1、 GH/T 1135-2017 中华全国供销合作总社 发布 富硒农产品 Selenium-enriched agricultural products 中华人民共和国供销合作行业标准 2017-04-25 发布 2017-09-01 实施 ICS 65.020 B 04 GH GH/T 1135-2017 I 前 言 本标准依据 GB/T 1.1 2009标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写的规则 起草。 本标准由中华全国供销合作总社提出 并归口 。 本标准起草单位： 苏 州 硒谷科 技有限公司、中华全国供销合作总社北京商业机械研究所、 中国科学技术大学先进技术研究院、河北省承德市农
2、牧局、苏州硒泰克生物科技有限公司、 中国科学院南京土壤研究所、苏州大学 、济源市农业科学院 。 本标准主要起草人： 尹雪斌、 杨荣、杨枫、 刘颖 、 臧佳、 李飞 、王玉宏、施卫明、秦立 强 。 本标准 系首次 发布。 GH/T 1135-2017 1 富硒农产品 1 范围 本标准规定了富硒农产品的术语和定义、要求、 试 验方法、包装、标签 、 标识、运输和 贮存。 本标准适用于种植在富硒土壤 和种植 /养殖 过程中 通过硒生物营养强化技术措施生产的 富硒农产品。 本标准不适 用于通过 收获 、屠宰或捕捞 后添加硒所获得的农产品。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是
3、注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 2762 食品安全国家标准 食品中 污染物限量 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留 限 量 GB 5009.93 食品安全国家标准 食品中硒的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 7718 食品安全国家标准 预包装食品标签通 则 GB 13432 食品安全国家标准 预包装特殊膳食用食品标签 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件 。 3.1 富硒农产品 selenium-enriched agricultural prod
4、ucts 通过生长过程自然富集硒或通过硒生物营养强化技术，而非收获后添加硒，所获得 的富 含微量元素硒的产品，其可食部分的总硒含量和硒代氨基酸含量符合本标准规 定范围的农产 品。 3.2 硒生物营养强化技术 selenium biofortification technology 通过施用 （或使用） 富硒（或含硒） 微量元素 调理剂（或肥料） ，经生物自然生长转化， 提高其可食部 分 的 总 硒含量和硒代氨基酸含量的技术。 3.3 硒代氨基酸 seleno-amino acids 由硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸 等组 成的含硒氨基酸及其衍生物 。 注： 生物体中含硒的蛋白质为硒
5、的主要存在形式，硒结 合进入蛋白质可以有两种途径，一种是蛋白质 合成 时硒随机取代了硫形成的硒代蛋氨酸，另一种是通过密码子 UGA 翻译形成硒代半胱氨酸。由这两种 方式形成的含硒氨基酸及其衍生物称为硒代氨基酸 。 4 要求 4.1 质量 要求 GH/T 1135-2017 2 农业活动中获得的初 级产品， 应为完整、洁净，无腐烂、畸形、异味、开裂、霉变及 病虫害等并符合该类产品标准的农产品。 4.2 卫生安全 要求 应符合 GB2762、 GB2763 的规定。 4.3 总 硒含量和硒代氨基酸含量 要求 富硒农产品的 总 硒含量和硒代氨基酸含量 (占比 )指标应符合表 1 的要求。 表 1 富
