1、7,江苏省市场监督管理局发 布中 国 标 准 出 版 社出 版高粱品种鉴定 IDP 分子标记法Identification of sorghum varietiesIDP marker method20251230 发布20260130 实施CCS B 21DB32/T 52952025ICS 65.020.01DB32/T 52952025前言 1 范围 12 规范性引用文件 13 术语、定义和缩略语14 仪器设备及试剂 25 溶液配制 26 鉴定位点及使用 27 参照品种及使用 28 操作程序 29 结果统计 410 结果判定4附录 A（规范性）主要仪器设备及试剂 6附录 B（规范性）溶
2、液配制 8附录 C（规范性）鉴定位点名单 10附录 D（资料性）鉴定位点相关信息 12附录 E（资料性）参照品种名单及来源 15目 次DB32/T 52952025前言本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省农业农村厅提出并组织实施。本文件由江苏省农作物标准化技术委员会归口。本文件起草单位：江苏省农业科学院、中国农业科学院、贵州省旱粮研究所。本文件主要起草人：钟小仙、薛文韬、朱莉、高杰、刘智微、陈晓强。DB32/T 52952025高粱品种鉴定
3、 IDP 分子标记法1范围本文件规定了利用核苷酸插入缺失多态性（IDP：Insertiondeletion polymorphism）分子标记进行高粱（Sorghum）品种 DNA 指纹鉴定的仪器设备及试剂、溶液配制、鉴定位点及使用、参照品种及使用、操作程序、结果统计及结果判定。本文件主要适用于粒用高粱中的 DNA 分子数据采集和品种鉴定，甜高粱、苏丹草、高丹草、拟高粱在内的饲用高粱品种鉴定也可参照使用。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于
4、本文件。GB/T 3543.2 农作物种子检验规程 第 2 部分：扦样GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法NY/T 2467 高粱品种鉴定 SSR 分子标记法NY/T 2594 植物品种鉴定 DNA 分子标记法 总则3术语、定义和缩略语3.1术语和定义NY/T 2594 界定的术语和定义适用于本文件。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。bp：碱基对（base pair）CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethylammonium bromide）DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid）dNTPs：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxyribonuc
5、leoside triphosphate）EDTA：乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid）HEX：六氯荧光素（HEX NHS ester）IDP：插入缺失多态性（insertiondeletion polymorphism）PCR：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）ROX：马来酰亚胺（XRhodamine maleimide）Taq 酶：耐热 DNA 聚合酶（TaqDNA polymerase）TAE：三羟甲基氨基甲烷-乙酸-乙二胺四乙酸（TrisacetateEDTA）TAMRA：罗丹明荧光素（Carboxytet
6、ramethylrhodamine）1DB32/T 52952025TE：三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸（TrisEDTA）TDPCR：降落 PCR（Touchdown PCR）Tris：三羟甲基氨基甲烷Tris（hydroxymethyl）methyl aminomethane THAM6FAM：6羧基荧光素（6Carboxyfluorescein）4仪器设备及试剂主要仪器设备及试剂按附录 A。5溶液配制溶液配制方法按附录 B。6鉴定位点及使用鉴定位点引物序列及相关信息见附录 C 和附录 D。利用琼脂糖凝胶电泳检测时选择普通引物；利用荧光毛细管电泳检测时选择荧光标记引物，荧光标记位于正向引物
