1、 1 畜禽羽（毛）中氟虫腈及其代谢物残留量的 测定 液相色谱 -串联质谱法 Determination of residues of fipronil and its metabolites in animal feather (hair) HPLC-MS/MS method ICS 67.080.20 B 31 DB36 江西省地方标准 DB36/T 1399-2021 2021 - 04 - 23 发布 2021 - 11 - 01 实施 江西省市场监督管理局 发 布 DB36/T 1399-2021 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 原理 .
2、1 4 试剂和 材料 . 1 5 仪器和设备 . 2 6 试样制备与保存 . 3 7 测定步骤 . 3 8 结果与计算 . 5 9 方法灵敏度、准确度和精密度 .5 附录 A（资料性） 氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜标准溶液定量离子色谱图 . 6 DB36/T 1399-2021 II 前 言 本 文件是 按照 GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 的 规 定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由江西省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所，
3、 南昌市农业科学院 。 本 文件 主要起草人：徐俊， 费丹， 赖博文，胡丽芳，周瑶敏，谢敏，张金艳， 周军，侯玉洁， 张标 金， 姚瑶，郑小明 ， 闵佳玲。 DB36/T 1399-2021 1 畜禽羽（毛）中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 液相色谱 -串联质 谱法 1 范围 本文件规定了畜禽羽（毛）中氟虫腈及其代谢物残留量的液相色谱 -串联质谱检测方法。 本 文件 适用于 猪、牛、羊、鸡畜禽羽（毛） 中氟虫腈及其代谢物的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最
4、新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样经乙腈和水混合震荡提取，乙二胺 -N-丙基硅烷（ PSA）和十八烷基硅烷（ C18）分散净化，液 相色谱 -串联质谱测定，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 乙腈：色谱纯。 4.1.2 甲醇：色谱纯。 4.1.3 甲酸：色谱纯。 4.1.4 乙酸铵：色谱纯。 4.1.5 氯化钠：分析纯， 140 烘烤 4 h。 4.2 溶液配制 4.2.1 5 mmol/L 乙酸铵溶液：称取 0.38 g 乙酸
5、铵（ 4.1.4） ， 加水溶解 ，转移 至 1000 mL 容量瓶中，定 容至刻度，混匀 。 4.2.2 5 mmol/L 乙酸铵甲醇溶液：称取 0.38 g 乙酸铵（ 4.1.4） ， 加甲醇溶解 ，转移 至 1000 mL 容量瓶 中，用甲醇定容至刻度，混匀 。 4.2.3 5 %吐温 80： 取 5 mL 吐温 80， 加水 溶解，转移 至 100 mL 容量瓶中，定容至刻度，混匀。 4.2.4 1 %SDS： 称取 1 g十二烷基磺酸钠，加水 溶解，转移 至 100 mL容量瓶中，定容至刻度，混匀。 DB36/T 1399-2021 2 4.3 标准品 氟虫腈 （ CAS： 2056
6、50-69-7） 、 氟甲腈 （ CAS： 205650-65-3） 、 氟虫腈砜 （ CAS： 120068-36-2） 、 氟虫腈亚砜 （ CAS： 120067-83-6） ，纯度 均 98.0%。 4.4 标准 溶液 的 配制 4.4.1 标准储备液（ 1.0 mg/mL）：分别准确称取氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜标准品 各 10 mg（精确至 0.1 mg） ，分别于 10 mL 容量瓶中 ，用甲醇分别配制成 1.0 mg/mL 的标准储备液， 于 -18 下保存， 有效期 6 个月 。 4.4.2 标准中间液（ 10.0 mg/L）： 用移液管吸 取 1.0 mL 标准储备
7、液（ 4.4.1）于 100 mL 容量瓶中，用 甲醇分别稀释成质量浓度为 10.0 mg/L 的标准中间液，于 4 下保存，有效期 3 个月。 4.4.3 标准工作液（ 1.0 mg/L）： 用移液管吸取 上述 标准 中间 液（ 4.4.2） 各 1.0 mL 于 10 mL 容量瓶中， 用甲醇分别稀释成质量浓度为 1.0 mg/L 的标准 工作 液， 临用现配。 4.5 材料 4.5.1 乙二胺 -N-丙基硅烷（ PSA） ， 粒径 40 m-60 m。 4.5.2 十八烷基硅烷（ C18） ， 粒径 40 m-60 m。 4.5.3 十二烷 基磺酸钠（ SDS）。 4.5.4 微孔滤膜：
8、有机相， 0.22 m。 4.5.5 吐温 80。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱 -串联质谱仪（配有电喷雾离子源）。 5.2 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。 5.3 高速离心机：转速 5000 r/min。 5.4 涡旋仪。 5.5 恒温烘箱。 5.6 水浴恒温振荡器 。 5.7 氮吹仪。 5.8 超声波清洗器。 6 试样制备与保存 6.1 试样制备 取适量代表性试样，用 5 %吐温 80（ 4.2.3） 或 1 % SDS（ 4.2.4） 清洗羽（毛） 30 min，然后用水冲 洗干净， 再用试纸吸干水， 于 45 烘箱中烘 1 h 取出， 剪碎成 1 mm-2 mm。
