1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖犜进出口动物源性食品中痢菌净残留量的检测方法液相色谱质谱质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犿犲狇狌犻狀犱狅狓狉犲狊犻犱狌犲犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犎犘犔犆犕犛犕犛犿犲狋犺狅犱发布实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前言本标准的附录为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国吉林出入境检验检疫局、中华人民共和国重庆出入境检验检疫局。本标准主要起草人：张代辉、牟峻、荣会、王国民、韩大川、王明泰。本标准系首次发布的出入境检验检疫
2、行业标准。犛犖犜进出口动物源性食品中痢菌净残留量的检测方法液相色谱质谱质谱法范围本标准规定了进出口动物源性食品中痢菌净残留量的测定液相色谱质谱质谱法。本标准适用于猪肉、鸡肝、鸡肾、鱼肉、牛奶、蜂蜜中痢菌净的测定和确证。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。分析实验室用水规格和实验方法（，：，）方法提要试样中残留的痢菌净用三氯甲烷均质或超声波提取，提取液经浓缩，固相萃取
3、小柱净化，用液相色谱质谱质谱法测定和确证，外标法定量。试剂与材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为规定的一级水。甲醇：色谱纯。三氯甲烷：色谱纯。无水硫酸钠：经灼烧，贮于密封容器中备用。甲醇水（，体积比）。痢菌净标准物质（，分子式：）：纯度大于等于。标准储备液的配制：准确称取适量的标准物质（），用甲醇（）配制成浓度为的标准储备液，避光保存。标准中间工作液的配制：准确移取一定体积的标准储备液（），用甲醇（）稀释成适当浓度的标准中间工作液，避光保存。基质标准工作液的配制：准确移取一定体积的标准中间工作液（），可根据需要用空白样品提取液稀释成适当浓度的标准工作液，当天配制。固相萃取小柱：固相萃取小
4、柱，或相当者。微孔滤膜：有机系，。仪器和设备液相色谱串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源（）。固相萃取装置。组织捣碎机。均质器。犛犖犜超声波发生器。旋转蒸发器。分析天平：感量为。高速离心机：。漩涡混合器。聚四氟乙烯离心管：，具塞。浓缩瓶：、。试样制备与保存试样制备猪肉、鸡肝、鸡肾、鱼肉样品类从所取全部样品中取出有代表性样品约，将其切成碎块后，依次用组织捣碎机将样品加工成馅状或浆状。混匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的盛样袋内，密闭，标明标记。牛奶类取乳及乳制品样品，将其混合或搅拌均匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的盛样袋内，密闭，标明标记。蜂蜜类取代表性蜂蜜样品，对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均
5、匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的盛样袋内，密闭，标明标记；对有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于不超过的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，均分成两份作为试样，分装入洁净的盛样袋内，密闭，标明标记。在融化时应注意防止水分挥发。试样保存肌肉组织及器脏组织类、水产品类试样于以下冷冻保存；乳及乳制品类和蜂蜜类试样于保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。测定步骤提取猪肉、鸡肝、鸡肾、鱼肉样品称取样品（精确至）于具塞离心管中，加入硫酸钠（）与样品充分混匀，再加入三氯甲烷（），高速均质提取，于条件下离心，将上层提取液移入浓缩瓶中，残渣
6、用三氯甲烷重复提取两次，合并提取液。将所得提取液于水浴减压浓缩至近干，残渣加入甲醇水溶液（）溶解。蜂蜜、牛奶样品称取样品（精确至）于具塞离心管中，加入水，超声波提取，加入三氯甲烷，振荡提取，于条件下离心，将下层提取液移入浓缩瓶中。再加入三氯甲烷，重复上述操作两次，合并提取液。将所得提取液于水浴减压浓缩至近干，残渣加入甲醇水溶液溶解。净化分别用甲醇，甲醇水预处理固相萃取小柱（），保持柱体湿润，将上述提取液转移至上述柱中，弃去流出液，用甲醇洗脱，以小于速度收集全部洗脱液于浓缩瓶中，于水浴中旋转浓缩至近干。用甲醇溶解并定容至，经滤膜过滤后，供液相色谱质谱质谱定量测定和确证。犛犖犜测定液相色谱条件）色
7、谱柱：，或相当者；）流动相：甲醇水（）；）流速：；）柱温：；）进样量：。质谱条件）离子源：电喷雾离子源；）扫描方式：正离子扫描；）检测方式：多反应监测（）；）电喷雾电压（）：；）雾化气压力（）：；）气帘气压力（）：；）辅助气压力（）：；）离子源温度（）：；）定性离子对、定量离子对、去簇电压（）、碰撞气能量（）及碰撞室出口电压（）见表。表痢菌净定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞气能量和碰撞室出口电压名称定性离子对定量离子对去簇电压（）碰撞气能量（）碰撞室出口电压（）痢菌净定量测定根据样液中被测痢菌净药物含量，选定浓度相近的基质标准工作液。基质标准工作液和待测样液中痢菌净药物的响应值均应在仪器
8、检测的线性范围内。对标准溶液与样液等体积分组分时段参插进样测定。外标法定量。在上述液相色谱质谱质谱条件下，痢菌净标准物质的保留时间约为，标准溶液的选择性离子流图参见附录中图。定性测定对基质标准工作液及样液按上述规定的条件进行测定时，如果样液与基质标准工作液的选择离子图中，在相同保留时间有峰出现，所有选择离子均应出现。则根据定性选择离子对的种类及其相对丰度比对其进行阳性确证。定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差见表。表定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度允许的最大偏差空白试验除不加试样外，按上述相同条件和步骤进行。结果计算和表述用色谱数据处理机或按式（）计算试样中痢菌净残留含量，计算
9、结果需扣除空白值。犡犃犮犞犃犿（）犛犖犜式中：犡试样中痢菌净残留量，单位为毫克每千克（）；犃样液中痢菌净的峰面积；犮基质标准工作液中痢菌净的浓度，单位为微克每毫升（）；犞样液最终定容体积，单位为毫升（）；犃基质标准工作液中痢菌净的峰面积；犿最终样液代表的试样质量，单位为克（）。测定低限和回收率测定低限（犔犗犙）本方法的测定低限为。回收率在添加浓度范围内，回收率的实验数据见表。表不同添加浓度回收率数据添加浓度（）回收率鱼肉猪肉鸡肾鸡肝蜂蜜牛奶犛犖犜附录犃（资料性附录）痢菌净标准品选择性离子流图）图犃痢菌净标准品的选择性离子流图图犃痢菌净标准品的母离子全扫描质谱图）附录所得谱图是在质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。犛犖犜图犃痢菌净标准品的子离子全扫描质谱图犛犖犜书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口动物源性食品中痢菌净残留量的检测方法液相色谱质谱质谱法中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街号邮政编码：网址电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本印张字数千字年月第一版年月第一次印刷印数书号：定价元