7、 5端，荧光标记推荐使用 6FAM，允许配合 HEX、TAMRA、ROX 其他三色荧光标记多重电泳。构建数据库时，应使用全部引物；在品种鉴定时，利用附录 C 中的引物序贯检测，当检测到的差异位点数能判定送检样品与参照品种不同时，即可停止检测。7参照品种及使用参照品种包括 BTx623、Rio、Tx430、红缨子、晋糯 3 号、红糯 16、苏丹草 2098 和苏牧 3 号（拟高粱苏丹草杂交种），参照品种在以上引物的扩增片段中至少有一个品种与其他不同。参照品种用于辅助确定送检样品在某个位点的等位变异，宜与送检样品同时检测。参照品种及相关信息见附录 D 和附录 E。8操作程序8.1样品准备送检样品可
8、为种子、幼苗、根、茎、叶等新鲜组织。每份样品不少于 30 个个体植株或种子，等量混合分析，必要时进行个体检测。种子样品需扦样时，应符合 GB/T 3543.2 的规定。8.2DNA 提取称取 500 mg 四叶期幼苗新鲜叶片，用液氮冷冻后迅速磨成粉末；或称取 500 mg 种子，常温下研磨成粉末后 60 目过筛。以幼苗叶片粉末或 100 mg 过筛种子粉末为样品进行 DNA 提取，实验流程参照NY/T 2467 中步骤进行。注：以上为推荐的 DNA 提取方法，DNA 质量能够满足 PCR 扩增要求的其他 DNA 提取方法均适用。DNA 溶液的紫外吸光度 OD260 与 OD280 的比值宜介于
9、 1.72.0。8.3PCR 扩增8.3.1反应体系PCR 扩增反应体系参照 NY/T 2467 中体系进行。2DB32/T 529520258.3.2反应程序8.3.2.1概述PCR 扩增反应程序采用降落式 TDPCR 程序，分为高退火和低退火 2 个程序。8.3.2.2TDPCR 反应程序 1（高退火）95 5 min95 15 s63 15 s，T=-0.5/cycle12 cycles72 20 s95 15 s57 15 s30 cycles72 20 s72 5 min8.3.2.3TDPCR 反应程序 2（低退火）95 5 min95 15 s60 15 s，T=-0.5/cyc
10、le12 cycles72 20 s95 15 s54 15 s30 cycles72 20 s72 5 min注 1：反应程序中三步循环时间可根据 PCR 扩增仪型号、酶、引物等在 5 s20 s 内进行调整。注 2：依据附录 D 中的标注对不同引物使用相应的反应程序。8.4基因分型平台使用琼脂糖凝胶电泳平台进行基因分型时宜选择普通引物的 PCR 产物，使用荧光毛细管电泳平台进行基因分型时应选择带有荧光标记引物的 PCR 产物。8.4.1琼脂糖凝胶电泳8.4.1.1制胶称取 4 g 琼脂糖于三角瓶中并加入 100 mL 的 1TAE 缓冲液，微波炉加热至沸腾后取出，稍冷却后加入一定量核酸染料
11、具体用量视核酸染料类型而定），摇匀后倒入水平制胶框，插上制样梳。8.4.1.2电泳将胶板安装于电泳槽上，在电泳正极槽和负极槽各加入适量 1TAE 缓冲液，使其没过点样孔。移液器吸取 6 L8 L PCR 产物和 DL2000 DNA 分子量标准物。除送检样品外，还应同时加入参照品种扩增产物。80 V 恒压电泳，电泳时间参考柠檬黄指示带移动的位置。柠檬黄指示带在质量分数为 4%琼脂糖胶电泳的移动位置与 50 bp 扩增产物泳动的位置大致相当。通常黄色指示带到达胶板底部，电泳结束。电泳参考时间分别为 1.0 h。电泳结束后关闭电源，取出胶板。3DB32/T 52952025注：PCR 体系中其他
12、预混指示带均适用。8.4.1.3凝胶成像从胶板中取出琼脂糖凝胶，放置于凝胶成像系统的显影板上，依据对应仪器的显影操作软件进行影像分析，获得扩增产物的条带图谱及条带大小。8.4.2荧光毛细管电泳8.4.2.1PCR 产物样品准备吸取带有 6FAM 荧光标记引物的扩增产物 1 L，加入基因分析仪配套电泳板中。板中各孔分别加入 0.1 L 分子量内标 LIZ1200 和 8.9 L 去离子甲酰胺，在 PCR 仪上 95 变性 3 min，取出后立即置于冰上，冷却 10 min 以上，瞬时离心 10 s 后备用。注：采用 6FAM、GEX、TAMRA、ROX 四色荧光标记进行多重电泳时，引物分组和稀释
