1、ICS 11.080.99 G 70 -GB/T 21510 2008 A 目已、霄，Antimicrobial property detection methods for nano-inorganic materials 2008-03-13发布2008-08-01实施共发布数码防伪中华人民共和国家标准纳米无机材料抗菌性能检测方法GB/T 21510 2008 峰中国标准出版社出版发行北京复兴门外三皇河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X 1230 1/16 印张0.75字数18千字200
2、8年5月第一版2008年5月第次印刷毛书号:155066 1-31373 定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533G/T 21510一2008目。本标准的附录A、附录B、附录C均为规范性附录。本标准由全国纳米技术标准化技术委员会纳米材料分技术委员会提出并归口。本标准负责起草单位:国家纳米科技中心、中国科学院过程工程研究所、北京赛特瑞科技发展有限公司、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、中国科学院理化技术研究所、中国抗菌材料及制品行业协会。本标准起草单位:中国科学院抗菌材料检测中心、上海润河纳米材料科技有限公司、南京海泰纳米材料
3、有限公司、江苏常泰纳米材料有限公司、波司登股份有限公司、南通纵横化工有限公司参加起草。本标准主要起草人:陈运法、刘秀岩、季君晖、付玲、王开利、任玉枝、吴镇江、丁培。I GB/T 21510 2008 纳米无机材料抗菌性能检测方法1 范围本标准规定了纳米无机材料抗菌性能的术语和定义、试验方法、试验数据处理、检测结果计算、检测报告和注意事项等。本标准适用于纳米抗菌粉末以及以纳米抗菌粉末为抗菌功能组分(结构单元)的材料，如纤维、织物、塑料、涂料和陶瓷等。其他材料的抗菌性能检测也可以参照本标准执行。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的
4、修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 19619 纳米材料术语GB/T 13221 纳米粉末粒度分布的测定X射线小角散射法中华人民共和国卫生部化妆品卫生规范)(2002年版)3 术语和定义GB/T 19619确立的以及下列术语和定义适用于本标准。3. 1 抑具有抑制或妨碍细菌或真菌生长繁殖及其活性的作用。3.2 杀具有杀灭细菌或真菌生长繁殖的作用。3.3 抗具有杀灭或妨碍细菌或真菌生长繁殖及其活性的作用。3.4 纳米抗菌粉末符合GB/T13221要求，并具
5、有抗菌作用的离散纳米颗粒的集合体。3.5 纳米抗菌材料纳米抗菌粉末以及以纳米抗菌粉末为抗菌功能组分(结构单元)的材料。4 试验方法4. 1 纳米粉末抗菌性能的试验方法按附录A规定的方法进行。4.2 纤维、织物、塑料粉体和微孔滤材等材料抗菌性能的试验方法按附录B规定的方法进行。4.3 塑料、陶瓷、捧膜、板材和金属等硬质表面材料抗菌性能的试验方法按附录C规定的方法进行。5试处理将各平板菌落数乘以稀释倍数，即为样本实际回收菌落数。1 GB/T 21510 2008 6 检测结果计6. 1 计算菌落数将各平板菌落数乘以稀释倍数，即为样本实际回收菌数。6.2 计算抗菌率抗菌率R按式(1)计算，具体的评价
