1、7,江苏省市场监督管理局 发 布中 国 标 准 出 版 社 出 版全血血清中全氟辛酸的测定液相色谱-串联质谱法Determination of perfluorooctanoic acid in whole blood and serumLiquid chromatographytandem mass spectrometry20250910 发布20251010 实施CCS C 50DB32/T 51932025ICS 13.100DB32/T 51932025前言 1 范围 12 规范性引用文件 13 术语和定义 14 原理 15 试剂和材料 16 仪器和设备 27 样品 38 分析步骤
2、 39 方法的定量限和回收率 6目 次DB32/T 51932025前言本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省卫生健康委员会提出并组织实施。本文件由江苏省卫生健康标准化技术委员会归口。本文件起草单位：南京医科大学、生态环境部南京环境科学研究所、苏州市疾病预防控制中心。本文件主要起草人：顾爱华、徐进、刘倩、吉贵祥、胡佳、郭文慧、陈秀、符祖强、倪普、储茅茅、梁梦园。DB32/T 51932025全血/血清中全氟辛酸的测定液相色谱-串联质谱法1范围
3、本文件描述了全血/血清中全氟辛酸（PFOA）的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于人、啮齿类动物（如大鼠、小鼠等）全血/血清样本中全氟辛酸的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法WS/T 661 静脉血液标本采集指南3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理全血/血清样本经含甲酸的乙腈溶液、正己烷和二氯甲烷萃取净化后，有机相氮吹至近干，复溶后上机测定；采用液相色谱分离，
4、质谱检测器检测，根据保留时间、特征离子丰度比定性，采用同位素内标法定量分析。5试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为色谱纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。5.1试剂5.1.1甲酸（HCOOH）。5.1.2乙腈（CH3CN）。5.1.3乙酸铵（CH3COONH4）。5.1.4甲醇（CH3OH）。5.1.5正己烷（C6H14）。5.1.6二氯甲烷（CH2Cl2）。5.1.7标 准 物 质：全 氟 辛 酸（PFOA，C8HF15O2，CAS 号 335671）纯 度 98%。或 使 用 市 售 有 证 标 准溶液。5.1.8同位素内标物质：全氟辛酸同位素内标（13C4PFOA，CAS 号
5、 960315484）质量浓度为 2 mg/L。1DB32/T 519320255.2溶液配制5.2.1甲酸-乙腈溶液移取 2 mL 甲酸用乙腈定容至 100 mL，混匀，配制成 2%甲酸乙腈溶液。5.2.2乙酸铵水溶液：c（CH3COONH4）=2 mmol/L称取 154 mg 乙酸铵，用水溶解，定容至 1 000 mL，混匀。5.2.3乙腈-乙酸铵溶液根据需要取适量乙腈和乙酸铵水溶液，按体积比 11 进行混匀。5.2.4标准储备溶液：（PFOA）=100 mg/L称取 10.0 mg PFOA 标准物质，用甲醇溶解，定容至 100 mL，混匀，避光，0 4 冷藏可保存 60 d，使用前恢
6、复至室温并摇匀。5.2.5标准中间溶液 1：（PFOA）=0.1 mg/L移取适量 PFOA 标准储备溶液，用甲醇稀释配制成质量浓度为 0.1 mg/L 的标准中间溶液 1。临用现配。5.2.6标准中间溶液 2：（PFOA）=0.01 mg/L移取适量 PFOA 标准储备溶液，用甲醇稀释配制成质量浓度为 0.01 mg/L 的标准中间溶液 2。临用现配。5.2.7内标工作溶液：（13C4PFOA）=0.2 mg/L将内标储备液按需要用甲醇溶解，混匀，避光，0 4 冷藏可保存 60 d。使用前恢复至室温，并摇匀。5.3材料5.3.1离心管：15 mL、2 mL，聚丙烯材质。5.3.2容量瓶：10
7、 mL、100 mL，聚丙烯材质。5.3.3进样瓶：2 mL，聚丙烯材质。6仪器和设备6.1电子天平：分度值不大于 0.01 mg。6.2涡旋振荡器。6.3氮吹浓缩装置。6.4高速离心机：转速可达 12 000 r/min。6.5超声波清洗仪。6.6低温冰箱：温度可达-20。6.7液相色谱串联质谱仪：液相色谱具备梯度洗脱功能，三重四极杆质谱仪配有电喷雾离子源，具备多反应监测功能。6.8一般实验室常用仪器和设备。2DB32/T 519320257样品7.1样品采集和保存全血/血清样品按照 WS/T 661 的规定进行获取，样品如无法及时检测，全血样品应于 2 8 冰箱保存，周期不超过 7 d；血
