1、 ICS 11.220 B 41 备案号：55156-2017 DB63 青海省地方标准 DB 63/T 15852017 肝片吸虫病诊断与防治技术规范 2017 - 06 - 20 发布 2017 - 09 - 20 实施 青海省质量技术监督局 发布 DB63/T 15852017 I 前 言 本规范的编写符合GB/T 1.1-2009给出的规则。 本规范由青海省农牧厅提出并归口。 本规范由青海省动物疫病预防控制中心起草。 本规范主要起草人：赵全邦、李静、胡广卫、蔡金山、沈艳丽、马占全、郭春兰、王晓润、阚威、 李双、白海涛、张晓英。 DB63/T 15852017 1 肝片吸虫病诊断与防治技
2、术规范 1 范围 本规范规定了家畜肝片吸虫病诊断的方法、内容以及肝片吸虫病的防治等技术要求。 本规范适用于家畜肝片吸虫病诊断和防治。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 18635 动物防疫基本术语 3 定义和术语 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 肝片吸虫病 是由肝片形吸虫寄生于草食性哺乳动物的肝胆管内，或人体而引起人兽共患寄生虫病，是牛、羊等 动物严重的寄生虫病之一。 3.2 诊断 通过观察和检查对病例的病性和病情作出判断。 3.3
3、 临床诊断 通过现场观察和临床检查对病例的病性和病情做出判断。 3.4 实验室诊断 通过物理、化学、生物学试验，对取自病例的病料进行检查，获取具有诊断价值的数据。 4 诊断技术 DB63/T 15852017 2 4.1 临床诊断方法 4.1.1 临床症状 4.1.1.1 急性型临床症状 急性型多发于羊，在秋季，羊只受到严重感染时，可发生急性型症状，可出现微热，肝脏浊音区扩 大，肝部有压痛，有时突然死亡。 4.1.1.2 慢性型临床症状 牛、羊患本病时多呈慢性型，主要症状为渐进性消瘦，食欲减退，颌下、前胸、下腹部水肿，贫血， 结膜与口黏膜苍白，生长受阻，产奶量降低，孕畜可能流产。 4.1.2
4、病理变化 4.1.2.1 急性型病理变化 可见到急性肝炎，肝肿大，包膜有纤维素沉积，有2 mm5 mm长的暗红色虫道，内有凝固的血液和 很小的童虫，常伴有腹膜炎。 4.1.2.2 慢性型病理变化 主要呈现慢性肝炎和慢性胆管炎。早期肝脏肿大，以后萎缩硬化，小叶间结缔组织增生，眶管扩张、 肥厚、变粗，呈绳索样突出于肝脏表面。胆管内壁有盐类沉积，内膜粗糙，切时有沙沙声，在牛多见。 4.1.3 流行特点 4.1.3.1 呈地方性流行，多发生在有中间宿主椎实螺的低洼和沼泽地带的放牧地区。 4.1.3.2 牛羊最易感染，绵羊为最主要的终末宿主。 4.1.3.3 该病的流行与外界自然环境条件关系密切，主要流
5、行于春末、夏、秋季节。多雨年份能促进 本病的流行。 4.2 病原学诊断 4.2.1 虫卵检查方法（沉淀法） 4.2.1.1 材料 200 mL玻璃杯，60目铜丝筛，玻璃棒，镊子，胶帽吸管，载玻片和盖玻片，天平，显微镜。 4.2.1.2 方法 4.2.1.2.1 取新鲜粪便 10 g 放人玻璃杯中，先加 10ml 水搅成糊状，然后再继续加水 20 倍。经充分混 合后，用 60 目铜丝筛网滤人另一玻璃杯中，把滤过的粪便混悬液静置沉淀 3min 后，倒掉上清液，再继 续加水混合，静置沉淀。 4.2.1.2.2 静置 10min，这样反复进行，直到上清液透明为止。 4.2.1.2.3 吸取沉淀物放在载
6、玻片上，加盖玻片在显微镜下作定性检查。 4.2.1.2.4 定量检查，须将所有沉淀物全部镜检（不加盖玻片，用低倍显微镜检查），统计全部虫卵 数。 4.2.1.3 结果判定 DB63/T 15852017 3 肝片形吸虫虫卵呈长卵圆形，大小为116m132m66m82m（长宽），黄褐色。前端较 窄，有一个不明显的卵盖，后端较钝。卵壳较薄而透明，卵内充满卵黄细胞和一个胚细胞。镜检检出虫 卵即可判定为肝片吸虫病。 4.2.2 肝脏虫体检查方法（剖检法） 4.2.2.1 材料 解剖刀，解剖剪，外科剪，挑针，镊子，搪瓷盆，搪瓷盘，平皿，搪瓷缸，载玻片。 4.2.2.2 虫体的采集 4.2.2.2.1 按