6、指标由相应的产品标准规定。R = A . B X 100 % =一一?一X ( 1 ) 式中:R一一抗菌率，%; A一一-对照样品与受B 试验样品与受7 检测报告检测报告应包括a) b) 受试菌株c) 接触时间d) 检测日 、加入e) 检测结抗菌率应f) 检测人员) 送检单h) 生产单8注8. 1 微生物试验操8.2 菌液滴染样片8.3 振荡前须将振荡8.4 粉末样品时，2 片外、后平均回收菌数，时间后平均回收菌数，固定牢，口罩，破。人防护。率保留位每毫升(cfu/mL); 位每毫升(cfu/mL)。一位;附录A规范性附录粉末抗菌性能试验方法振荡法A. 1 适用范围本试验方法适用于测定纳米粉末
7、。A.2 试验设备和材料A.2. 1 试验设备A2型二级生物安箱(0250)oCJ、冷荡培养箱(300r/min)、恒温培波炉拉品也灌注700wtt却璋圣感A. 2.2 试验器材三角烧瓶容( 100 mL)、吸管A. 2.3 培养基还A. 2. 3. 1 普通蛋白豚牛肉膏氯化锅蒸馆水调pH值至.7. 2 用途:用于A. 2. 3. 2 普通蛋白陈1 牛肉膏5 g 氯化锅5 g 琼脂20 g S(JIJ mL、25 mL、1汤培养基mL 7.4，高压萄球菌培养基蒸馆水1 000 m 调pH值至7.27. 4, 用途:用于金黄色葡萄球菌A. 2. 3. 3 沙堡氏琼脂培养基蛋白豚10 g 葡萄糖4
8、0 g 琼脂20 g 蒸锚水1 000 mL 菌培养。210C ,20 mino 。调pH值至5.45. 8，高压蒸汽灭菌115oC , 30 min 0 用途z用于白色念珠菌的培养。GB/T 21510 2008 、压力寒气灭菌锅、电热恒温干烤01 g 、汪黯(lmmX180 mm)、量筒 A. 2. 3. 4 含0.1%C体积分数吐温-80的磷酸盐缓冲液PBS，O. 03 mol/L, pHC7. 2.47.4) 磷酸氢二铀(Na2HP04，无水)2. 83 g 磷酸二氢饵(KH2P04)1.36 g 非离子表面活性剂吐温-801. 0 g 3 G/T 21510 2008 蒸悟水1 00
9、0 mL 高压蒸汽灭菌121C, 20 min, 用途:用于菌液和试验样本的稀ItQ A. 2. 4 用标准菌种金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus) A TCC6538、大肠杆菌(escherichiacoli) 8099或ATCC25922、白色念珠菌(candidaalbicans) A TCC10231 0 注:根据产品的使用要求，可选用其他菌种或菌株作为试验用菌，但所有菌种或商株必须由国际微生物菌种保藏中心或国家相应菌种保藏管理中心提供。A. 2. 5 对照样本二氧化硅粉末，要求粉末尺度不大于100nm，纯度为98%99%，不具有抗菌作用且对试验结果的判定无影响。
10、A.3 试验程序A. 3. 1 菌种斜面的制备A. 3. 1. 1 菌种活化取干菌种管，在元下打开，以毛细吸管加入适量营养肉汤，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散。取含5.0 mL10. 0 mL营养肉汤培养基试管，滴入少许菌种悬液，置37C士lC培养18h24 ho A. 3. 1. 2分用接种环取第一代培养的菌悬液，划线接种于营养琼脂培养基平板上，在37C士lC培养18h 24 ho A. 3. 1. 3 纯化挑取上述第二代培养物中典型菌落，接种于营养琼脂斜面，在37C+1C培养18h24h，即为第三代培养物。A. 3. 1. 4 菌种将菌种接种于营养琼脂培养基斜面上，在37C士lC培养24h后
