1、 icsICS 97.195 Y 50 宣城市地方标准 DB3418 DB3418/T 0072019 毛笔笔锋霉变的测试方法 Test method for mould of writing brush 2019 -03-20发布 2019- 04-20实施 宣城市市场监督管理局 发布 DB3418/T 0072019 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省文房四宝标准化技术委员会提出并归口。 本标准主要起草单位：宣城市产品质量监督检验所。 本标准主要起草人：洪润、吴成、柳叶、周万鹏、童伟。 I DB3418/T 0072019 毛笔笔锋霉变的测试方
2、法 1 范围 本标准规定了毛笔笔锋霉变的检测方法。 本标准适用于毛笔及工艺类似的毛笔笔锋霉变的检测，不适用其他笔类。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 1.1 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写 GB 4789.2 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 3 设备和材料 3.1 培养箱：28 1 。 3.2 电子天平：精确度0.1 g。 3.3 无菌锥形瓶：容量500 mL。 3.4 无菌吸管：1 mL、10 mL。 3
3、.5 无菌试管：18 mmnull180 mm。 3.6 旋涡混合器。 3.7 无菌平皿：直径90 mm。 3.8 恒温水浴箱：46 1 。 3.9 显微镜：10倍100倍。 3.10 移液枪及移液吸管：100 L1 000 L、1 000 L10 000 L。 4 培养基和试剂 4.1 蒸馏水。 4.2 生理盐水：见附录A.1。 4.3 马铃薯葡萄糖琼脂：见附录A.2。 4.4 孟加拉红琼脂：见附录A.3。 4.5 磷酸盐缓冲液：见附录A.4。 5 检验程序 霉菌计数法检验程序见图1。 1 DB3418/T 0072019 图 1 霉菌平板计数法的检验程序 6 操作步骤 6.1 样品的稀释
4、6.1.1 用无菌剪刀剪取至少3支待测毛笔笔锋，要求剪取全部毛笔笔锋进行混匀，称取样品1 g，精确至 0.1 g，加入9 mL无菌稀释液(生理盐水或磷酸盐缓冲液)，在旋涡混合器中充分混合1 min2 min，制成1： 10的样品匀液。 6.1.2 用移液枪吸取1 mL 1：10样品匀液注入含有9 mL无菌稀释液的试管中，在旋涡混合器上混匀，此 液为1：100的样品匀液。 6.1.3 按6.1.2操作步骤，制备10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1支1 mL无菌吸管。 6.1.4 选择2个3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1 mL样 品匀液于2个
5、无菌平皿内。同时分别取1 mL无菌稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。 6.1.5 及时将冷却至46 的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂(可放置于46 土1 恒温水浴箱中保 温)倾注平皿中，倾注体积为20 mL25 mL，同时均匀转动平皿使其混合均匀。将其放置于水平台面待 培养基完全凝固。 6.2 培养 培养基凝固后，正置平板，放置于28 士1 培养箱中培养，观察并记录培养至第120 h的结果。 6.3 霉菌菌落计数 用肉眼或放大镜观察，记录稀释倍数和相应的霉菌菌落数。以菌落形成单位(colony-forming units， CFU)表示。 2 DB3418/T 0072019 选取菌落数在10
6、 CFU150 CFU的平板，根据菌落形态计数霉菌。霉菌蔓延生长覆盖整个平板记录 为菌落蔓延。 7 结果与报告 7.1 结果 7.1.1 计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数。 7.1.2 若有两个稀释度平板上菌落数均在10 CFU150 CFU之间，则按照GB 4789.2的相应规定进行计算。 7.1.3 若所有平板上菌落数均大于150 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不 可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 7.1.4 若所有平板上菌落数均小于10 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 7.1.5 若所有稀释度
7、平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。 7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在10 CFU150 CFU之间，其中一部分小于10 CFU或大于150 CFU 时，则以最接近10 CFU或150 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 7.2 报告 7.2.1 菌落数按“四舍五入”原则修约。菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10100 之间时，采用两位有效数字报告。 7.2.2 菌落数大于或等于100时，前第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代 替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字。 7
8、.2.3 若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。 7.2.4 称重取样以CFU/g 为单位报告。 3 DB3418/T 0072019 附 录 A （规范性附录） 培养基和试剂 A.1 生理盐水 A.1.1 成分 氯化钠 8.5 g 蒸馏水 1 000 mL A.1.2 制法 氯化钠加入 1 000 mL 蒸馏水中，搅拌至完全溶解，分装后，121 灭菌 15 min，备用。 A.2 马铃薯葡萄糖琼脂 A.2.1 成分 马铃薯(去皮切块) 300 g 葡萄糖 20.0 g 琼脂 20.0 g 氯霉素 0.1 g 蒸馏水 1 000 mL A.2.2 制法 将马铃薯去皮切块，加 1 00
9、0 mL 蒸馏水，煮沸 10 min20 min。用纱布过滤，补加蒸馏水至 1 000 mL。加入葡萄糖和琼脂，加热溶解，分装后，121 灭菌 15 min，备用。 A.3 孟加拉红琼脂 A.3.1 成分 蛋白胨 5.0 g 葡萄糖 10.0 g 磷酸二氢钾 1.0 g 硫酸镁(无水) 0.5 g 琼脂 20.0 g 孟加拉红 0.033 g 氯霉素 0.1 g 蒸馏水 1 000 mL A.3.1 制法 上述各成分加入蒸馏水中，加热溶解，补足蒸馏水至 1 000 mL，分装后，121 灭菌 15 min，避 光保存备用。 A.4 磷酸盐缓冲液 A.4.1 成分 磷酸二氢钾 34.0 g 4 DB3418/T 0072019 蒸馏水 500 mL A.4.2 制法 贮存液：称取 34.0 g 的磷酸二氢钾溶于 500 mL 蒸馏水中，用大约 175 mL 的 1 mol/L 氢氧化钠 溶液调节 pH 至 7.2土0.1，用蒸馏水稀释至 1 000 mL 后贮存于冰箱。 稀释液：取贮存液 1.25 mL，用蒸馏水稀释至 1 000 mL，分装于适宜容器中，121 高压灭菌 15 min。 _ 5
