1、GB 982688 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用 -淀粉酶测定小麦粉破损淀粉值的原理使用的试剂、仪器、分析的步骤以及结果计算。 本标准适用于小麦粉破损淀粉值的测定。 2 方法原理 小麦粉中破损淀粉对 -淀粉酶的敏感性大大高于未破损淀粉，在常温下能被 -淀粉酶降解生成糊精和一定量的还原糖。利用此特性，在规定的条件下，用 -淀粉酶降解小麦粉中破损淀粉，再用铁氰化钾法测定其还原糖量，并根据法兰德的经验公式计算小麦粉中的破损淀粉值。 3 试剂 以下试剂未经标明的均为分析纯试剂，水为蒸馏水。 3.1 缓冲溶液 溶解4.1g无水乙酸钠于水中，加入3mL冰乙酸，再用水稀释至1000mL，pH 值应
2、为4.70.1。 3.2 提取溶液 将20g氯化钠及0.2g乙酸钙溶于水中，再稀释至1000mL。 3.3 -淀粉酶液 称取活性相当于150001500A的 -淀粉酶制剂溶于500mL提取液中，再加入500mL缓冲液， -淀粉酶活性测定见附录A（补充件） -淀粉酶活性测定。此溶液用时现配。 3.4 10（ V/V）硫酸溶液。 3.5 12钨酸钠溶液。 3.6 0.1M碱性铁氰化钾溶液。 称取32.9g干燥纯净的铁氰化钾与44.0g无水碳酸钠溶于1000mL水中，贮于棕色瓶避光保存。 3.7 乙酸盐溶液 70g氯化钾和40g硫酸锌溶于水中，加入200mL冰乙酸，再用水稀释至1000mL。 3.8
3、 10碘化钾溶液。 3.9 1淀粉溶液。 3.10 0.1M硫代硫酸钠溶液 页码，1/9GB 9826882006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR982600A.htm 称取24.82g硫代硫酸钠（含5个结晶水）和3.8g四硼酸钠溶于 1000mL水中，贮于棕色瓶避光保存，一星期后按GB 5490粮食、油料和植物油脂检验 一般规则附录B规定方法标定其浓度。 3.11 酸洗石英砂。 4 仪器和用具 4.1 玻璃试管： 25220mm。 4.2 量筒：50mL；25mL。 4.3 恒温水浴：可控温300.1。 4.4 秒表。 4.5 加液器或移液管：2mL；1
4、0mL。 4.6 移液管：5mL。 4.7 玻璃漏斗及中速滤纸。 4.8 电炉。 4.9 锥形瓶：100mL。 4.10 滴定管：10mL。 4.11 天平：感量0.01g；0.1mg。 4.12 pH计或精密pH试纸：可测pH4.70.1。 5 分析步骤 5.1 称样量 一般小麦粉均假定其水分含量为14.0，淀粉含量为6872， 称样量为1.000.01g。如果淀粉含量过高或过低时，则称样量应按式（1）计算： 5.2 酶解 称取5.1规定量的试样于玻璃试管中，加入1小勺酸洗石英砂，混匀并将试样摇松倾斜于试管底部，准确量取46mL已预热至30的 -淀粉酶液，先将少许 -淀粉酶液加入试样中并尽量
5、摇匀，立即计时，再加入其 余 -淀粉酶液，加盖试管并上下颠倒摇动约30次使试样均匀悬浮，迅速将试管浸入30水浴中，然后每隔10min取出试管，上下颠倒摇动10次使试样重新均匀悬浮，恒温酶解刚好60min时，取出试管，立即加入2mL10硫酸溶液，充分混匀后，再加入2mL12钨酸钠溶液，摇匀并放置约2min后，用中速滤纸过滤。充去最初几滴，收集滤液于称样量（g）=70/（95- P-M）（1）式中： P100g试样中蛋白质的克数（含氮量5.7）；M100g试样中水分的克数。页码，2/9GB 9826882006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR982600A.h