7、一般剖检术式摘出肝脏，再剪断胆管与十二指肠连接部位，要注意观察断端有无虫体流 出。 4.2.2.2.2 将肝脏放搪瓷盘中。分离胆囊，放在平皿中，剪开囊壁，将胆汁用清水稀释，等自然沉淀 后，检查沉淀物中有无虫体。检查肝脏时，先看肝表面有无病变结节，发现后用剪刀剪取，放在载玻片 中间做压片检查。 4.2.2.2.3 沿大胆管及其分支剪开，如发现虫体取出放在盛有清水的平皿中。再沿着与胆管垂直的方 向将肝组织切成数大块，注意断面有无虫体或病灶。用手压挤，看是否有虫体被压出。 4.2.2.2.4 将肝块浸入盛有多量水的搪瓷盆中，用手撕成小块，再挤压每个小肝块，洗净后取出。向 搪瓷盆内再加些水进行反复水洗
8、沉淀，检查沉淀物，用平头镊子挑出虫体。 4.2.2.2.5 挑出的虫体用生理盐水洗净，再放在常温水内或薄荷脑液(附录 A.1）中使虫体松弛。有些 虫体的肠管内含有大量食物，可在生理盐水中放置过夜，待其食物消化或排出。 4.2.2.3 虫体的固定、染色和封片 将挑拣好的虫体进行固定、盐酸卡红染色、脱色脱水、透明封片后进行鉴定。（详见附录B） 4.2.2.4 结果判定 肝片形吸虫虫体扁平，外观呈叶片状，自胆管取出时呈棕红色，固定后变为灰白色。体长20 mrn 40 mm，宽8 mm13 mm。其长度约是宽度的两倍。虫体前端呈圆锥状的头椎。头椎后方变宽为肩部，肩 部以后逐渐变窄，末端较尖。体表生有许
9、多小刺。口吸盘位于头椎的前端，在头椎基部稍后方为腹吸盘。 在口吸盘与腹吸盘之间有生殖孔。肠管的外侧枝特别发达，内侧枝短，睾丸纵侧枝位于虫体的中后部， 约占整个虫体的2/3，发现虫体即可确认为肝片吸虫病。 5 防治技术 5.1 预防 5.1.1 定期驱虫 5.1.1.1 驱虫时间 每年最少两次（春、冬两季）定期驱虫。 5.1.1.2 驱虫药 驱虫药多使用高效、低毒的药物，推荐使用三氯苯达唑（详见附录 C ）。注意使用 药物时先进行小群试用，确认安全后再进行大范围使用。 5.1.1.3 驱虫方法 预防肝片吸虫病要有季节性，针对童虫和成虫分别驱虫。在春季驱虫，以驱除杀 灭机体内残存的成虫；在进入夏季
10、牧场前给药，以防止囊蚴感染机体；在每年秋冬季节进行一次驱虫， 以驱除感染的虫体，防止在体内发育，损伤肝脏。 DB63/T 15852017 4 5.1.2 消灭中间宿主 5.1.2.1 结合草原或农田基本建设、兴修水利和填补与改造低洼沼泽地带等措施，避免存在利于生存 螺蛳的环境。 5.1.2.2 用饲养水禽、鸭、鹅等生物方法灭螺。 5.1.2.3 用化学药物灭螺，常用 5硫酸铜溶液(最好在溶液中加入 10粗制盐酸)，每 1m 至少喷洒 5000ml 溶液；或用氯化钾，每 1m 喷洒 20g25g，喷洒频次为 12年。但要注意结合生态环境保护， 只有在小范围时可使用化学药物灭螺。 5.1.3 轮
11、牧 根据不同生态条件，实行划地轮牧的方法，夏秋季在山地、高坡和无螺草场上放牧，不要在低洼、 潮湿的地方放牧，冬春季到低湿牧地放牧。 5.1.4 粪便进行无害化处理 对病牛、羊的粪便及时清理，堆积发酵。对实施了驱虫的牛、羊，必须圈留 5d 7d，对所排粪便， 应严格进行生物热发酵。 5.1.5 加强饲养管理 保持牛、羊等家畜的饮水和饲草卫生，不要饮用停滞不流的沟渠、池塘滋生有椎实螺的水，将低洼 潮湿地的牧草割晒后再喂食，扩大和利用人工草场，采用放牧与补饲相结合的饲养方式，合理补充精料 和必要的添加剂，增强牛羊体质。 5.1.6 其他注意事项 本病常引发羊黑疫，因此在春季可接种羊黑疫菌苗，对预防肝