8、清样本应于-20 冰箱中冷冻保存，保存周期不超过 3 个月。7.2试样的制备7.2.1全血取 500 L 全血于 15 mL 离心管中，加入 20 L 内标工作溶液，加入 1 mL 纯水稀释，涡旋混匀；加入 1 mL甲酸乙腈溶液涡旋混匀，超声 5 min，加入 1 mL 正己烷和 1 mL 二氯甲烷，涡旋萃取 1 min，4 000 r/min转速离心 5 min，转移上层全部有机相至新的离心管中；重复上述操作，将两次上层有机相混合。将收集的萃取液在 40 水浴温度下氮吹至近干，用 200 L 乙腈乙酸铵溶液复溶，混匀后将溶液转移至 2 mL离心管中，12 000 r/min 离心 5 min
9、取上清，待液相色谱串联质谱仪测定。7.2.2血清取 200 L 血清于 15 mL 离心管中，加入 20 L 内标工作溶液，涡旋混匀；加入 1 mL 甲酸乙腈溶液涡旋混匀，超声 5 min，加入 1 mL 正己烷和 1 mL 二氯甲烷，涡旋萃取 1 min，4 000 r/min 转速离心 5 min，转移上层全部有机相至新的离心管中；重复上述操作，将两次上层有机相混合。将收集的萃取液在 40 水浴温度下氮吹至近干，用 200 L 乙腈-乙酸铵溶液复溶，混匀后将溶液转移至 2 mL 离心管中，12 000 r/min离心 5 min，取上清，待液相色谱串联质谱仪测定。8分析步骤8.1仪器参考
10、条件8.1.1液相色谱柱：C18 色谱柱，柱长 100 mm，内径 2.1 mm，粒径 1.8 m），或其他等效色谱柱。8.1.2流动相：流动相 A 为乙腈；流动相 B 为乙酸铵水溶液。8.1.3流速：400 L/min。8.1.4柱温：35。8.1.5进样体积：5.0 L。8.1.6离子源模式：ESI 负离子模式；气帘气压力 35.0 psi；喷雾电压-4 500 V；雾化温度 550；雾化气压力 55 psi；辅助气压力 60 psi。8.1.7梯度洗脱程序见表 1。表 1 梯度洗脱程序0.001.005.007.001010909090901010时间/min流动相 A/%流动相 B/%
11、3DB32/T 519320258.0010.010109090表 1 梯度洗脱程序（续）时间/min流动相 A/%流动相 B/%8.1.8全氟辛酸及其同位素内标质谱参考条件见表 2。表 2 全氟辛酸及其同位素内标质谱参考条件组分全氟辛酸全氟辛酸内标母离子 m/z413.0417.1去簇电压/V-48-70子离子 m/z368.9168.9372.0碰撞能量/eV-16-25-208.2标准曲线绘制移取适量 PFOA 标准中间溶液 1 和标准中间溶液 2 于 2 mL 进样瓶中，并分别加入 10 L 同位素内标物质，用乙腈-乙酸铵溶液稀释制得系列标准溶液（现配现用）。各溶液全氟辛酸的质量浓度依
12、次为 0.5 g/L、1.0 g/L、5.0 g/L、10.0 g/L、20.0 g/L、50.0 g/L，内标物质量浓度均为 20.0 g/L。将系列标准溶液按高效液相色谱和质谱参考条件进行测定，以全氟辛酸质量浓度（g/L）为横坐标、全氟辛酸峰面积与其对应的内标峰面积比值为纵坐标，建立标准曲线线性回归方程。全氟辛酸及其内标溶液的多反应监测色谱图见图 1 和图 2。f5f5f5f5 DQTKNJO10图 1 全氟辛酸溶液的多反应监测色谱图4DB32/T 51932025f5f5f5f5 DQTKNJO13$410图 2 全氟辛酸标准溶液的多反应监测色谱图8.3试样测定按本方法仪器条件测定试样溶
13、液，试样色谱峰的保留时间与对应标准色谱峰的相对误差应控制在5%范围内。在扣除背景的质谱图中，所有特征离子均被检出，且试样定性离子丰度/定量离子丰度的比值与对应标准物质中定性离子丰度/定量离子丰度的比值满足表 3 规定的要求，则可判定试样含全氟辛酸。表 3 相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%最大允许偏差/%10501020302050255020记录目标化合物定量离子与内标化合物色谱峰的峰面积，采用内标法进行定量分析。试样溶液中被测物的响应值应位于标准曲线的线性范围内，超出范围的试样需稀释后重新测定。8.4空白试验除不加试样外，均按照与试样相同的制备和分析步骤进行测定。8.5结果计算全血
14、/血清中全氟辛酸含量按公式（1）计算，计算结果需扣除空白值。=1 V 1V（1）式中：样品中 PFOA 的质量浓度，单位为微克每升（g/L）；1 进样质量浓度，单位为微克每升（g/L）；V1 样品的定容体积，单位为微升（L）；V 取样体积，单位为微升（L）。5DB32/T 519320259方法的定量限和回收率9.1定量限全血取样量为 500 L，定容体积为 200 L 时，全氟辛酸的定量限为 0.5 g/L。血清取样量为 200 L，定容体积为 200 L 时，全氟辛酸的定量限为 0.5 g/L。9.2回收率血清中全氟辛酸的添加质量浓度为 1.0 g/L 时，回收率为 88.5%112%，相对标准偏差为 3.8%9.8%；添加浓度为 10.0 g/L 时，回收率为 79.7%96.4%，相对标准偏差为 5.5%7.2%。全血中全氟辛酸的添加质量浓度为 1.0 g/L 时，回收率为 90.5%93.3%，相对标准偏差为 3.0%3.8%；添加浓度为 10.0 g/L 时，回收率为 94.0%94.8%，相对标准偏差为 4.9%5.6%。6