6、tm干净锥形瓶中，此滤液即为试样测定液。 另取一支试管不加小麦粉试样，同时同上操作，所得滤液即为空白对照液。 5.3 测定还原糖 准确吸取5mL试样液于试管中，再准确加入10mL0.1M碱性铁氰化钾溶液，混合后将试管浸入剧烈沸腾的水中（可将试管置于铁丝笼架放入铝锅煮沸的水中，每次可同时作多个样品 的测定），继续加热待水再沸腾后开始计时，准确反应20min后，取出试管立即置流水冷却。冷却后将试管中溶液倒入 锥形瓶中，并用25ml乙酸盐溶液分三次洗涤试管一并倒入锥形瓶内，再加入10mL10碘化钾溶液。然后用0.1M 硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色，再加入约1mL1淀粉液，继续滴定至溶液蓝色消失（半分钟
7、内溶液不返蓝色），记录用去硫代硫酸钠溶液的体积为 V1（mL）。 吸取空白对照液5mL代替试样液，同上操作，记录用去硫代硫酸钠溶液的体积为 V2（mL）。 6 结果计算 6.1 氧化5mL样品液（相当于0.1g小麦粉样品）中还原糖所需0.1M铁氰化钾体积 V按式（2）计算： 6.2 小麦粉麦芽糖值的确定 根据式（2）计算所得 V值在表1中用插入法查出相应的100g小麦粉中含有麦芽糖的克数，即为该样品的麦芽糖值 L。 表 1 小麦破损淀粉的麦芽糖值换算表 V=（ V2-V1）（ c/0.1）（2）式中： V氧化试样液中还原糖所需的0.1M铁氰化钾液的体积，mL；V1滴定试样液用去硫代硫酸钠的体积
8、，mL；V2滴定空白液用去硫代硫酸钠的体积，mL；c硫代硫酸钠的摩尔浓度，M；0.1换算成0.1M铁氰化钾溶液体积的系数。被还原的 0.1M 铁氰化钾 mL 每100g面 粉麦芽糖值 g 9.9 9.8 9.7 9.6 9.5 9.4 9.3 6.18 6.08 5.98 5.88 5.78 5.68 5.58 页码，3/9GB 9826882006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR982600A.htm9.2 9.1 9.0 8.9 8.8 8.7 8.6 8.5 8.4 8.3 8.2 8.1 8.0 7.9 7.8 7.7 7.6 7.5 7.4 7.
9、3 7.2 7.1 7.0 6.9 6.8 6.7 6.6 6.5 6.4 6.3 6.2 6.1 6.0 5.9 5.8 5.7 5.6 5.5 5.4 5.3 5.2 5.1 5.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 4.4 4.3 4.2 4.1 4.0 5.50 5.42 5.34 5.27 5.19 5.12 5.05 4.99 4.92 4.85 4.78 4.72 4.65 4.58 4.51 4.45 4.38 4.31 4.25 4.18 4.12 4.06 3.98 3.92 3.85 3.79 3.73 3.67 3.60 3.53 3.47 3.41 3.34 3
10、.28 3.22 3.15 3.08 3.02 2.95 2.88 2.82 2.76 2.70 2.64 2.57 2.51 2.44 2.37 2.31 2.25 2.18 2.13 2.07 页码，4/9GB 9826882006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR982600A.htm6.3 小麦粉破损淀粉值（ P）按式（3）计算： 式中： L小麦粉麦芽糖值。 7 结果允许差 两次测定结果之差不得超过平均值的5，测定结果保留小数点后一位。 附 录 A 3.9 3.8 3.7 3.6 3.5 3.4 3.3 3.2 3.1 3.0 2.9 2.8 2.7