13、倍数通过荧光毛细管电泳预实验确定。8.4.2.2等位变异检测打开基因分析仪，检查仪器工作状态和试剂状态。将装有样品的配套电泳板放置于样品架基座上，打开数据收集软件，按照基因分析仪使用手册进行操作。基因分析仪自动运行参数，并保存电泳原始数据文件。8.5数据记录每个 IDP 位点的等位变异参照扩增片段大小命名，见附录 D。对于琼脂糖电泳，将送检样品在某一位点扩增片段的迁移位置与对应的参照品种进行比较，确定送检样品在该位点的等位变异。对于荧光毛细管电泳，通过参照品种消除不同批次间或者不同型号基因分析仪间可能存在的系统误差，使用片段分析软件读取送检样品在该位点的等位变异。纯合位点的等位变异数据记为 X
14、/X，杂合位点的等位变异数据记录为 X/Y，其中 X、Y 分别为该位点上的两个等位变异，小片段数据在前，大片段数据在后。缺失位点的等位变异数据记录为 0/0。示例 1：样品在某个位点上仅出现一个等位变异，为 246 bp，则该位点的等位变异数据记录为 246/246。示例 2：样品在某个位点上有两个等位变异，分别为 246 bp、429 bp，则该位点的等位变异数据记录为 246/429。9结果统计将送检样品与参照品种每个位点的等位变异数据逐一比对，按照位点相同、差异、数据缺失、无法判定等情形，记录每个位点的结果。统计比对结果为位点差异的情况，计算差异位点数。10结果判定10.1判定方法当品种
15、间差异位点数2，判定为“不同品种”；当品种间差异位点数2，判定为“疑同品种”；当品种间差异位点数2，但存在位点数据缺失或无法判定情形时，不作判定。10.2结果表述送检样品 与参照品种 （或数据库中 已知品种）利用 分子4DB32/T 52952025标记类型，采用 检测平台，采用 位点组合进行检测，结果显示：检测位点数为 ，差异位点数为 ，判定为 。当存在位点数据缺失或无法判定情形时，表述具体情况。示例 1：送检样品 A 与对照样品 B 利用 IDP 分子标记类型，采用琼脂糖凝胶电泳检测平台，采用 WS0160 位点组合进行检测，结果显示：检测位点数为 60，差异位点数为 1，判定为疑同品种。
16、示例 2：送检样品 A 与对照样品 B 利用 IDP 分子标记类型，采用荧光毛细管电泳检测平台，采用 WS0160 位点组合进行检测，结果显示：检测位点数为 60，差异位点数为 1，送检样品在 WS12 位点数据缺失。5DB32/T 52952025附录A（规范性）主要仪器设备及试剂A.1主要仪器设备A.1.1PCR 扩增仪。A.1.2恒压电泳仪：最高电压不低于 200 V，具有恒电压和恒电流功能。A.1.3水平电泳槽及配套的制胶附件。A.1.4离心机。A.1.5水平摇床。A.1.6电子天平：感量为 0.1 g 和 0.001 g。A.1.7微量移液器：规格分别为 10 L、20 L、100
17、L、200 L、1 000 L，连续可调。A.1.8磁力搅拌器。A.1.9核酸浓度测定仪或超微量紫外分光光度计。A.1.10微波炉。A.1.11高压灭菌锅。A.1.12酸度计。A.1.13水浴锅。A.1.14低温冰箱。A.1.15制冰机。A.1.16凝胶成像系统。A.1.17基因分析仪：基于毛细管电泳，有片段分析功能和数据分析软件，最低区分力 1 bp。A.1.18其他相关仪器和设备。A.2主要试剂除非另有说明，在分析中均使用分析纯试剂。A.2.1十六烷基三甲基溴化铵（CTAB，C19H42BrN，CAS 号：57090）。A.2.2三氯甲烷（CHCl3，CAS 号：67663）。A.2.3异
18、戊醇（C5H12O，CAS 号：123513）。A.2.4异丙醇（C3H8O，CAS 号：67630）。A.2.5乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA2H2O，C10H14N2Na2O8，CAS 号：139333）。A.2.6三羟甲基氨基甲烷（Tris，C4H11NO3，CAS 号：77861）。A.2.7浓盐酸（HCl，CAS 号：7647010）。A.2.8氢氧化钠（NaOH，CAS 号：1310732）。A.2.910PCR 缓冲液：含 Mg2+25 mmol/L。A.2.104 种脱氧核糖核苷酸：dATP、dTTP、dGTP、dCTP。A.2.11氯化钠（NaCl，CAS 号：764714
19、5）。A.2.12Taq DNA 聚合酶（Taq 酶，CAS 号：9012902）。6DB32/T 52952025A.2.13DL2000 DNA 分子量标准物：DNA 片段分布范围至少在 50 bp2 000 bp。A.2.14甲酰胺（CH3NO，CAS 号：75127）。A.2.15RNase A 酶（核糖核酸酶，CAS 号：9001994）。A.2.16核酸染料：SYBR Green、SYBR Safe、SYBR Gold、GelGreen、GelRed 任一种均可。A.2.17乙酸（C2H4O2，CAS 号：16676963）。A.2.18无水乙醇（C2H6O，CAS 号：64175
