清 、 阴 性 对 照 血 清 、 稀 释 液 各 一 滴 ， 分 别 置 于 玻 片 上 。 各加 乳 胶 抗 原 一 滴 ， 混 匀 并 晃 动 1 min 2 min， 于 3 min 5 min内 观 察 结 果 。 8 结 果 判 定8.1 凝 集 反 应 可 能 出 现 以 下 几 种 结 果 ：a)“+”： 全 部 乳 胶 凝 集 ， 颗 粒 聚 于 液 滴 边 缘 ， 液 体 完 全 透 明 ；b) “+”： 大 部 分 乳 胶 凝 集 ， 颗 粒 明 显 ，
9、液 体 稍 混 浊 ；c) “+”： 约 50 乳 胶 凝 集 ， 但 颗 粒 较 细 ， 液 体 较 混 浊 ；d) “+”： 有 少 许 凝 集 ， 液 体 略 显 混 浊 ；e) “-”： 液 滴 呈 原 有 的 均 匀 乳 状 。8.2 成 立 条 件30 sec 60 sec 内 出 现 如 下 结 果 ， 试 验 方 可 成 立 ： 阳 性 对 照 样 品 与 乳 胶 诊 断 液 进 行 乳 胶 凝 集 反 应 ，应 出 现 “ +” 以 上 凝 集 ； 阴 性 对 照 样 品 与 乳 胶 诊 断 液 进 行 乳 胶 凝 集 反 应 ， 应 不 凝 集 。 8.3 结 果 判 断3
10、0 sec 60 sec 内 出 现 “ +” 以 上 凝 集 ， 判 为 阳 性 ； 30 sec 60 sec 内 液 滴 呈 原 有 的 均 匀 乳 状 为 阴 性 。9 注 意 事 项实 验 过 程 中 注 意 做 好 个 人 的 生 物 安 全 防 护 措 施 ， 废 弃 物 应 做 无 害 化 处 理 。 DB42/T 7922012 3 AA附 录 A（ 规 范 性 附 录 ）试 剂 配 制A.1 样 品 稀 释 液 的 配 制氯 化 钠 （ NaCl ） 8.0 g氯 化 钾 （ KCl） 0.2 g磷 酸 氢 二 钠 （ Na 2HPO312H2O） 2.9 g磷 酸 二 氢 钠 （ KH2PO4 ） 0.2 g硫 柳 汞 0.2 g加 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 定 容 至 1000 mL即 可 ， 置 2 8 保 存 备 用 。B _