11、 2.6 2.5 2.4 2.3 2.2 2.1 2.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 2.01 1.95 1.88 1.82 1.76 1.71 1.66 1.61 1.56 1.51 1.45 1.40 1.35 1.30 1.26 1.21 1.16 1.11 1.06 1.01 0.96 0.90 0.85 0.80 0.76 0.71 0.65 0.60 0.56 0.51 0.46 0.41 0.36 0.31 0.25 0.20 0.15 0.10 0.50P
12、=（5 L-3.5）6（3）页码，5/9GB 9826882006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR982600A.htm-淀粉酶活性的测定 （补充件） A1 主题内容和适用范围 本补充件规定了用比色法测定 -淀粉酶活性的方法。 本补充件适用于各种来源的 -淀粉酶制剂及谷类产品的 - 淀粉酶活性的测定。 A2 方法原理 -淀粉酶能降解 -限制糊精，经过不同的反应时间后，反应混合物与碘的显色强度随时间增加而降低，用测定这种显色强度随时间降低的速度来反映 -淀粉酶的活性。 A3 试剂 以下试剂未经标明的均为分析纯，水为蒸馏水。 A3.1 0.2氯化钙溶液。 A3
13、.2 碘贮备液 溶解11.0g碘化钾于少量水中，加入5.5g结晶碘，搅拌至碘完全溶解，再稀释至250mL，置棕色瓶中贮于暗处。此液可保存一个月。 A3.3 碘稀释液 溶解40.0g碘化钾于水中，加入4.0mL碘贮备液，用水稀释至1000mL，用时现配。 A3.4 缓冲溶液 溶解164g无水乙酸钠或272g三水乙酸钠（CH3COONa3H2O）于水中，加入120mL冰乙酸，用水稀释至1000mL。 A3.5 可溶性淀粉。 A3.6 -淀粉酶液 取10g具有酶活性的新鲜黄豆粉（粗细度为通过1.5mm孔筛的筛下物）于烧杯中，加入85mL水和15mL 0.05M硫酸溶液，充分搅匀，静置15min后 ，
14、用中速滤纸过滤，该滤液用于制备 -限制糊精。A3.7 0.05M硫酸溶液。 A3.8 -限制糊精 称取5.00g（以干态计）可溶性淀粉于小烧杯中，加入约20mL水，搅拌使成悬浮液，然后将悬浮液边搅拌边缓慢倒入盛有约100mL沸腾水的高型烧杯中，并用洗瓶将小烧杯中淀粉全部转移至高型烧杯，继续搅拌并加热使缓慢沸腾2min，然后用表面皿盖上烧杯口，取出用流水冷却，再加入25mL缓冲溶液及50mL -淀粉酶液，在室温下，放置24h后，加入一匙浮石粉，在10min内缓慢加热至沸，保持沸腾5min后，取出流水冷却，最后用水定容至250mL，摇匀、过页码，6/9GB 9826882006-3-29file:
15、/C:InetpubwwwrootdatagbrR982600A.htm滤，滤液中加几滴甲苯，在25以下的贮存5天，此溶液的pH须在4.70.1。 A4 仪器和用具 A4.1 玻璃试管。 A4.2 高型烧杯：250mL。 A4.3 容量瓶：250mL；100mL。 A4.4 玻璃漏斗： 6cm。 A4.5 表面皿： 7cm。 A4.6 移液管：2mL；5mL；15mL。 A4.7 量筒：25mL；50mL。 A4.8 加液器或移液管：10mL。 A4.9 电炉：1000W。 A4.10 恒温水浴：可控温300.1及200.5。 A4.11 秒表。 A4.12 实验磨粉机。 A4.13 筛子：孔
16、径为1.0mm及0.8mm。 A4.14 pH计或精密pH试纸：可测pH4.70.1 A4.15 分光光度计。 A5 分析步骤 A5.1 -淀粉酶溶液的配制 A5.1.1 酶制剂 -淀粉酶液的配制 称取 -淀粉酶制剂48mg，用0.2氯化钙溶液溶解并稀释至100mL。根据该溶液酶活性的大小再 用0.2氯化钙稀释至适合于测定 活性的溶液，稀释后的溶液应使3560的限制糊精在1540min 内被降解，即最后测得的吸光度值应为底物校准时吸光度值的4065。 A5.1.2 麦芽粉及其他产品 -淀粉酶液的配制 测定麦芽粉可称样100g，如测定其他产品，则根据酶活性的大小拟定称样量，均按下述步骤提取酶液。
