1、中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验Microbiological examination of food hygiene Examination of Vib巾parahaemolyticus1 主题内容与适用范围本标准规定了副溶血性弧菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验。2 51用标准GB 4789. 28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3 1 试管：20mm 200 mm,15 mm 100 mm, 3. 2 吸管1mL,5 mL,10 mL。3.3平皿皿底直径90mm。3.4 广口瓶或三角瓶。3.5 电动均质器或乳钵
2、。3.6酒精灯。3. 7接种灯和接种环。3.9试管架。3. 10载玻片。3. 11 温箱。3. 12 显微镜。4培养基和试？”4. 1 氯化纳结晶紫增菌液z按GB4789. 28中4.39规定。4. 2 氯化纳糖琼脂z按GB4789. 28中4.40规定。4. 3 嗜盐菌选择性琼脂按GB4789. 28中4.41规定。4. 4 3. 5 %氯化纳三糖铁琼脂按GB4789. 28中4.42规定。4.5氯化纳血琼脂s按GB4789. 28中4.43规定。4. 6 嗜盐性试验培养基s按GB4789. 28中4.44规定。4. 7 3. 5 %氯化销生化试验培养基：按GB4789. 28中4.45规定
3、。4. 8革兰氏染色液s按GB4789. 28中2.2规定。4.9 甲基红试剂s按GB4789. 28中3.4规定。中华人民共和国卫生部199403 18批准178 GB 4789. 7-94 代替GB4789. 7 84 1994 09-01实施. GB 4789. 7 94 4. 10能基质试剂：按GB4789. 28中3.13规定。4. 11 v P试剂2按GB4789. 28中3.4规定。5检验程序副溶血性弧菌检验程序如下26操作步骤氧化饷结晶章增菌檀JCOmL睛片草兰氏塾包镜检形态样品25g 加225mL3.5%灭菌盐水，磨碎37C 8 16h 生化试验动物试验报告辄化铺m;糖琼脂平
4、植租选择性琼酶平极37，1824h 3. 5%氧化铺三糖铁斜面37，1824h 嘈盐性试验37，24h 6. 1 分离培养z首先称取样品25g, :IJU 225 mL3. 5 %灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化纳琼脂平板和嗜盐菌选择性琼脂平板各1个，同时取10mL，加入100mL增菌液中，放37816h 培养后，涂上述平板进行分离，于37Cl824h培养后取出观察。6. 2 挑取上述可疑菌落，转种3.5%氯化纳三糖铁斜面，37、24h观察结果。6.3涂片镜检2将三糖铁培养基反应可疑者（底层变黄葡萄糖产酸不产气，斜商不变乳糖煎糖不分解，有动力，不产生硫化氢）进行涂片草兰氏染色镜检形
5、态。6. 4 嗜盐性试验z将上述可疑培养物分别接种于不同浓度的盐陈水中，3724h培养后观察生长情况，在无盐和10%以上盐的脐、水中不生长，在7%盐的陈水中生长良好者进行下列有关试验。6. 5 生化试验分别接种各类生化培养基，放37，除V-P、能基质、甲基红试验培养48h后加试剂观察外，其他均可在24h观察。179 GB 4789. 7-94 表l面l溶血性弧菌的生化学性状葡萄糖产酸十V-P 葡萄糖产气+ 自由基质!If.、糖赖氨酸乳糖鸟氨酸甘露醇+ 精氨酸硫化氢熔血甲基红+ 十十一注z十阳性，一阴性，一多数阳性，少数阴性。表2副溶血性弧菌主要性状与其他弧菌的鉴别名称葡萄糖产气氧化酶被基质鸟氨
6、酸精氨酸赖氨酸肌醇甘露醇禀糖乳糖vtp 明胶泳动硝酸盐R半就糖音鼠李糖甘露糖阿拉伯被糖%M川水8陈盐6无盐陈水副榕血性弧菌斗+ 牛一+ d + 一一卡d I+ + V parahaemolytcu 溶藻性弧菌十十V. alginolyticu 0，霍乱弧菌一十十+ d (d) + + + 十一Id-V. cholera), 非o，霍乱弧商十一十+ + + d (d) 十一d一+Id V. cholerae non O, 拟态弧菌十一十十(d）一十一一十一Id V mtmtcus 河弧菌+ d一-d十二十+ d d + + - I+ d V. fluiali 创伤弧菌十十十dd 十十- I d
7、V uuluificus 梅氏弧菌d + d + + d + + d - d d一IdV mtschn是ouii霍利斯弧菌一一一一 二十十一Id一V. holli,ae V. damsela + - d 一一二十一一Id一注十90%以上阳性、90%以上阴性世11%89%阳性，十迟缓阳性；（d)JI%89%迟缓阳性7动物试验将上述各类反应的副溶血性弧菌接种3.5%氯化纳陈水，经371618h培养后，小鼠腹腔注射0. 3 mL，观察23d，将死亡小鼠进行解剖并做分离培养。180 GB 4789. 7 94 附加说明g本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人周桂莲本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品E生监督检验所负责解释。E 181