11、，在0C5C下保藏，一般不超过一个月转种1次。怀疑有污染时，应以菌落形态、革兰染色与生化试验等方法进行鉴定。A. 3. 2 试验步A. 3. 2. 1 菌悬液的制备取菌种第三代至第八代的营养琼脂培养基斜面18h24 h新鲜培养物，用5.0mL吸管吸取3. 0 mL5. 0 mL的0.03mol/L磷酸盐缓冲液加入斜面试管内，反复吸吹，洗下菌苔。将洗下的菌液移至另一试管中，用振荡器混匀后，用0.03mol/L磷酸盐缓冲液稀释至适宜浓度(约为105cfu/mL)。细菌繁殖体悬液应保存在4C冰箱内备用且保存不应超过4ho A. 3. 2. 2 对照组样液的制备称取对照样本0.5g士0.05.g粉末放
12、入三角烧瓶中，加入95mL含0.1%吐温-80的磷酸盐缓冲液，混匀后，再加入5.0mL预制菌悬液。A. 3. 2. 3 试验组样液的制备称取试验样本0.5g+O. 05 g粉末放入三角烧瓶中，加入95mL含0.1%吐温-80的PBS，混匀后，再加入5.0mL预制菌悬液。A. 3. 2.4 对照样本0接触时间活菌计数振蔼前，将对照样液经适当稀释，吸取1.0mL接种于灭菌平皿中，每样液平行接种2个平皿，倾注45C 55C己溶化的营养琼脂培养基，待琼脂培养基凝固后翻转平板，将上述平板置于37C士lC恒温培养箱中，做菌落计数。A. 3. 2. 5 握荡接触培养将含对照样本和试验样本的三角烧瓶固定于恒温
13、振荡培养箱的摇床上，在作用温度37Cl条4 G/T 21510 2008 件下，以150r/min速度，检测样品需要稀释后使用的材料振荡接触1hu4 h，不需要稀释直接使用的材料振荡接触4h24 ho A. 3. 2. 6 握荡接触一定时间后活振荡后的对照样液和试验样液经适当稀释后，分别取1.0 mL的样液接种于灭菌平皿中，每样液平行接种2个平皿，倾注45.C55.C己溶化的营养琼脂培养基，待琼脂培养基凝固后翻转平板，将上述平板置于37.C士1.C恒温培养箱中，做活菌培养计数。A. 3. 2. 7 阴性对照组阴性对照组分别吸取试验同批次稀释液、培养基与试验样本一起放入37C-l-1.C恒温培养
14、箱中培养。观察有无污染。A. 3. 2. 8 观察结果对细菌培养46h48 h后观察最终结果，对白色念珠菌培养70h72 h后观察最终结果。菌落计数按中华人民共和国卫生部化妆品卫生规范(2002年版)中菌落总数测定方法。A. 3. 2. 9 试验次数以上试验重复3次。A.4 试验要求A. 4. 1 0接触时间对照组的菌落数应在1X 104 cfu/mL5 X 104 cfu/mL。阴性对照应无菌生长。A. 4. 2 对照样本不应有明显的抗菌作用。经振荡后对照组回收菌落数不应低于0接触时间回收菌落数的10%，否则试验无效。5 GB/T 21510 2008 附录B(规范性附录)材料抗菌性能试验方
15、法振荡法B. 1 适用范围本试验适用于测定溶出性和非溶出性的纤维、织物、塑料粉体和微孔滤材等材料的抗菌性能。B.2 设备和材料B.2. 1 试验设备、试验器材和试验用标准菌种试验设备、试验器材和试验用标准菌种的要求应符合A.2. 1A. 2. 4的规定。B.2.2 对照样本对照样本为纯棉平纹白布剪取的样片(32支纱)，样片本身不具有抗菌作用且对试验结果的判定元影响。试验前应进行脱脂处理:将纯棉平纹白布放在含洗涤剂的水中煮沸30min，用自来水凛洗3次;然后用蒸锢水煮沸5min后，再漂洗、晾干、贾平;在剪开前，按制备样片的大小抽去经纬纱，再接抽纱开。B.3 试验程序B. 3. 1 菌种斜面的制备
