1、ICS 67.200.10 X 14 家标GB/21495-2008/路。7847: 1987 也可倚靠跑得II员警II员1，阳工烯饱和脂肪酸的制Animal and vegetable fas and oils一Determination of polyunsaturated fatty acid with a cis ,cis 1争4-dienestructure (ISO 7847 : 1987 ,IDT) 2008四03-06发布2008-08-01实施数码防伪华人民共和国国家质量监督检验检菇均发布国国家标准化管理委员到GB/21495-2008/1807847:1987 目U吕本标准
2、等问采用ISO7847 :1987动植物油脂具有烦，顺1，4一二烯结构的多不饱和脂肪酸的测定)(英文版)。为便于使用，本标准作了下列编辑性修改:a) 将本国际标准改为本标准;b) 用小数点气代替作为小数点的逗号C) 删除囱际标准的前言;d) 用符号L代替1表示升;e) 用GB/T15687代替了ISO6610 本标准的附录A为规范性附录。本标准由国家粮食局提出。本标准由全国棋油标准化技术委员会归口。本标准起草单位:国家粮食局科学研究院。本标准主要起草人:张疏、薛雅琳、祖丽亚。I G/21495-2008/ISO 7847:1987 1 范围动植物油脂具有JII页，JII页1，4-二烯结构的多不
3、饱和脂肪酸的测定本标准规定了酶法测定动植物油脂中f页，顺1，4-二烯结构多不饱和脂肪酸的方法，实际上就是指具有3和6型多不饱和结构的亚油酸(9，12-十八碳二烯酸)和亚麻酸(9，12，15-十八碳三烯酸)系列。其结构是:H HH H / / C=C C=C / f员_/ f顶一C，. CH2 ，. C一/1 1 本标准不适用于油膳中8和9型多不饱和脂肪酸及含有支链脂肪酸的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注臼期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然币，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版
4、本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 15687 油脂试样制备(GB/T15687-1995 , eqv ISO 661 :1 989) ISO 5555动植物油脂取样3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 jl顷，jl顶1，4晌二烯脂肪酸cis , cis 1, 4-diene fatty acids 本标准规定的方法所测定的脂肪酸，以样品的质量分数表示。4 原理在室温条件下，样品皂化后产生脂肪酸，具有j顷，顺1，4-二烯结构的脂肪酸被酶促氧化，产生的氧化酸在最大吸收波长(约235nm)下测定吸光度，同时做样品空白试验，计算样品中多不饱和脂肪酸的含量。5
5、试剂和材料所用试剂均为分析纯，水为蒸馆水或同等纯度的水。5. 1 正己烧5.2 盐酸溶液c(HCD勾0.5mol/L。5.3 氢氧化饵-z醇溶液c(KOH)o. 5 mol/LJ 5.3. 1 贮备液称取65g氢氧化饵(86%氢氧化押)溶于约80mL水中，冷却后稀释至100mL。1 GB/T 21495-2008/ISO 7847: 1987 5.3.2 稀释液吸取5mL贮备液(5.3.1)用体积分数为95%的乙醇稀释至100mL。此溶液应临用时现配。5.4 珊酸锦缓冲液c(K3B03) =1. 0 mol/L(pH = 9.0)。称取61.9 g棚酸和25.0g氢氧化饵(86%氢氧化饵)加热
6、搅拌溶于约800mL水中，冷却至室温，测定pH，如有必要，可用盐酸或氢氧化饵溶液调pH至9.0，然后用水稀释至1000 mLo 5.5 珊酸押缓冲液5.6. 1 脂肪氧化酶酶的活力至少为51.2X10-4mol亚油在冻干状态下，制剂得到更5.6.2 贮备液称取相当于该贮备液在5.6.3 工作液5. 7 脂肪氧化吸取数毫升1(6.6)中加热至少5.8 参比油如葵花籽油或书表示)，并假定其全为注:元位置异构和几5.9 氮气纯度不低于99.5%( 6 仪器所用玻璃器皿应非常干净。实验室常用仪器，尤其是下列仪器。6. 1 具塞容量瓶:100 mL。6.2 单标移液管:1mL , 10 mL , 20
7、mL。6.3 刻度移液管:1mL , 10 mL。件下，每分钟可氧化00 U/mg范围内的酶6.4 具塞试管:10mL，干燥。可用具塞分光光度计比色杯(见6.8)替代(见9.6.2的注1)。6.5 离心机:10mL离心试管。6.6 水浴:沸腾。6. 7 水浴:温度保持在(50士2)oc。6. 8 分光光度计:可于235nm测量吸光度，配有10mm石英比色杯。6.9 分析天平。7 取样按ISO5555进行。8 试样制备按GB/T15687进行。9 分析步骤9. 1 验证实验在分析试样时，建议与、9.2 试样称取50mg r-.J 200 100 mL容量瓶A(6.注:当所取试祥9.3 皂化用单标
8、移液的空气。加塞，如果样品分钟，以加速注:附录A9.4 测试液皂化后，10 mL盐酸溶J必要，可于混同离除去沉淀。用单标移液100 mL容量瓶(6 很少时，则应吸移2用单标移液管(6匀，尽量避免产生泡沫注:皂化后，得到皂的在移液管上，可能导致转移了9.5 比对实验GB/21495-2008/ISO 7847:1987 8章)，精确至0.1mg，于(5. 9)置换容量瓶中水浴(6.7)中加热数、饵缓冲液(5.4)和免产生泡沫。如有离心试管中，离心分有的多不饱和脂肪酸 B，加水至刻度。加塞混中皂的浓度约为10g/mL。泡沫移到另一个容量瓶中时，如有泡沫粘附测定(9.7)同时进行比对实验。采用同样分