6、硒农产品的 总 硒含量和硒代氨基酸含量 (占比 ) 项 目 指 标 总 硒含量 mg/kg 硒代氨基酸含量 a 占 总 硒含量 的 百分比 % 谷物类 0. 100.50 65 豆类 0.101.00 65 薯类 （以干重计） 0.101.00 65 蔬菜类 （以干重计） 0.101.00 65 食用菌类 （以干重计） 0.105.00 65 肉类 0.150.50 80 蛋类 0.150.50 80 茶 叶 0.254.00 60 a 硒代氨基 酸 含量是 硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸 和 硒甲基硒代半胱氨酸 含量之和 。 5 试验方法 5.1 总 硒含量 按 GB 5009.93 规定的方法测定
7、。 5.2 硒代氨基酸含量 按附录 A 规定的方法测定。 6 包装 包装材料和容器应符合食品 安全国家 标准的相关规定。 7 标签、标识 7.1 应符合该类农产品的标识规定。 7.2 应符合 GB 7718、 GB 13432 的规定，并在标签 或者附加标识 上标明 总 硒 含量 和硒代氨 基酸含量 占比 。 7.3 应标明种植、养殖过程中所 使用 富硒（或含硒）微量元素调理剂 （或肥料） 的种类。 GH/T 1135-2017 3 8 运输 应使用符合卫生要求的运输工具和容器运送。运输过程中应轻拿轻放，防止日晒雨淋， 不得与有毒有害、有污染的物品混运。 9 贮存 应贮存在清洁、干燥、避光、防
8、雨、防虫、防鼠、无异味的仓库内，不 得 与有毒有害物 质和其他禁 用物质混 存。 GH/T 1135-2017 4 附录 A （规范性附录） 硒代氨基酸含量的测定方法 A.1 原理 试样中的硒代氨基酸经酶水解提取后 ，利用液相色谱 进行 有效分离， 分离后的目标组分 经过 形态预处理装置中的 紫外消解， 在 酸性条件下与 硼 氢 化钠或硼氢化钾 反应 生成硒化氢 （ H2Se），由载气（氩气）带入原子化器中进行原子化，在硒空心阴极灯照射下，基态硒 原子被激发至高能态， 在 去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与硒含量 成正比。 按外标法与标准系列溶液比较 进行定量 ，按色谱保留时
9、间进行定性。 A.2 试剂 除另有说明外， 本方法所用 试剂均为优级纯， 水为 GB/T 6682 中规定的一级水 。 所有酶 均应 2 8低温贮存。 A.2.1 甲酸 （ 含量 98.0%） 。 A.2.2 盐酸 （含量： 36.0%38.0%） 。 A.2.3 三羟甲 基氨基甲烷。 A.2.4 氢氧化钠 (或氢氧化钾 )。 A.2.5 碘化钾。 A.2.6 硼氢化钠 (或硼氢化钾 )。 A.2.7 磷酸氢二铵：分析纯。 A.2.8 硒代胱氨酸（ 含量 99%） A.2.9 硒甲基硒代半胱氨 酸（ 含量 99%） A.2.10 硒代蛋氨酸（ 含量 99%） A.2.11 硒酸钠（ 含量 98
10、.0%） A.2.12 纤维素酶：酶活力 3 U/mg。 A.2.13 脂肪酶：酶活力 20000 U/mg。 A.2.14 蛋白酶 K：酶活力 30 U/mg。 A.2.15 蛋白酶 XIV： 酶 活力 3.5 U/mg。 A.3 试剂配制 A.3.1 10%甲酸溶液 (体积分数 )：量取 10 mL 甲酸 (A.2.1)，溶于水并稀释定容至 100 mL 容量瓶中，摇匀，备用。 A.3.2 10%盐酸溶液 (体积分数 )：量取 100 mL 盐酸 (A.2.2)，溶于水并稀释定容至 1000 mL 容量瓶中，摇匀，备用。 A.3.3 三羟甲基氨基甲烷 -盐酸 （ Tris-HCl）：称取