20、A.2.19基因分析仪用丙烯酰胺胶液。A.2.20基因分析仪用分子量内标 Liz1200。A.2.21基因分析仪用电泳缓冲液。A.2.22基因分析仪用光谱校准基质。7DB32/T 52952025附录B（规范性）溶液配制B.1试剂配制用水试剂配制用水需符合 GB/T 6682 的要求。B.2DNA 提取试剂配制B.2.10.5 mol/L EDTA 溶液186.1 g Na2EDTA2H2O 溶于 800 mL 水中，加 NaOH 溶液调 pH 至 8.0，加水定容至 1 000 mL，121 高压灭菌 20 min。B.2.20.5 mol/L HCl 溶液25 mL 质量分数为 36%
21、38%浓盐酸，加水定容至 500 mL。B.2.31 mol/L NaOH 溶液40.0 g NaOH 溶于 800 mL 水中，加水定容至 1 000 mL。B.2.41 mol/L TrisHCl 溶液121.1 g Tris 碱溶于 800 mL 水中，加 HCl 调 pH 至 8.0，加水定容至 1 000 mL，121 高压灭菌 20 min。B.2.5CTAB 提取液20.0 g CTAB、81.7 g NaCl、100 mL 1 mol/L TrisHCl 溶液和 40 mL 0.5 mol/L EDTA 溶液，加水定容至 1 000 mL，121 高压灭菌 20 min，4 保
22、存。B.2.6TE 缓冲液5 mL 1 mol/L TrisHCl溶液和 1 mL 0.5 mol/L EDTA 溶液，加 HCl调 pH 至 8.0，加水定容至 500 mL，121 高压灭菌 20 min，4 保存。B.3PCR 扩增试剂配制B.3.1dNTP 溶液用 TE 缓冲液分别配制 dATP、dTTP、dCTP、dGTP 终浓度为 100 mmol/L 的储存液。各取 20 L 混合，加 120 L TE 缓冲液定容，配制成每种脱氧核糖核苷酸终浓度为 10 mmol/L 的工作液，121 高压灭菌 20 min，-20 保存。B.3.2IDP 引物溶液开盖前瞬时离心 10 s，按照
23、说明书加 TE 缓冲液，分别配制正向引物和反向引物终浓度为 100 mol/L的储存液。取 10 L 储存液，加 90 LTE 缓冲液配制成终浓度 10 mol/L 的工作液。8DB32/T 52952025B.4电泳试剂配制B.4.110TAE 缓冲液Tris 242 g、乙酸 57.1 mL、Na2EDTA2H2O 37.2 g，加水定容至 1 000 mL。B.4.21TAE 缓冲液50 mL 10TAE 缓冲液，加水定容至 500 mL。9DB32/T 52952025附录C（规范性）鉴定位点名单鉴定位点名单及引物序列见表 C.1。表 C.1 鉴定位点名单及引物序列1234567891
24、01112131415161718192021222324252627WS01WS02WS03WS04WS05WS06WS07WS08WS09WS10WS11WS12WS13WS14WS15WS16WS17WS18WS19WS20WS21WS22WS23WS24WS25WS26WS27111111222222333333444444555CTCTTGAACACAATTATTGCGTCTTAGTGCCGCAGCAAAGCCAAACGATACTTCTCCGGGTTGTGGTAGCTTTGCTGTGTCCACTCAACGGCTAGCATCCTCCTGTGTTCCGTCCTCAAGACATATTGCA
25、GGTTCCTGTTCGTGAGCGATCATCGGATCAACAATAGTCAGGTGAACAACAGATGGGAACAGCATTTGTTCAGCACCTGTCACTAACTCCATTGTTGCTCTTCTTCCCTCAAGAGTCAAAGGGACACACTTGTTGGTACTCCAACTCCGACACCGGCAAAGGATGAGGCGGATTCTTGGGAGATGTTAGTTTCTTCCTTGTCCATTGTGCAATATCGTGTCCGTGAACTAGGCTCAACTAACTTGGACGCTTCACCTGCCTCAACTGTGAATTGGTGACGGATATTAAGCGGGCTCATTT
