1、ICS 65.150 B 51 DB3302 浙 江 省 宁 波 市 地 方 标 准 DB 3302/T 1622018 海洋微藻饵料规模化培养技术规范 2018 06 21发布 2018 06 21实施 宁波市质量技术监督局 发布 DB3302/T 1622018 I 前 言 本 标准 按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由 宁波市 海洋与渔业局提出。 本标准由 宁波市 水产标准化技术委员会归口。 本标准起草单位： 宁波甬盛水产种业有限公司、 宁波市海洋与渔业研究院、 浙江万里学院 、宁波大 学 。 本标准主要起草人： 申屠基康、董迎辉、林志华、徐继林、何琳、沈庞幼、姚韩
2、韩、陈彩芳 。 DB3302/T 1622018 1 海洋微藻饵料规模化培养技术规范 1 范围 本标准 规定了等鞭金藻（ Isochrysis galbana）、亚心形扁藻 (Platymonas subcordiformis)、牟 氏角毛藻（ Chaetoceros muelleri）、三角褐指藻（ Phaeodactylum tricornutum）等水产育苗和养殖 生产用海洋微藻饵料规模化培养的设施设备和条件、藻种选择与培养液配制、保种与培养、日常管理、 收获与保存。 本标准 适用于海洋微藻饵料规模化培养，其它单胞藻培养可参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少
3、的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日 期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 11607 渔业水质标准 NY 5362 无公害食品 海水养殖产地环境条件 SC/T 2047 水产养殖用海洋微藻保种操作技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 一级培养 藻类的保种和初级扩种培养阶段。 在无菌保种室中，用 500ml 5000ml三角烧瓶作培养容器，用消 毒纱布和纸张封口，每天 2次 4次摇晃震荡进行培养。 营养盐为分析纯级别。 3.2 二级扩种培养 藻类的二级扩种培养阶段，用于生产培养接种。用 50L 100L白
4、塑料桶或 尼龙袋封闭式培养，培养 期间连续充气。 营养盐为化学纯级别。 3.3 三级生产性培养 藻类的生产性培养阶段，用于供给育苗中的饵料。一般 用面积为 20m2 40m2的培养池 ，蓄水高度为 80cm 100cm。 营养盐为化学纯或工业纯级别。 3.4 一次性培养 指在一定的容器中，根据藻类的营养需要加入特定的培养液并接种，在适宜的环境条件下培养，当 藻类细胞生长繁殖达到一定密度后，一次全部收获或进一步扩大培养。 3.5 半连续培养 DB3302/T 1622018 2 指当培养的藻细胞达到一定密度时，根据藻类的生长状态和育苗需求量收获一部分浓藻液，并补充 等量的新培养液继续培养。 3.
5、6 连续培养 指在室内培养容器中封闭式培养，采用自动控温、人工光源、充气培养条件，不断取出达到一定密 度的藻细胞培养液，同时加入等量新的培养液的培养方法。 4 设施、设备和条件 4.1 保种室 用于保存和培养高浓度微藻藻种。一般以 20m2 30m2为宜，室内保持清洁卫生，严格消毒。要求采 光好，并配备人工光源和空调等保温设施，还应配显微镜、冰箱、藻种培养架及常用仪器、药品试剂等。 4.2 清洗消毒间 用于清洗和消毒培养容器与器材。一般以 15m2 20m2为宜，配有清洗水槽、消毒池、恒温烘箱、电 炉或炉灶等。 4.3 扩种室（棚） 用于对一级藻 种进一步扩种培养。要求采光通风良好，配备遮光帘