11、6.06 g 的 三羟甲基氨基甲烷 （ A.2.3） 用 水 溶解后，加入 3.4 mL 的 盐酸 (A.2.2)， 溶解， 定容至 500 mL 容量瓶中，摇匀， 备用。 A.3.4 氧化剂 ：称取 5g 氢氧化钠 （或氢氧化钾） （ A.2.4） ， 用水 溶解后 再 加入 10g 碘化钾 （ A.2.5） ， 溶解， 定容至 1000 mL 容量瓶中 ，摇匀，备用。 A.3.5 还原剂 ：称取 3.5g 氢氧化钠 （或氢氧化钾） （ A.2.4） ， 用水 溶解后 再 加入 12.0g 硼 氢化钠 （或硼氢化钾） （ A.2.6） ，溶解， 定容至 1000 mL 容量瓶中 ，摇匀，备用
12、。 GH/T 1135-2017 5 A.3.6 流动相：称取 5.28g 磷酸氢二铵 （ A.2.7） 用水 溶解后，定容至 1000 mL 容量瓶中 ， 用 10%甲酸溶液 （ A.3.1 ） 调节 pH 值 至 6.0，经 0.45m（或更小孔径，如 0.22m）水系 滤 膜过滤（真空抽滤）后，超声 水浴中 脱气 15min，备用 。 A.3.7 硒 代氨基酸 标准储备液 （以硒计） ：分别准确称取硒代胱氨酸（ A.2.8）、 硒甲基硒代半胱氨酸 （ A.2.9） 、硒代蛋 氨酸 （ A.2.10） 0.106 g、 0.115 g、 0.124 g 溶解在水中 硒代胱氨酸 标准品 需先
13、用 10%盐酸 溶液 （ A.3.2）预溶解 ， 再 用水定 容至 50 mL 容量瓶中 ，配制得到 1 mg/mL 硒 代氨基酸 标准储备液 ，置于 4冰箱贮存备用 。 A.3.8 四价硒 Se（ IV） 标准储备 液 （ 1 mg/mL） ：购买具有证书的国家标准溶液。 A.3.9 六价硒 Se（ VI） 标准储备液 （ 1 mg/mL） ： 准确称取 0.239g 硒酸钠 （ A.2.11） ， 用 10%盐酸 溶液 （ A.3.2） 溶解后定容至 100mL 容量 瓶 ，此储备液 浓度每毫升相当于 1mg 硒 。 A.4 仪器及设备 A.4.1 液相色谱 -形态预处理装置 -原子荧光联
14、用仪 （ LC-AFS）：液相色谱仪（包括液相 色谱泵），原子荧光光谱仪（包括 硒空心阴极灯 ） 。 A.4.2 真空抽滤装置。 A.4.3 低温高速离心机。 A.4.4 高速 粉碎机。 A.4.5 冷冻干燥机。 A.4.6 气浴恒温振荡器。 A.4.7 超声波清洗器。 A.4.8 天平：感量为 0.1mg。 A.4.9 pH 计：精度为 0.01。 A.4.10 恒温干燥箱（ 50 200） 。 A.4.11 冷冻浓缩仪。 A.5 分析步骤 A.5.1 试样制备 A.5.1.1 谷物类 、豆类等试样 ： 去杂质后 用蒸馏水清洗 3 次，于 60 （ 2） 烘干，粉碎， 过 筛孔尺寸为 0.1
15、50 mm（ 100 目 ） 筛 ，储于 干净的 塑料瓶内，备用。 A.5.1.2 肉 类 、蛋类和 含水率较高的蔬 菜类 试样 ：用蒸馏水清洗 3 次后，预冷冻后冷冻干燥， 粉碎 ， 过 筛孔尺寸为 0.150 mm（ 100 目 ） 筛 ，储于 干净的 塑料瓶内，备用。 A.5.2 试样酶解 称取 0.1g1.0g（精确至 0.001g） 固体试 样 或 吸取 1.0 mL5.0 mL 液体 试样于 15 mL 离 心管中 ， 加入 5 mL Tris-HCl（ A.3.3） ，摇匀后，超声 30 min， 谷物类 、豆类及蔬菜类等植 物类试样 先加入 50 mg 的纤维素酶 （ A.2.