26、GTACGAGTCTAGCTCAATCATGGGCTAACTAGACTCAAGGAAGTCCAACAGCCCACCTCTCTTCCATACTCCATACCACGCTTGTTCTCGGTCAGAAGCAAGCCTAACTTTGGTCGGAATTGATGAGACGAATCTTAGAATGAAGGTATGCGCTGTGTAAGCATCTTGATTAAGGACGGAATGGACATGATTGATTGACACGGCACATCTCTGGTGCAACTCCTCGCATTTCAAGCATGGCTGTCTGACTCGACTAATGTGTGGTGGTGTGAGGTTACTCTCCACTGCGGAGGATGACCA
27、TTCACTAATCTATCCATCTAACCACCATTGACCTGCTTCGTTTCGGAGGCTATGAGGTCTTCTTTGTTCAAGTTCCAACCTTGGCGTGCCGTGAGATCACAAGAAGAGAAATGAATGGACCAAGAACTCTGCTCATGTTCCGGCTAATAACTATACAACCCACGGTGGTAAACCTTTGCCTCCTCTCTTCTTTCCTCCACCTCAACATGCAAGTCATTGGACAGGAAGCTCCATAGGCATTCATCGGTCATGACTGCTATACAGCCACCCTTCTAGCTCAAAGTGGCTCGTAAGCCGACA
28、GAGCCATGACCACAACCTCTACGGTCTTCGTGTCTAGCCTTCGGAGAAGAAGAAGCGGTGGAGGTATTTGCCTCTAATTTGCGAGACGAATCACCTATCGCCTCCCATGACCTTGCTGTTGGGCATTCTTAACGTCATTACCCAGTAGGAAGTCATGTCATCAAGTATGTCTCCTCCTCCCTACGAGCAGTAGTAAAGAGGAGGAGAAGACGACGACAGTACATGCCTTGACAACGAACCTAGCGTTCCGCTTGCCATTCAGCATTATGGACAACTCGCCATAATAATGTGCTGAG位点编号
29、位点名称染色体位置正向序列（53）反向序列（53）10DB32/T 52952025282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960WS28WS29WS30WS31WS32WS33WS34WS35WS36WS37WS38WS39WS40WS41WS42WS43WS44WS45WS46WS47WS48WS49WS50WS51WS52WS53WS54WS55WS56WS57WS58WS59WS60555666666777777888888999999101010101010ATTTCGGAAAGCTTACTCAGA
30、GGGATACTTGTGGTGACACGGTATCATACTCTTTCCTCCCGAATTAGAAGACGAAACAAAGTTCTCTAAGCAACTCAGCAAGTCTCTTCCTGTCTATGTGGTTGAAGCCTATAAGAACACAAGTGGTTGCCTGATGAAGCGCACCAGTGTCAGCATGTGGAGATGGCAATGCAAGAGTCGGAGAGGCTGACAACCAGGCAGACGGTGATTGTGCAATGTGCATGATATAGACAATCAAGCTGCAAATGCTATTGGTTCCTCCACTGATGACACCATGCCTTCGGTGCTCCAGAGTTTCCT
31、CAACAGTGACACTTTAGCACTTTCGTTTGTACGCCCATAGCCTTGTTCTCTCAATTCAGGAGAAATATGTGGGCATGTCAGCCTCCTCGTGAGTTGAGCACTTGCATGGAATCTTAACTCTTAGCTTCTCACGTTCCTGTGGGATGCTTCCTGACTTGAGCAGGCGCAGGAACAAAGGGCTCGATGGAGACCAGAAAGGATCTGATCCGATGGACGGTATGGGGAGAAGGAAGAGTTGGATGAGGAATCCACGAGTGGCTGACAATGTTGGACCTATGGTGGCGTCAATGTGTCAACTTA
32、CAGCCAGTTTAGACACAAGAATCAAGCTACCTACGAAGCAGCAGCACACTAGAGAGGAGAGGAGGGACAGAGAGTGTTCTTTGTACTCCGCTGTCTATGCCATGCTTCAAGTGTCACATCTTCCTTATACATGCTTAGGATCGTATAGCGTGATCCTGACGGTGGGTCTCAACCTGCGGAAGAACCTCTGTCACTAATCATAGAGTAACTAGGTGAAAGGTCCGCCTTCCCTCATCCTAACCTCAACCAGTGAGATACCACATTGGAACTTGAGTCCGTTCCTTTCCATCCATCCATCAA