9、 6.2 试样保存 常温下放干燥器中保存。 7 测定步骤 DB36/T 1399-2021 3 7.1 提取 准确称取 0.2 g（精确至 0.1 mg）上述处理的羽（毛）样品于 15 mL 具塞离心管中，加入 3 mL 乙 腈 （ 4.1.1） 和 3 mL 水混合，涡旋 1 min， 45 水浴震荡 4 h，超声 10 min， 加入 4 g 氯化钠， 涡旋 1 min， 在 5000 r/min 下离心 5 min， 转移 上清液于 另一离心管 中， 离心后的残渣 加入 3 mL 乙腈和 3 mL 水重复 提取一次，合并上清液 ，混匀 。 7.2 净化 将 7.1所得合并 上清液 加入
10、50 mg PSA和 50 mg C18吸附剂， 涡旋 1 min，然后在 5000 r/min下离心 5 min， 收集 上清液 至离心管中 并在 45条件下氮气吹 至 近干，残渣用 1 mL水 溶解， 过 0.22 m滤膜， 供 测 定。 7.3 色谱 质谱参考 条件 7.3.1 液相色谱 参考 条件 如下： a）色谱柱： C18（ 100 mm2.1 mm， 1.8 m） ， 或性能相当 者 。 b）流动相： 5 mmol/L乙酸铵溶液 （ A相）， 5 mmol/L乙酸铵甲醇溶液（ B相）。 c） 流速： 0.3 mL/min。 d）柱温： 35 。 e）进样量： 5.0 L。 f）
11、流动相和梯度洗脱条件见表 1。 表 1 梯度洗脱程 序 时间， min 流动相 A， % 流动相 B， % 0.0 30 70 1.5 30 70 3.0 0 100 4.0 0 100 4.5 30 70 7.0 30 70 7.3.2 质谱 参考 条件 如下： a）扫描方式 ：负离子扫描（ ESI -）； b）毛细管电压： 3000 v； c）干燥气温度： 150 ； d）干燥气流量： 15 L/min； e）雾化气压力： 30 psi； f）鞘气温度： 300 ； g）鞘气流量： 12 L/min； h）检测方式：多反应监测（ MRM），监测条件见表 2。 DB36/T 1399-202
12、1 4 表 2 氟虫腈 及其代谢物质谱参数 待测物名称 母离子 ， m/z 子离子 ， m/z 碎裂电压， V 碰撞能， eV 氟虫腈 434.9 329.5* 380 10 249.6 380 30 氟甲腈 387.0 281.7* 380 35 350.8 380 35 氟虫腈砜 451.0 414.9* 380 20 281.8 380 15 氟虫腈亚砜 419.0 261.9* 380 35 382.8 380 20 注： *为定量离子对。 7.4 标准工作曲线 吸取一定量的标准中间溶液，用水逐级稀释成质量浓度 为 0.1 g/L、 0.2 g/L、 0.5 g/L、 1.0 g/L、
13、 5.0 g/L、 10.0 g/L的标准系列工作溶液，供液相色谱 -串联质谱仪测定。以目标物定量离子峰面积为纵 坐标、标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。 7.5 定性及定量 7.5.1 保留时间 被测试样中目标物色谱峰保留时间与相应标准色谱峰保留时间相比较，相对误差应在 2.5 %之内。 7.5.2 定量离子、定性离子及子离子丰度比 在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景 后的样品质谱中，目标物的质谱定量和定性离子均 出现，而且同一检测批次，样品中目标物的定性离子 和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过表 3
14、规定的范围，则可判 定为样品中存在对应的待测物。 表 3 定性确证时相对离子丰度最大允许偏差 相对丰度（基峰） 50 20 50（含） 10 20（含） 10 允许的最大偏差 20 % 25 % 30 % 50 % 7.5.3 试样溶液的测定 将标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱 -质谱联用仪中，保留时间和定性离子定性，测得定 量离子峰面积，待测样液中 目标物 的响应值在仪器检测的定量测定线 性范围之内，超过线性范围时应根 据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。在上述色谱 -质谱条件下，氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、 氟虫腈亚砜标准溶液定量离子色谱图参见附录 A。 7.6 空白试验 除不加试
15、样外，均按上述步骤进行。 DB36/T 1399-2021 5 8 结果与计算 试样中氟虫腈及其代谢物残留量 按式（ 1）计算。 10001000 mVX （ 1） 式中： X 试样中 氟虫腈及其代谢物残留量 的 含量，单位为 微克每千克 (g/kg)； 从标准曲线中查得的试样提取溶液中 氟虫腈及其代谢物残留量 的浓度 ，单位为 微克每升 (g/L)； V 样液最终定容体积 (mL)； m 所取试样的量，单位为克 (g)； 注： 计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 方法灵敏度、准确度和精密度 9.1 灵敏度 本方法 对氟虫腈及其代谢物的 检出限为
16、0.2 g/kg。本方法 对氟虫腈及其代谢物的 定量限为 0.5 g/kg。 9.2 准确度 氟虫腈及其代谢物在 0.5 g/kg 5.0 g/kg添加 浓度水 平上 的回收率为 70.89 % 107.40 %。 9.3 精密度 在重复性条件下， 2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的 15 %。 DB36/T 1399-2021 6 A A 附录 A （资料性） 氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜标准溶液定量离子色谱图 图 A.1 氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜标准溶液标准品 (10.0 g/L)定量离子色谱图 1-氟虫腈定量离子色谱图（ 434.9329.5） 2-氟甲腈定量离子色谱图（ 387.0281.7） 3-氟虫腈砜定量离子色谱图（ 451.0414.9） 4-氟虫腈亚砜 定量离子色谱图（ 419.0261.9） _
