1、ICS 67.050 B 50 s 中华人民共和国水产行业标准SC/T 3029-2006 水产品中甲基辜酣残留量的测定液相色谱法Determination of methyltestosterone residues in fishery produc臼Liquid chromatography method 061018000006 2006-07 -10发布2006 -10-01实施中华人民共和国农业部发布前言本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。本标准起草单位:中国海洋大学、国家水产品质量监督检验中心。本
2、标准主要起草人:林洪、江洁、李兆新、曹立民、付晓婷。SC/T 3029-2006 1 范围水产晶中甲基辜嗣残留量的测定液相色谱法本标准规定了水产品中甲基辜酣残留量的液相色谱测定方法。本标准适用于水产品可食部分中甲基辜酣残留量的测定。2 规范性引用文件SC/T 3029-2006 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBf 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理以乙酷提取样
3、品中的甲基辜酣，经过液-液萃取，用Cts柱进行色谱分离，利用甲基辜酣具有紫外特征吸收，外标法定量。4 试剂所有试剂应无干扰峰，分析纯试剂应重蒸。水应符合GBf6682一级水的要求。4.1 甲基辜酣标准品:纯度二?:98%。4.2 甲醇:色谱纯。4.3 甲醇溶液:甲醇:水=4:1。4.4 石油醒:分析纯。4.5 元水乙酷:分析纯。4.6 甲基辜酣标准储备液:准确称取甲基辜酣0.0010g，用甲醇溶解，定容于50mL容量瓶中，使成浓度为20g/mL的标准溶液，一18C存放，存放时间不超过6个月。4.7 甲基辜酣标准工作液:使用前用甲醇稀释成1g/mL工作液，可4C暂时存放。5 仪器5.1 液相色谱
4、仪:配紫外检测器。5.2 电子天平:感量0.0001g。5.3 匀浆机。5.4 磁力搅拌器。5.5 离心机:最大转速5000r/min。5.6 振荡器。5.7 减压旋转蒸发器。5.8 鸡心瓶:50mL。1 SC/T 3029-2006 5.9 具塞玻璃离心管:10mL。5.10 离心管:50mL。5.11 聚四氟乙烯膜:孔径。.45阳n。6 操作方法6.1 样晶处理取水产品可食部分，切为不大于0.5cmX 0.5 cmX 0.5 cm的小块后混匀，充分匀浆，取5.00g(精确到0.01g)于50mL烧杯中。6.2 分离纯化6.2.1 提取向烧杯中加入15mL乙酶，磁力搅拌15min，转移至50
5、mL离心管中，用5mL乙酷洗净烧杯，合并至离心管，5000r/min离心10min，所得上清液转移至鸡心瓶;残渣用15mL乙酷按上述方法再提取一次，所得上清液合并至鸡心瓶，在40C左右水浴条件下减压旋转蒸发至干，残渣中加人5mL甲醇溶液清洗瓶壁，溶液转移至lOmL具塞玻璃离心管中。6.2.2 纯化加人4mL的石油酷至上述离心管中，加塞剧烈振荡1min2 mn,4 000 r/min离心10min，用滴管吸弃上层石油酷层;下层加入4mL的石油酷按上述方法再洗涤一次。下层甲醇榕液在40C左右水浴条件下减压旋转蒸发至约0.5mL，转移至10mL具塞离心管。加人2mL水清洗瓶壁，合并水溶液，加人4mL
6、的乙膛，震荡1min2 min，混匀，4000r/min离心10min，吸取上层乙酷层于鸡心瓶中;下层用4mL乙酷再提取一遍，吸取上层，合并至鸡心瓶中。在40C左右水浴条件下减压旋转蒸发至干，准确加人1mL流动相溶解残渣。经聚四氟乙烯膜过滤，待上机分析。6.3 测定6.3.1 测定条件6.3.1.1 色谱柱:句柱，250mr丑X4.6mm，柱填料粒径5m;或相当者。6.3.1.2 流动相:甲醇:水=70:30;流速:0.8mL/min。6.3.1.3 柱温:30C。6.3.1.4 进样量:20L。6.3.1.5 检测波长:254nm。6.3.2 色谱分析分别注入20L浓度为1g/mL标准工作溶
7、液和样品提取溶液于液相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据标准样品的保留时间定性，外标法定量。标准品色谱图见附录A。7 结果7.1 计算样品中甲基辜酣的含量按公式(1)计算。A X Cs X V X 1 000 . (1) 式中:X一一样品中甲基辜酣含量，单位为微克每千克(glkg); Cs-一标准溶液中甲基辜酣含量，单位为微克每毫升(g/mL);2 A一一试样液中甲基辜酣的峰面积;V一一样品提取物溶液体积，单位为毫升(mL);A一标准溶液中甲基辜酣的峰面积;m一一样品重量，单位为克(g)。7.2 方法回收率本方法的回收率二三75%。7.3
8、 方法检测限本方法检测限:10glkg。7.4 方法重复性本方法重复4性小于10%。7.5 方法的结性范围本方法的线性范围:0.05g/mL-10g/mL。SC/T 3029一20063 SC/T 3029-2006 附录A资料性附录甲基辜酣标准晶的液相色谱圄 mAU -I 15 12.5 10 7.5 5 /一一甲基辜圄2.5 。5 10 15 20 25 固A.l1阿/mL甲基辜酣标准晶的液相色谱固4 CON-NO凹Hum中华人民共和国水产行业标准水产晶申甲基辜酣残留量的测定液相色谱法sc厅3029-2006* 中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100026 网址:WWW) 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销祷* * 9号* 印张0.75字数7千字2006年9月北京第1次印刷印数:1-500册定价:10.00元开本880mmx 1230mm 1116 2006年9月第1版书号:16109 765 版权专有侵权必究举报电话:(010) 65005894