9、析步骤，但以0.1mL脂肪氧化酶灭活液(5.7)代替脂肪氧化酶稀释液(5.6)来制备样品补偿溶液。9.6 标准工作曲线9.6. 1 制备标准溶液称取相当于含约100mg多不饱和脂肪酸的参比油于100mL容量瓶(6.1)中，精确至0.1mg。按照9.3及9.4的第一小节进行皂化并稀释至刻度。用单标移液管(6.2)吸取10mL上述溶滚至第二个100mL容量瓶(6.1)中，用刻度移液管(6.3)加入18mL l. 0 mol/L棚酸饵缓冲液(5.4)，用水稀释至刻度。用刻度移液管(6.3)从第二个容量瓶中依次吸取1mL, 2 mL , 4 mL , 6 mL ,8 mL和10mL溶液，分GB/T 2
10、1495-2008/ISO 7847: 1987 别置于6个100mL容量瓶(6.1)中，均用0.2mol/L础酸押缓冲液(5.5)稀释至刻度。9.6.2 酶促氧化用1mL刻度移液管(6.3)分别吸取0.1mL脂肪氧化酶稀释液(5.6)置于6支试管(6.4)中(见注1)。在每支试管中分别添加3mL相应的标准溶液(每支试管一个稀释度)，轻轻震荡使溶液混匀(见注2)。将试管静置20min-30 min。注1.氧化过程可在具塞分光光度计比色杯(见6.8)中进行，以免在测量吸光度前再将溶液转移到比色杯中。注2:试管中样品的处理很重要。将内容物初次混合后，不要再进一步混合。进一步混合将导致标准溶液、样品
11、补尝溶滚及测试溶液的吸光度增加。此外如果比色杯中溶液一旦被倒掉，并装入其他溶液，则不能核对该测量值是否正确。溶液处理过程中造成吸光度增加的原因尚无法解释。因此每个实验室要确保分析步骤一致。9.6.3 分光光度计测量将每个试管中的内容物转移到石英比色杯(见6.的中。使用分光光度计(6.的，于最大吸光波长(约235nm)下测量每个标准溶液的吸光度，以样品补偿溶液(见9.5)调节仪器零点。取每个标准溶液两个吸光度读数的平均值。9.6.4 绘制标准曲线以吸光度的平均值对由己知组成的参比油计算所得多不饱和脂肪酸的质量作图。绘出一条通过所有作图点的直线，该直线应通过原点。9. 7 测定9.7. 1 酶促氧
12、化用1mL移液管(6.3)吸移0.1mL脂肪氧化酶稀释液(5.6)至试管(6.4)中(见9.6. 2的注1)。再从容量瓶B中吸取3mL测试溶液(9.4)加至试管中，轻轻震荡使溶液混匀(见9.6.2的注2)。将试管静置20min-30 mino 9.7.2 分光光度计测定将试管中的样品转移至石英比色杯(见6.8)中，用分光光度计(6.的，于最大吸收波长(约235丑m)下测量测试溶液的吸光度，用样品补偿溶液(见9.5)调节仪器零点。取两个吸光度读数的平均值，从标准工作曲线(9.6.4)中读出脂肪酸的质量。注:以补偿溶液调节零点可以补偿由于样品中原有的共辄二烯酸产生的吸光度。样品补偿洛液的吸光度应以
13、水为参比进行核对，如果与测试溶液相比，此值太高，将使精密度降低。9.8 测定次数同一个试样测定两次。10 结果计算10. 1 计算方法试样中多不饱和脂肪酸的含量(X)，数值以质量分数(%)表示，按下列公式计算:nu 八V-2-4 m-h 一X 式中:X一一试样中多不饱和脂肪酸的含量，单位为克每百克(g/100g); mo一一试样的质量，单位为毫克(mg); ml一一一从标准工作曲线上读取的多不饱和脂肪酸的质量，单位为毫克(mg); V一一从容量瓶A中所吸取液体(通常为1mL)的毫升数值。注:按此法得到的结果是整个油脂中多不饱和腾肪酸的含量，而非油脂中脂肪酸总量中多不饱和脂肪酸的含量。10.2
14、重复性当多不饱和脂肪酸含量在10%-70%(质量分数范围内时，同一分析者，在同一个实验条件下，对4 GB/T 21495-2008/ISO 7847: 1987 同一样品，快速连续进行两次独立测试，结果相差不能超过3.5%(质量分数)。11 试验报告测定报告应详细说明使用的方法及测试结果，清楚标明结果的表示方法。应注明本标准中未规定的任何操作细节，或可选择的操作细节，及可能影响实验结果的任何意外情况的细节。测定报告应包括完整识别样品所需的全部信息。5 GB/T 21495-2008/ISO 7847: 1987 附录A(规范性附录)替代的皂化方法用数毫升正己烧(5.1)溶解试样(9.2)，用同
15、样的溶剂稀释至刻度，并混匀。用单标移液管(6.2)吸取1.0 mL该溶液至已事先用氮气吹洗的100mL容量瓶B(6.1)中。如预期样品中多不饱和脂肪酸的含量很低，则吸取2mL,._, 4 mL溶液至容量瓶B中。在缓和的氮气流中使溶剂完全蒸发。向容量瓶B内的元溶剂样品中加2mL氢氧化何一乙醇溶液(5.3)，然后加塞。将容量瓶置于暗处，皂化至少4h，以后按9.7进行。6 卜户.卜.q卜卢hM咀阳ccnuii可qFAUrF国U华人民共和国家标准动植物油脂具有!眠，I国1，4-二烯结构的多不饱和脂肪酸的测定GB/T 21495-2008/ISO 7847: 1987 国中e开中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销头印张O.75 字数11千字2008年5月第一次印刷开本880X12301/16 2008年5月第一版-开书号:155066 1-31306 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 21495-2008
