1、 1 ICS 67.080.20 B 31 DB36 江西省地方标准 DB36/T 1396-2021 畜禽羽（毛）中 5 种有机磷类农药残留量的 测定 液相色谱 -串联质谱法 Determination of 5 organophosphrous pesticides residues in animal feather (hair) HPLC-MS/MS method 2021 - 04 - 23 发布 2021 - 11 - 01 实施 江西省市场监督管理局 发布 DB36/T 1396 2021 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 原理 . 1
2、 4 试剂 和材料 . 1 5 仪器和设备 . 2 6 试样制备与保存 . 2 7 测 定 步骤 . 3 8 结果与计算 . 5 9 方法灵敏度、准 确度和精密度 .5 附录 A（资料性） 毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷标准溶液定量离子色谱图 . 6 DB36/T 1396-2021 II 前 言 本 文件是 按照 GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 的 规 定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由江西省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：江西省农业科学院农产品质量安全与标准
3、研究所 ， 南昌市农业科学院。 本文件主要起草人：徐俊，周瑶敏，谢敏，侯玉洁， 王梦芝， 费丹，闵佳玲， 姚瑶，胡丽芳， 董秋 洪，邬磊，肖勇，郭孝培，余云云。 DB36/T 1396-2021 1 畜禽羽（毛）中 5 种有机磷类农药残留量的测定 液相色谱 -串联 谱法 1 范围 本文件规定了畜禽羽（毛）中毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷 5种有机磷类农药 残留 量的液相色谱 -串联质谱测定方法。 本文件适用于 猪、牛、羊、鸡畜禽 羽（毛）中毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷 5种有 机磷类农药残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必
4、不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件 。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样经甲酸 -乙腈溶液涡旋、超声提取，乙二胺 -N-丙基硅烷（ PSA）和十八烷基硅烷（ C18）分散 净化，液相 色谱 -串联质谱测定，外标法定量。 4 试剂和材料 4.1 试剂 水为 GB/T 6682规定的一级水。 4.1.1 甲醇：色谱纯。 4.1.2 甲酸：色谱纯。 4.1.3 乙腈：色谱纯。 4.1.4 乙酸铵：色谱纯。 4.1.5 氯化钠：分析纯， 140 烘烤 4 h。 4.2
5、溶液 配制 4.2.1 5 %吐温 80：取 5 mL 吐温 80， 加水 溶解，转移 至 100 mL 容量瓶中，定容至刻度，混匀。 4.2.2 1 %SDS： 称取 1 g 十二烷基磺酸钠，加水 溶解，转移 至 100 mL 容量瓶中，定容至刻度，混匀。 4.2.3 2 %甲酸 -乙腈 ： 量取 2 mL 甲酸（ 4.1.2）， 加乙腈（ 4.1.3）稀释，转移 至 100 mL 容量瓶中， 用乙腈（ 4.1.3）定容至刻度，混匀 。 DB36/T 1396-2021 2 4.2.4 5 mmol/L 乙酸铵溶液：称取 0.38 g 乙酸铵（ 4.1.4） ， 加水溶解 ，转移 至 100
6、0 mL 容量瓶中， 定容至刻度，混匀 。 4.2.5 5 mmol/L 乙酸铵甲醇溶液：称取 0.38 g 乙酸铵（ 4.1.4） ， 加甲醇溶解 ，转移 至 1000 mL 容量 瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀 。 4.3 标准品 毒死蜱 （ CAS： 2921-88-2） 、水胺硫磷 （ CAS： 24353-61-5） 、甲胺磷 （ CAS： 28167-49-9） 、氧 乐果 （ CAS： 1113-02-6） 和三唑磷 （ CAS： 24017-47-8） 标准物质， 纯度 均 98.0%。 4.4 标准 溶液 的配制 4.4.1 标准储备液（ 1.0 mg/mL）：分别准确称取毒死
7、蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷标准物 质 各 10 mg（精确至 0.1 mg） ，分别于 10 mL 容量瓶中，用乙腈配成 1.0 mg/mL 的标准储备液，于 -18 下保存，有效期 6 个月。 4.4.2 标准中间液（ 10.0 mg/L）：用移液管吸取 1mL 标准储备液（ 4.4.1）于 100 mL 容量瓶中，用乙 腈分别稀释成质量浓度为 10.0 mg/L 的标准中间液，于 4下保存，有效期 3 个月。 4.4.3 标准工作液（ 1.0 mg/L）：用移液管吸取上述标准 中间液（ 4.4.2）各 1.0mL 于 10 mL 容量瓶中， 用乙腈分别稀释成质量浓度为 1.0mg
8、/L 的标准工作液，临用现配。 4.5 材料 4.5.1 乙二胺 -N-丙基硅烷（ PSA） ， 粒径 40m 60m。 4.5.2 十八烷基硅烷（ C18） ， 粒径 40m 60m。 4.5.3 十二烷基磺酸钠（ SDS）。 4.5.4 吐温 80。 4.5.5 微孔滤膜：有机相， 0.22 m。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱 -串联质谱仪：配电喷雾离子源。 5.2 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。 5.3 高速离心机：转速 10000 r/min。 5.4 涡旋 仪 。 5.5 氮吹仪。 6 试样制备与保存 6.1 试样制备 从动物毛发根部 剪取适量羽（毛） ， 用
9、5% 吐温 80（ 4.2.1） 或者 1% SDS（ 4.2.2） 清洗羽（毛） 30 min， 然后用水冲洗干净， 用试纸吸干后自然晾干 ，剪碎成 1 mm-2 mm。 6.2 试样保存 常温下放干燥器中保存。 7 测定步骤 DB36/T 1396-2021 3 7.1 提取 准确称取 0.2 g（精确至 0.1 mg）上述处理的羽（毛）样品于 15 mL 具塞离心管中，加入 3 mL 2% 甲酸 -乙腈溶液 （ 4.2.3） 和 2 mL 水混合，涡旋 1 min，超声 20 min， 加入 3 g 氯化钠， 涡旋 1 min， 5000 r/min 下离心 5 min， 转移 上清液于
