1、中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验Microbiological examination or food hygiene Examination of Streptococcus hemolyt缸1 主内害与适用范围本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法本标准适用于食品和食物中毒样品中榕血性链球菌的检验。2 引用标准GB 4789”28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3. 1 温箱：36土1。3.2 水浴：36土13.3 显微镜3. 4 离心机。3. 5试管架3.6 灭菌平皿3. 7 灭菌小试管。3. 8 载玻片3.9 灭菌吸管：1mL、10mL。
2、3. 10 灭菌慑子。3. 11 均质器。3. 12酒精灯。3. 13接种环。4培弊基和试剂GB 4 7 8 9. 11 - 94 代替GB4789. 11 84 4. 1 葡萄糖肉漫液肉汤z按GB4789. 28中4.1规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。4.2 肉浸液肉汤s按GB4789. 28中4.1规定。4. 3 匹克氏肉汤g按GB4789. 28中4.62规定。4. 4血琼脂平板z按GB4789. 28中6规定。4. 5人血浆。4.6 0.25%氯化钙4. 7 灭菌生理盐水中华人民共和国卫生部199403-18批准488 1994-09-01实施4. 8 杆菌肤药敏纸片（含0.04单
3、位）。5检验程序葡萄糖冉攫掖肉汤或匹克氏肉汤GB 4 7 8 9. 11 - 94 幢样25g(mL)+225田L灭菌生理最本36土124h 链撇酶试验忏菌肤敏感试验观事槽血6操作步骤6. 1 样品处理36土124h 血平缸分纯培挥36土lC I 24h 革兰氏JI!色称取25g团体检样s称取25mL液体检样，加入225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。6. 2 般培养将上述混悬液吸取5mL，接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36土l培养24h，接种血平板，置36士l培养24h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上
4、分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肤敏感试验6.3形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径。.5 1 m，链状排列，链长短不一，短者48个细胞组成，长者2030个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关9液体培养中易呈伏链，在固体培养基中常呈短链，不形成芽泡，无鞭毛，不能运动。6. 4 培养特性该菌蕾养要求较高，在普通培养基上生长不良，在加有血液、血清培养基中生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5 0. 75 mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有24mm界限分明、无色透明的
5、溶血圈。6. 5 链激酶试验致病住乙型溶血性链球菌能产生链激酶（即溶纤维蛋白酶），此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。吸取草酸饵血浆。.2 mL，加O.8 mL灭菌生理盐水，混匀，再加入1824h36士1C培养的链球菌培养物o.5 mL及0.25%氯化钙0.25mL（如氯化钙已潮解，可适当加大至0.3% 0. 35%），振荡摇匀，置于36士1水浴中10min，血浆混合物自行凝固凝固程度至试管倒置，内容物不流动）。然后观察凝489 GB 4 7 8 9. 11 - 94 块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。草酸御人血浆配制z草酸御0.01 g放入灭菌小试管中，再加入5mL人血，混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸饵人血浆。6. 6.杆菌肤敏感试验挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌慑子夹取每片含有0.04单位的杆菌肤纸片，放于上述平板上，于36士1培养1824h，如有抑菌带出现即为阳性。同时用已知阳性菌株作为对照。附加说明g本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由北京市卫生防疫站负责起草。本标准主要起草人刘以贤。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。490