16、12） ，肉类、蛋类等 动物 类试样 先加入 50 mg 脂肪 酶 （ A.2.13） ，后加入 20 mg 蛋白酶 K（ A.2.14） ， 摇匀， 水平 置 于气浴恒温振荡器中，调 节温度为 50 2 ，转速为 250 r/min，培养 18 h 后，再加入 20 mg 蛋白酶 XIV（ A.2.15） ， 37 2 下，培养 18h 后 ， 于 4 ， 10000 r/min 条件下，离心 30 min。 提 取液 过 0.22 m 水系 滤 膜后待测。 按同一操作方法作空白试验。 注： 总硒含量 低于 1.0 mg/kg 的样品可利用冷冻浓缩仪 (4 条件下 )， 按 A5.2 获得的
17、 提 取液 浓缩后进行测定。 GH/T 1135-2017 6 A.5.3 标准曲线的 制作 用水逐级稀释标准储备液 （ A.3.7， A.3.8， A3.9） ，最后配制成浓度为 20 g/L、 40 g/L、 60 g/L、 80 g/L、 100 g/L的 硒 混合标准 系列 溶液 （现配现用） ， 吸取硒 混合 标准系列溶 液 100 L 注入液相色谱 -形态预处理装置 -原子荧光联用仪进行分析， 得到色谱图， 以保留 时间定性。以硒 混合 标准系列溶液的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线， 硒 混合 标准溶液色谱图见图 A.1。 A.5.4 测定 不同型号仪器的最佳测试条
18、件不同，可根据仪器使用说明书自行选择，通常本标准采用的仪 器 参考 条件如下： A.5.4.1 仪器参考条件 A.5.4.1.1 液相色谱参考条件 阴离子交换色谱柱 (柱长 250 mm，内径 4.1 mm，粒径 10 m)，或等效柱。 阴离子交换色谱保护柱（柱长 25 mm，内径 2.3 mm，粒径 12m20 m），或等效 柱。 流动相洗脱方式：等度洗脱；流速 1.0 mL/min；进样体积： 100 L。 A.5.4.1.2 原子荧光参考条件 灯电流 /辅阴极： 100 mA/45 mA； 光电倍增管负高压： 300 V； 载气流速： 300 mL/min； 屏蔽气流速： 700 mL/
19、min； 原子化温度： 800 ； 炉高： 8 mm； 测量方式：标准曲线法 （外标法） ； 读数方式：峰面积； 峰采集时间： 8min。 A.5.4.1.3 载液： A.3.2， A.3.4， A.3.5 中所述溶液，流速为 4.0 mL/min。 A.5.4.2 测定 设定好仪器条件 后 ， 液相色谱、 形态预处理装置与原子荧光联机后，采集基线，待基线 稳定后，测定 硒 混合标准系列 溶液（ A.5.3） ，绘制标准曲线。再测定试样 ， 每测一个试样 均应清洗进样针，试样测定结果按 式 (A.1)计算。 A.6 分析结果 计算和表示 按式（ A.1）计算试样中硒 代氨基酸 含量： X =
20、（ C-C0） V1000 (A .1) m10001000 式中： X 试样中硒 代氨基酸 含量 （以硒计） ，单 位为 毫 克每千 克 或毫克每升 （ mg/kg 或 mg/L）； C 试样 提取 液测定的浓度，单位为 纳 克每 毫 升（ ng/mL）； C0 试样空白 测定的浓度，单位为 纳 克每 毫 升（ ng/mL）； V 试样 提取液 定容总体积，单位为毫升（ mL） ； GH/T 1135-2017 7 m 试样 质量（体积），单位为克 或毫升 （ g 或 mL）。 1000 换算系数。 注：经 冷冻 浓缩的样品，结果计算时应除以相应的浓缩倍数。 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留 三 位有效数字。 A.7 精密 度 在重复条 件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算 术 平均值的 20%。 A.8 方法检出限 SeCys2、 SeMeCys、 Se (IV) 、 SeMet 和 Se（ VI） 检出限分别为 2.3g/L、 5.0g/L、 2.0g/L、 7.4g/L 和 5.1g/L。 图 A.1 硒混合标准溶液色谱图（ LC-AFS 法，等度洗脱） 说明： SeCys2 硒代胱氨酸； SeMeCys 硒甲基硒代半胱氨酸； Se（ IV） 四价硒； SeMet 硒代蛋氨酸 ； Se（ VI） 六 价硒 。 _
