1、中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验大肠菌群测定Microbiologicl examination of food hygiene Detection of Coliform bacteria 1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。本标准适用于食品中大肠菌群的测定。2术语GB 4789. 3-94 代替GB4789. 3-84 大肠离群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否得染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以100mL(g）检样内大肠菌群最可能数（
2、MPN）表示。3引用标准GB 4789. 28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂4 设备和材料4. 1 温箱，36士1。4.2冰箱：04。4.3 恒温水浴：44.5土0.5。4.4 天平。4.5 显微镜4.6均质器或乳钵。4. 7平皿直径为90mm. 4.8 试管。4.9 吸管。4. 10 广口瓶或一角烧瓶z容量为500mL。 4. 11 玻璃珠：直径约5mm。4. 12载玻片。4. 13酒精灯。4. 14试管架a中华人民共和国卫生部19940318批准1994-09 01实施457 GB 4789. 3 94 5培弊基和试J5. 1 乳糖胆盐发酵管z按GB4789. 28中4.9规定。
3、5.2伊红美蓝琼脂平板：按GB4789. 28中4.25规定。5. 3乳糖发酵管s按GB4789. 28中4.10规定。5. 4 EC肉汤z按GB4789. 28中4.11规定。5.5磷酸盐缓冲稀释液z按GB4789. 28中3.22规定。5. 6 生理盐水。5. 7革兰氏染色液：按GB4789. 28中2.2规定。6检验程序大肠菌群检验程序如下z检样稀帮乳精胆盐量醇曹36土lC,24土Zh产气大局菌群阴性伊虹莞蓝琼脂平极36土Ic, !8 24h 报告革主氏蝇色草兰民阴佐克芽胞杆菌产气 大脑菌群阳性报告报告7操作步骤7. 1 检样稀释轧糖发酵曹36土lC .24土Zh平产气大肠菌群阴性报告7
4、. 1. 1 以无菌操作将检祥25mL（或g）放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内4o扫GB 4789. 3 94 （瓶内予置适当数量的玻璃珠或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1 10的均匀稀释液。团体检样最好用均质器，以8000 10 000 r/min的速度处理1min，做成1 10的均匀稀释液。7. 1. 2 用1mL灭菌吸管吸取1 10稀释液lmL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1 100的稀释液。7. 1. 3 另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用l支1mL灭菌吸管。?. 1. 4 根据食品
5、卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。7. 2 乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1 ml，以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每稀释度接种3管，置36士1温箱内，培养24土2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大扬菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。7. 3分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36士l温箱内，培养1824h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。7.4 证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠商群菌落12个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36士
6、1温箱内培养24土2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。7. 5 报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每lOOmL(g）大肠菌群的MPN值。8 粪大肠菌群（faecalcoliform) a. 1 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物（见7.2条）转种于EC肉汤管内，黄44.5士0.2 c 水浴箱内（水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面），培养24士2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性g如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种子伊红美蓝琼脂平板上，置36土1培养1824h，凡平板上有典型菌落者，则证实为
7、粪大肠菌群阳性。a. 2结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索麦报告每100mL(g）粪大肠菌群的MPN值。大肠菌群最可能数（MPN）检索表阳性管数MPN 95%可倍限1 mL(g)3 0. 1 mL(g)3 0. 01 mL(g)3 100 mL(g) 下限上限。30 。.JO 5 90 。2 60 。3 90 。1 。30 :s 130 。1 1 60 。1 2 90 。1 3 120 459 阳性管数I mL(g)3 0.1 mL(g)3 。2 。2 。2 。2 。3 。3 。3 。3 I 。I 。I 。1 。1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 2 1 2 1 2
8、1 3 1 3 1 3 1 3 2 。2 。2 。2 。2 1 2 1 2 1 2 1 460 G- B- 。二表刊一续,ay- 0. 01 mL(g)3 。I 2 3 。I 2 3 。I 2 3 。1 2 3 。1 2 3 。1 2 3 。1 2 3 。1 2 3 吨唱“a“m nym MPN !OO mL(g) 60 90 120 160 90 130 160 190 40 70 110 150 70 110 150 190 110 150 200 240 160 200 240 290 90 140 200 260 150 200 270 340 下95%可信限限上限5 200 10 2
9、10 10 230 30 360 30 360 10 360 30 370 30 440 70 890 GB 4789. 3-94 续表阳性管数MPN 95%可信限I mL(g)3 0. 1 mL(g)3 o 01 mL(g)3 100 mL(g) 下限上限2 2 。210 40 470 2 2 I 280 100 I 500 2 2 2 350 2 2 3 420 2 3 。290 2 3 I 360 2 3 2 440 2 3 3 530 3 。230 40 1 200 3 。I 390 70 1 300 3 。2 640 150 3 800 3 。3 950 3 I 。430 70 2
10、100 3 I I 750 140 2 300 3 I 2 I 200 300 3 800 3 I 3 I 600 3 2 。930 150 3 800 3 2 1 I 500 300 4 400 3 2 2 2 100 350 4 700 3 2 3 2 900 3 3 。2 400 360 13 000 3 3 I 4 600 710 24 000 3 3 2 11 000 1 500 48 000 3 3 3 注24000 注g本表采用3个稀稀度ClmL(g）、0.1mL(g）和0.01 mL(g刀，每稀释度3管表内所列幢样量如改用10mL(g）、lmL(g）和0.1 mL(g）时，表内数字应相应降低10倍，如改用OI mL (g）、0.01 mL(g）和0.001 mL(g）时，则表内数字应相应增加JO倍其余可类推附加说明s本标准由卫生部卫生监督司提出本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人刘宏道。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。461