6、或遮阳布等条件设施，以调节光 照。按照 100m2三级池配备 80个 120个白塑料桶或 150个 200个尼龙袋。 4.4 海水消毒池 用于消毒经沉淀、沙滤处理后的海水。海水消毒池体积与饵料培养池体积比在 1： 5 1： 10。 4.5 三级生产性培养池 用于提供水产苗种生产及养殖所需要的海水微藻饵料培养。三级饵料培养池的规格以 2种 3种为 宜，小的容积为 10m3 15m3、大的容积为 20m3 35m3，形状一般为长方形，培养池深度 80cm 100cm饵料 培养水体与育苗水体的比例以 1:1.5 1:2为宜。 4.6 水质条件 水质应符合 GB 11607和 NY 5362要求。 5
7、 藻种选择和培养液配制 5.1 藻种选择 要求藻种繁殖率高、增殖速度快、耐高温。用于贝类育苗生产的藻种，一般可选择等鞭金藻、牟 氏角毛藻、亚心形扁藻、 三角褐指藻 等种类。 5.2 培养液配制 培养液配制方法见 表 A.1。 5.3 最适培养条件 DB3302/T 1622018 3 最适培养条件见 表 A.2。 6 保种与培养 6.1 培养工具、设施与海水的消毒 6.1.1 工具消毒及方法 6.1.1.1 煮沸消毒 适于充气管、玻璃器皿等小型容器和工具的消毒，消毒时在水中加 1%碳酸钠效果更好。充气管、散 气石煮沸消毒 10min 15min；锥形瓶内 应加少量淡水，置电炉上加热煮沸 10m
8、in 15min，大型锥形瓶消 毒应在瓶口上放一玻璃漏斗或培养皿，消毒完毕后用消毒的纸或纱布包扎瓶口。 6.1.1.2 酒精消毒 适于中小型容器和工具的消毒，用纱布蘸 70%酒精在容器、工具的表面涂抹 5min后，用消毒水冲洗 2 次。 6.1.1.3 漂白粉消毒 将有效氯含量为 28% 32%的漂白粉配置成 0.02% 0.04%水溶液，把容器、工具在溶液中浸泡 0.5h， 再用消毒水冲洗 3次 4次。 6.1.1.4 高锰酸钾消毒 将容器、工具等浸泡在新配的 500 10 6g/ml高锰酸钾溶液中 5min，然后用消毒水冲洗 2次 3次。 对 玻璃钢水槽、水泥池等消毒，可用 0.05%浓度
9、的高锰酸钾溶液泼在池壁上，泼洒两遍后刷洗池底， 10min 后再用消毒水冲洗干净。 6.1.2 海水消毒 6.1.2.1 一级保种用水消毒 洁净砂滤海水经过脱脂棉过滤、加热煮沸，冷却后使用。 6.1.2.2 二级扩种用水消毒 洁净砂滤海水经过煮沸消毒或次氯酸钠消毒后使用。 6.1.2.3 三级生产性培养用水消毒 用 30mg/kg 50mg/kg漂白粉消毒 6h 8h，以漂白粉用量 1/3的硫代硫酸钠中和余氯，曝气 2h后使用。 6.2 保种 按照 SC/T 2047的规定执行。 6.3 一级培养 根据不同培养藻种，适时加入配制好的培养液，参照图 A.2调节温度、光照等培养条件。 6.4 二级
10、培养 DB3302/T 1622018 4 6.4.1 接种时间 接种时间为上午 7点 9点，最好为晴天。 6.4.2 培养方法 白塑料桶洗净 后 ，倒入消毒过的洁净过滤海水至桶的 2/3 以上。接好消毒过的充气管和气石，按 比例加入培养液，接入藻种，桶口盖上尼龙薄膜，进行通气培养。 6.5 三级生产性培养 6.5.1 培养条件 根据藻种要求调控培育室温，自然光照结合人工光源调节 光照度。按 2m2布一 个充气头，保持培养 藻液均匀悬浮 。 6.5.2 培养方式和方法 开放式，一次性培养或半连续培养。水温低于 25时，采用 连续培养方法； 水温高于 25时，采用 一次性培养的方法 。 6.5.