12、片吸虫病具有一定的效果。 5.2 治疗 5.2.1 治疗时间 本病在早期诊断的基础上及时治疗方能取得较好的效果，后期容易出现虫体堵塞胆管，治疗效果不 明显。 5.2.2 治疗药物 药物应选择高效、低毒、安全方便、易于推广的驱虫药，允许使用（附录C）中的抗寄生虫药物。 根据剂型含量不同，具体用量以药品说明书为依据，并严格遵守药物规定的用法、用量和休药期。严禁 使用未经农业部批准或已淘汰的兽药。 DB63/T 15852017 5 A A 附 录 A （规范性附录） 各种溶液的配制 A.1 薄荷脑液 取薄荷脑2mg，溶于95%酒精10ml中，制成薄荷脑饱和酒精溶液，使用时将此液一滴加入100ml
13、水中 即可。 A.2 盐酸卡红染色液 取蒸馏水15 ml，加盐酸2ml，煮沸，趁热加入卡红染粉4g，再加入85%酒精95ml，再滴加浓氨水1 2滴以中和，待出现沉淀，放冷，过滤，其滤液即为盐酸卡红染液。 A.3 酸酒精 70%酒精100ml，加浓盐酸2ml。 DB63/T 15852017 6 B B 附 录 B （资料性附录） 肝片吸虫虫体的固定、染色和封片 B.1 虫体的固定 将挑拣出的虫体放在吸水纸上吸干水分，再放在清洁的载玻片上，载玻片两端铺上单层滤纸，盖上 另一载玻片，稍加压力将虫体压薄后，用橡皮筋或线绳扎紧，投入70%酒精内同定。注意投入时，应以 一端慢慢浸入，便于将两载玻片之间的
14、空气赶出，同定时间应达24h以上。 B.2 虫体染色（采用盐酸卡红染色法） B.2.1 虫体染色 将在70%酒精内固定好的虫体标本取出，投到盐酸卡红染色液(附录A.2）中，染色24h以上。尽可能 将虫体深染，使虫体的内部器官充分着色。 B.2.2 虫体脱色 将虫体自染色液中取出放入酸酒精(附录A.3）中脱色，脱色时间一般为1h。要随时观察，至颜色深 浅分明，即虫体外层呈淡红色、内部构造呈深红色时取出，放于70%酒精中中和30min60min。 B.2.3 虫体脱水 将脱色好的虫体分别移人80%、90%、95%、10 0%酒精中各脱水30min60min。 B.2.4 虫体透明 将虫体先经1:1
15、的100%酒精和二甲苯混合液中透明30min，再取出放入纯二甲苯中，待虫体下沉后即 可取出封片。用二甲苯透明时，时间不宜过长，否则虫体变硬而脆，不便封片。最好随时透明，随时封 片。 B.3 虫体的封片 将透明的虫体放于载玻片上，滴加适量的加拿大树胶（将加拿大树胶用少量二甲苯稀释后再用，这 样便于操作），用盖玻片封固，封固时切忌留有气泡在内。待干后直立装入标本盒内待检。 DB63/T 15852017 7 C C 附 录 C （规范性附录） 允许使用的药物及使用规定 表C.1 允许使用的抗肝片吸虫药物 单位：天 名称 制剂 用法与用量 休药期 三氯苯哒唑 片剂 内服，一次量，羊10mgkg，牛1
16、2mgkg体重 28 硝氯酚 片剂、注射剂 内服，一次量羊34mgkg，牛37mgkg体重； 皮下、肌内注射 一次量牛、羊0.61mgkg体重； 28 溴酚磷 片剂、散剂 内服，一次量，羊 1216mgkg，牛 12mgkg 体重 21 氯氰碘柳胺钠 片剂、注射剂 内服，一次量，羊 10mgkg，牛 5mgkg 体重；皮下、肌 内注射 一次量，牛 2.55mgkg、羊 5 10mgkg 体重； 28 硝碘酚睛 注射剂 皮下注射 一次量，牛、羊 10mgkg 体重 60 碘醚柳胺 粉剂 内服，一次量，羊、牛 712mgkg 体重 60 双酰胺氧醚 粉剂 内服，一次量，羊、牛 100mgkg 体重 7 芬苯达唑 片剂、散剂 内服，一次量，羊、牛 2050mgkg 体重 14 丙硫苯咪唑 片剂、散剂 内服，一次量，羊、牛 1015mgkg 体重 牛28、羊10 盐酸左旋咪唑 片剂、散剂、 注射剂 内服，皮下、肌内注射 ，一次量，羊、牛 7.5mgkg 体 重 牛14、羊28 奥芬达唑 片剂 内服，一次量，羊、牛 57.5mgkg 体重 牛11、羊21 吡喹酮 片剂 内服，一次量，羊、牛 1035mgkg 体重 28