33、ATGACTGAAAGGCAACACAGAGAAACCGGATGAGCGATGGAACGAGTTACGGGCAAGCAAATCTCAATCCCCAGGTCAGCAGTGAAGCAAACATACGTAGACAGCACCGCCATCCACCACCGCTACACTCGCCAAACCGTGGATAACATAAGAATGGTAAGAGTGATTCATAATGCAGTTCCGCTCACAAGCCGACTGGTACGGGTACGAGTACGGCAGAAGGAGATCACGATACTACAGTTTGGTCGAAATTGACGAGACATTCTGTCGTTTCTACATCTTGGCTTGAGGACAACAACG
34、GAATCGGTGGTGCAATGGACTGGTTCTCGCTTCGTGCTCCAATATCTGTACTATTTCCTGACCAACCATCTCGGAGACGCATCATCAGATTTGTTTGACTGGTGCCGAATGGAAGAATGGCAGTGACTTGGCAATTCTCTACATACCGTTCGCCACTGACGGGAAGGTATTCCTGTTGTTTATCTCAATGGCGTCAGAATCAGAACTCGGAAGGCAGCTTTCTTCCAACTCACTCATACAATAGCGAGCAGCACAACCTCACAATGAGGACGCATGAAAGACCTGGAGAAACTCCTCTCT
35、TATCTGATGAAACTCCTACAAGATGACTGTTGCCTATGACCAAAACTCTGACTTGAGATAAGCCATCACTTGCTGTCTATTGAAGTGACGAGTTGGTCACCTGGCTACGAGATTCTCATC表 C.1 鉴定位点名单及引物序列（续）位点编号位点名称染色体位置正向序列（53）反向序列（53）11DB32/T 52952025附录D（资料性）鉴定位点相关信息鉴定位点相关信息见表 D.1。表 D.1 鉴定位点相关信息12345678910111213141516171819202122232425261WS011WS021WS031WS041WS052
36、WS061WS071WS081WS091WS101WS111WS121WS131WS141WS151WS162WS172WS182WS191WS201WS211WS221WS231WS242WS251WS261111112222223333334444445543.126.127.52.835.910.125.033.328.639.548.923.919.246.332.610.940.049.344.927.540.230.829.329.715.926.11 1502417788164773013512831322432778142786892571951 141959161158302
37、5391872634061231234287788161 1533012964961802435018142784185291951 1419591611073023101874861901231234285298164772592962831802432778143556895295671 1416441611583023101874861901501 1504285298161 153301296496132590501515355418257195426959209107219310435486190123123428528/778816477301351283/496132243277
38、515/814278418257195426959161158219/302310435263190/406123123241/428528/778816477301351283/496132243277515/814278418257/529195426959161158219/302310435263190/406123a1 150a428a778b328a1 153a301a296a496a132a243a277a814a355a418/689a257a195a1 141a959a209a158a302a539a435a486a190a123位点编号位点名称染色体位置MAF/%参照品种