11、3 接种 把二级扩种培养的藻液接入生产性培养池的培养液中。外观藻液颜色正常、无大量沉淀和明显附壁 现象。一般加入藻种与培养液的比例为 1:3 1:6。 接种时间为上午 7点 9点。金藻、扁藻等细胞在水层中分布均匀，接种温差不大，光照适合，接种 时间可放宽。 7 日常管理 7.1 观察与处理 每天上、下午定时观察藻液颜色、运动情况，有无附壁、沉淀、菌膜和敌害生物现象。生长良好时， 等鞭金藻呈金褐色， 牟氏角毛藻为金黄色， 亚心形扁藻为鲜绿色，三角褐指藻为深褐色；有浮游能力种 类上浮活波呈烟雾状，无浮游能力种类均匀悬浮于水中。如有异常立即清除，及 时接种培养补充空缺的 藻种。遇高温、强日照，应及时
12、在培养室顶加盖布帘或聚乙稀彩布条遮光降温。 定期进行显微镜检查，从藻细胞的形态、悬浮、污染等了解其生长情况。 7.2 调节光照、温度和 pH值 在保种室和二、三级培养场所，应根据藻类生长繁殖要求的适宜光照范围进行调节。利用控温设施， 将室温调控至其生长的适宜温度范围。当 pH值超出适宜范围，可用 1mol/L HCl溶液或 NaOH溶液来调节培 养液的 pH值。 7.3 预防污染措施 定期进行室内消毒，禁止非生产人员进入培养室。三级培养池充气要适度，防止水花飞溅造成池 间污染。 7.4 记录 DB3302/T 1622018 5 对每次 检查、接种和培养液添加以及日常操作和观察结果进行记录。
13、8 收获与保存 8.1 收获 微藻经各阶段培养，达到苗种及养殖生产所要求的藻种浓度和质量即可收获投喂。 8.2 保存 培养出的海洋微藻液暂时不用时，可利用离心、浓缩设备制成藻膏，放入温度 -18的冷冻间冷 冻保存，以备使用。 9 标准化模式图 海洋微藻饵料三级培养的标准化模式图见附录 B。 DB3302/T 1622018 6 A A 附 录 A （规范性附录） 常用海洋微藻饵料培养液配方和最适培养条件 表 A.1 常用海洋微藻饵料培养液配方和最适培养条件 培养液名称 培养液配方 成 份 用 量 等鞭金藻培养液 硝 酸钠（ NaNO3） 60 g 磷酸二氢钾（ KH2PO4） 5 g 柠檬酸铁
14、（ FeC6H5O7） 0.5 g 维生素 B1 100 mg 维生素 B12 1 mg 消毒海水 1000 L 牟氏角毛藻培养液 硝酸钠（ NaNO3） 60 g 磷酸二氢钾（ KH2PO4） 4 g 硅酸钠（ Na2SiO3） 5 g 柠檬酸铁（ FeC6H5O7） 0.5 g 消毒海水 1000 L 亚心形扁藻培养液 硝酸钠（ NaNO3） 60 g 磷酸二氢钾（ KH2PO4） 4 g 尿素（ NH2CONH2） 18 g 柠檬酸铁（ FeC6H5O7） 0.5 g 消毒海水 1000 L 三角褐指藻培养液 硝酸钠（ NaNO3） 60 g 磷酸二氢钾（ KH2PO4） 4 g 硅酸钠
15、（ Na2SiO3） 4.5 g 柠檬酸铁（ FeC6H5O7） 0.5 g 消毒海水 1000 L 表 A.2 常用海洋微藻饵料最适培养条件 种类 温度（） 盐度 pH值 光照（ lx） 等鞭金藻 20 25 15 30 7.5 8.5 6 000 9 000 牟氏角毛藻 25 30 15 25 8.0 8.9 10 000 15 000 亚心形扁藻 20 28 30 40 7.5 8.5 5 000 10 000 三角褐指藻 10 20 25 32 7.5 8.5 3 000 5 000 DB3302/T 1622018 7 B 附 录 B （规范性附录） 海洋微藻饵料三级培养的标准化模式
16、图 月 3 4 5 6 7 8 9 10 旬 上 中 下 上 中 下 上 中 下 上 中 下 上 中 下 上 中 下 上 中 下 上 中 下 海洋微藻饵料的三级培养 主 要 生 产 技 术 措 施 1、用水消毒： 洁净砂滤海水经过脱脂棉 过滤、加热煮沸，冷却后使用。 2、 培养液配制方法见附录 A.1。 3、培养方法：根据不同培养藻种，适时 加入配制好的培养液，参照附录 A.2调节 温度、光照等培养条件。 1、 用水消毒：洁净砂滤海水经过煮沸消毒或次氯酸钠消毒 后使用。 2、 接种时间：接种时间为上午 7点 9点，最好为晴天。 3、 培养方法：白塑料桶洗净后，倒入消毒过的洁净过滤海 水至桶的
17、2/ 3 以上。接好消毒过的充气管和气石，按比例加 入培养液，接入藻种，桶口盖上尼龙薄膜，进行通气培养。 1、 用水消 毒：用 30 g/m3 50g/m3漂白粉消毒 6h 8h，以漂白粉用 量 1/3的硫代硫酸钠中和余氯，曝气 2h后使用。 2、 培养条件：根据藻种要求调控培育室温，自然光照结合人工光源 调节光照。按 2m2布一个充气头，保持培养藻液均匀悬浮。 3、 培养方式和方法：开放式，一次性培养或半连续培养。水温低于 25 时，采用 连续培养方法； 水温高于 25 时，采用一次性培养的方 法 。 4、 接种：把二级扩种培养的藻液接入生产性培养池的培养液中。一 般加入藻种与培养液的比例为 1:3 1:6。接种时间为上午 7点 9点。 _ 一级培养 二级培养 三级生产性培养