17、 将预先在30水浴中恒温10min以上的0.2氯化钙溶液1000.5mL 加入试样中，加塞振页码，7/9GB 9826882006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR982600A.htm摇使充分混合，立即置于30水浴中，每隔15min取出试管，上下颠倒混合10次，再浸入水浴（振摇次数与程度对结果有影响），恒温提取60min后取出过滤（不要 振摇），此滤液即为酶提取液。 A5.2 底物的校准 A5.2.1 混合5mL -限制糊精及15mL0.2氯化钙溶液于烧杯中。 A5.2.2 在试管中先加入10mL稀释碘液，再加入A5.2.1的混合液2mL，然后用适量的水稀
18、释（一般稀释水量为2040mL之间），混合后在20下用1cm比色杯在波长 575nm下测其吸光度。 A5.2.3 调整原稀释水量再按A5.2.2操作，反复多次直至测得的吸光度值在0.550.6之间，记录此时稀释水量 V（mL），即为该底物的校正水量。 A5.2.4 在另一支已加入10mL稀释碘液的试管中，加入2mL0.2 氯化钙液代替混合液，同A5.2.2操作，作为A5.2.2测定吸光度时的空白对照。 A5.3 -淀粉酶活性测定 A5.3.1 将待用 -限制糊精预热至30。 A5.3.2 吸取A5.1稀释后的酶液15mL于试管中，置30水浴恒温510min。 A5.3.3 用速流移液管吸取5m
19、L已预热的 -限制糊精迅速加入含15mL酶液的试管中，在加入糊精的同时立即用秒表计时，然后分别在30恒温10min和30min时吸 取此混合液，按下述操作。 A5.3.4 吸取2mL上述混合液立即加入预先加入10mL稀释碘液的试管中，再加入A5.2.3测得的水的体积 V（mL）（即校正水量），混匀后在20下恒温，并用1cm比色杯在波长575nm下测定吸光度（如测定一系列样品，可在所有样品均完成显色后再一起测定吸光度，但最长间隔时间不得超过1h）。 A5.3.5 用2mL0.2氯化钙溶液代替混合液，同A5.3.4操作，作为A5.3.4测定吸光度时的空白对照。 A6 结果计算 -淀粉酶活性（ A）
20、用水解 -限制糊精的速度常数表示，按式（ A1）计算： A=500K f/G 式中： A -淀粉酶活性；G称取酶制剂的毫克数或其他产品的克数；f指称取酶量溶于100mL氯化钙后再稀释的倍数（例称取5.0mg 的酶制剂溶于10后，再吸取该液2mL稀释至100mL，此时 f=100/2=50）；500换算成实用值的因素；K 水解 -限制糊精的速度常数，按式（A2）计算：K=（1g Et1-1gEt2）/（ t2-t1）（A2）页码，8/9GB 9826882006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR982600A.htmA7 结果表示及允许差 A7.1 测定结果的
21、活度单位在50以内的，取小数点后第1位；测得结果活度单位在50500，取至个位；活度单位在5005000时，取至十位；活度单位在500050000时，取至百位。 A7.2 两次测定结果之差不得超过平均值的10，如平均值低于2个单位，则不得超过0.2个单位。 式中：lg Et1在10min时测得的反应混合物的吸光度的对数；lgEt2在30min时测得的反应混合物的吸光度的对数；t1A5.3.3中第一次吸出反应混合物的时间，min；t2A5.3.3中第二次吸出反应混合物的时间，min。页码，9/9GB 9826882006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR982600A.htm