39、IDP 位点多态性/bpBTx623RioTx430红缨子晋糯 3 号红糯 16 号a苏丹草b苏牧 3 号12DB32/T 52952025272829303132333435363738394041424344454647484950515253545556571WS272WS281WS291WS301WS311WS321WS331WS341WS351WS361WS371WS381WS391WS401WS411WS421WS432WS441WS451WS461WS471WS481WS491WS501WS511WS522WS531WS541WS551WS561WS575555666666777
40、77788888899999910101043.518.514.542.019.225.743.810.923.612.037.38.710.56.949.321.049.338.827.544.618.819.940.616.35.447.548.226.826.844.345.82641935312115004912575971284981562981 0053003962251841903731724168333531834354281622071 0362356443621935312471496582573621681531562981563003962251841901361721
41、798333531234356601075531 036235644362193531211500658257362128153885485156300396458184190136418179599353123435428162207373235644264193170247500658502362128153885298156300335225422190373418179599146123435428162207373481976264/362193170211500491502362168153156/885298156300396225/458184190/256136/373172
42、/418179/416833146/353123/183435428107207373235/481644/976264/362193170/531211500491502362168153156/885298156300396225184190/256136/373172/418179/416833146/353123/183435428107207373235/481644/976a264a879a170a211a149a658a257a362a128a153a156a298a156a348a335a225a184a256a373a172a416a599a353a183a198a428a1
43、62a553a1 036a235a644表 D.1 鉴定位点相关信息（续）位点编号位点名称染色体位置MAF/%参照品种 IDP 位点多态性/bpBTx623RioTx430红缨子晋糯 3 号红糯 16 号a苏丹草b苏牧 3 号13DB32/T 52952025585960附录 D 中未包括的等位变异，应按本文件方法，确定其大小和相应参照品种注 1：附录 D 中所列参照品种仅为示例，与参照品种具有相同等位变异的其他品种也可用作该等位变异的参照品种。注 2：同一名称不同来源的参照品种，在某些位点上的等位变异可能不相同，使用前需确认其等位变异。注 3：附录 D 中 1和 2分别表示 TDPCR 反应
44、程序 1 和 2，a表示苏丹草 2098 的 IDP 位点，b表示苏牧 3 号（拟高粱苏丹草杂交种）的 IDP 位点。1WS581WS591WS6010101027.137.342.0683324231 1763324231 1763324236833230468332/56542368332/565423a1 176a332a423表 D.1 鉴定位点相关信息（续）位点编号位点名称染色体位置MAF/%参照品种 IDP 位点多态性/bpBTx623RioTx430红缨子晋糯 3 号红糯 16 号a苏丹草b苏牧 3 号14DB32/T 52952025附录E（资料性）参照品种名单及来源参照品种相关信息见表 E.1。表 E.1 参照品种相关信息序号12345678参照品种名称BTx623Tx430Rio红缨子晋糯 3 号红糯 16苏丹草 2098苏牧 3 号来源江苏省农业科学院牧草种质资源库江苏省农业科学院牧草种质资源库江苏省农业科学院牧草种质资源库贵州省旱粮研究所国家农作物种质资源保存中心国家农作物种质资源保存中心江苏省农业科学院牧草种质资源库江苏省农业科学院牧草种质资源库15