10、 另一离心管 中， 离心后的残渣 加入 3 mL 2%甲酸 -乙腈溶液 （ 4.2.3） 和 2 mL 水重复提取一次，合并上清液 ，混匀 。 7.2 净化 将 7.1 所得合并 上清液 加入 50 mg PSA 和 50 mg C18 吸附剂，涡旋 1 min， 然后在 10000 r/min 下离 心 5 min， 收集 上清液 至离心管中 并在 45条件下氮气吹 至 近干，残渣用 1 mL 水 溶解，过 0.22 m 滤 膜， 供 测定。 7.3 色谱 质谱参考 条件 7.3.1 液相色谱 参考 条件 如下： a）色谱柱： C18（ 100 mm2.1 mm， 1.8 m） ， 或性能相
11、当 者 ； b）流动相： 流动相 A为 5 mmol/L乙 酸铵溶液，流动相 B为 5 mmol/L乙酸铵甲醇溶液 ； c） 流速： 0.3 mL/min； d）柱温： 35 ； e）进样量： 5.0 L； f） 流动相和梯度洗脱条件见表 1。 表 1 梯度洗脱 参考 条件 时间， min 流动相 A， % 流动相 B， % 0 98 2 3.0 20 80 4.0 2 98 4.5 2 98 6.0 98 2 7.0 98 2 7.3.2 质谱 参考 条件 如下： a） 离子化模式：电喷雾电离正离子模式（ ESI +） ； b）毛细管电压： 3000 v； c）干燥气温度： 150 ； d）
12、干燥气流量： 15 L/min； e）雾化气压力： 30 psi； f）鞘气温度： 300 ； g）鞘气流量： 12 L/min； h）检测方式：多反应监测（ MRM），监测条件见表 2。 DB36/T 1396-2021 4 表 2 多反应监测（ MRM） 参考 条件 被测物名称 定性离子对， m/z 定量离子对， m/z 碎裂电压， V 碰撞能量， eV 毒死蜱 350.0/197.8 350.0/197.8 380 49 350.0/96.8 15 水胺硫磷 273.1/230.9 273.1/230.9 380 15 273.1/120.8 30 甲胺磷 142.0/94.1 142.
13、0/94.1 380 15 142.0/125.0 10 氧乐果 214.0/125.0 214.0/125.0 380 20 214.0/155.0 5 三唑磷 314.1/162.0 314.1/162.0 380 20 314.1/96.9 10 7.4 标准工作曲线 吸取一定量标准中间溶液，用 水 逐级稀释成质量浓度为 0.2 g/L、 0.5 g/L、 1.0 g/L、 5.0 g/L、 10.0 g/L、 20g/L的标准工作溶液， 供液相色谱 -串联质谱联用仪测定。以目标物定量离子峰面积为纵坐标、 目标物标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。 7.5 定性及定量 检测 7.5.
14、1 保留时间 被测试样中目标物色谱峰的保留时间与相应标准 品 色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在 2.5% 之内。 7.5.2 定量离子、定性离子及子离子丰度比 在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与标准品一致，并且在扣除背景后 的样品质谱中，目标物质谱定量和定性离子均出现，而且同一检测批次样品中目标物的定性离子和定量 离子的相对丰度比与质量浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过表 3规定的范围，则可判定为样 品中存在对应的待测物。 DB36/T 1396-2021 5 表 3 定性确证时相对离子丰度最大允许偏差 相对丰度（基峰） 50 20 50（含） 10 20（含
15、） 10 允许的最大偏差 20 % 25 % 30 % 50 % 7.5.3 试样溶液的测定 将标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱 -质谱联用仪中，保留时间和定性离子定性，测得定 量离子峰面积，待测样液中农药的响应值 应 在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根 据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。在上述色谱 -质谱条件下，毒死蜱、水胺硫磷、 甲胺磷、 氧乐果和三唑磷标准溶液定量离子色谱图参见附录 A。 7.6 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行 。 8 结果与计算 试样中毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷 的残留量按式（ 1）计算。 10001000 mVX
16、（ 1） 式中： X 试样中 待测物 的含量，单位为 微克每千克 (g/kg)； 从标准曲线中查得的试样提取溶液中 待测物 的浓度 ，单位为 微 克每升 (g/L)； V 样液最终定容体积 (mL)； m 所取试样的量，单位为克 (g)； 注： 计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 方法灵敏度、准确度和精密度 9.1 灵敏度 9.1.1 本方法的检出限：毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷为 0.5 g/kg，氧乐果和三唑磷为 0.4 g/kg。 9.1.2 本方法的定量限：毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷为 1.5 g/kg，氧乐果和三唑磷为 1.2 g/kg。 9.
17、2 准确度 本方法在 2 g/kg 50 g/kg添加浓度水平上的回收率为 66.3% 108.6%。 9.3 精密度 在重复性条件下， 2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的 15%。 DB36/T 1396-2021 6 附录 A （资料性） 毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷标准溶液定量离子色谱图 图 A.1 毒死蜱、水胺硫磷、甲胺磷、氧乐果和三唑磷标准溶液 (10.0 g/L)定量离子色谱图 1-毒死蜱定量离子色谱图（ 350.0197.8） 2-水胺硫磷定量离子色谱图（ 273.1230.9） 3-甲胺磷定量离子色谱图（ 142.094.1） 4-氧乐果定量离子色谱图（ 214.0125） 5-三唑磷定量离子色谱图（ 314.1162.0） _