16、菌种斜面的制备应符合A.3. 1的规定。B.3.2 试验步B. 3. 2. 1 将抗菌织物样品剪成10mmX 10 mm，抗菌塑料、微孔滤材、长丝、短纤、纱线按原状态采用，称取抗菌样本1.0g+0.05g放入三角烧瓶中，加入95mL含0.1%吐温-80的PBS，提匀后，再加入5.0 mL预制菌悬液。B.3.2.2 菌悬液的制备、对照组样液的制备、对照样本0接触时间活菌计数、振荡接触培养、振荡接定时间后活菌计数、阴性对照组、观察结果、试验次数等应符合A.3. 2. 1 A. 3. 2. 2、A.3.2.4A. 3. 2. 9的规定。B. 4 试验要求试验要求应符合A.4规定。6 GB/T 215
17、10 2008 附录C(规范性附录)材料抗菌性能试验方法贴膜法C. 1 适用范围本试验适用于测定非吸水性且可制成有一定面积的材料或涂层，如塑料、陶廷、漆膜、板材和金属等硬质表面材料的抗菌性能。C.2 试验设备和材料C. 2. 1 试验设备A2型二级生物安全柜、恒温培养箱、压力蒸汽灭菌器、电热恒温干烤箱(0 250) CJ、冷藏冰箱、波炉(输出功率二三700W)。C. 2. 2 试验器材三角烧瓶(容量为500mL、250mL)、平皿(直径为90mm)、试管(18mm X 180 mm)、量筒(1 00 mL)、吸管(10mL、5mL, l mL)、移液管(精确度0.01mL)、酒精灯、试管架、7
18、0%乙醇(体积分数)和聚乙烯薄膜等。C.2.3 培养基及试剂和试验用标准菌种培养基及试剂和试验用标准菌种应符合A.2. 3和A.2. 4的规定。C.3 试验程序C. 3. 1 菌种斜面的制备斜面的制备应符合A.3. 1规定。C.3.2 试验步C. 3. 2. 1 覆盖膜的覆盖膜采用聚乙烯薄膜，尺寸为40mm X 40 mm ( + 2 mm)，厚度为o.05 mmO. 10 mm。若试验样本规格较小，可按其表面帜减小该覆盖膜尺寸，以使菌悬液不溢出为适。C.3.2.2 对照样本对照样本用卫生级高密度聚乙烯(HDPE)注塑成型，标准尺寸为50mm X 50 mm ( + 2 mm) ，厚度不大于5
19、mm，要求其本身不具有抗菌作用且对试验结果的判定元影响。C.3.2.3 试验组样本的制备将试验样本制成标准尺寸为50mmX50 mm(士2mm)，若试验样本规格较小，应不小于20mmX 20 mm。C.3.2.4 样晶的预取对照样品和受检样品，用70%乙醇潜液擦拭其表面，5min后用元菌蒸馆水冲洗，自然干燥。若不适于消毒剂处理的样本，可根据样品特性直接用无菌蒸馆水冲洗或采用其他方法消毒，但不得影响其抗菌性能和干扰检测结果。C.3.2.5 制备取菌种第三代至第八代的营养琼腊培养基斜面18h 24 h新鲜培养物，用5.0mL吸管吸取3.0 mL 5.0 mL的0.03mol/L磷酸盐缓冲液加入斜面
20、试管内，反复吸吹，洗下菌苔。将洗下的菌液移至另一试管中，用振荡器棍匀后，用0.03mol/L磷酸盐缓冲液稀释至适宜浓度(约为105cfu/mL)。细菌繁殖体悬液应保存在4C冰箱内备用且保存不得超过4ho CON-oENH白。GB/T 21510 2008 求0接触时间对照组的菌落数应在1X 104 cfu/片5X104cfu/片。阴性对照应元菌生长。同一对照样品的3个平行活菌数值要符合以下要求:最高对数值一0.3 C. 4 C. 4. 1 C. 4. 2 一定时间后对照组回收菌落数不应低于0接触时书号:155066 1-31373 C. 3. 2. 6 接种菌液将对照样品和受检样品分别放入灭菌
21、平皿中，吸取O.2 mLO. 5 mL试验菌液分别滴加在对照样品和受检样品表面，每个样品做3个平行样。用灭菌摄子夹起覆盖膜分别盖在样品表面并且要铺平，不得有气泡，使菌液均匀接触样品，盖好平皿，在3rc士lC、相对湿度90%条件下接触培养16h24 h。若检验的样品采用的是光触媒类抗菌剂，应根据样本试验要求，在恒温培养箱中安装光源。C. 3. 2. 7 菌落计数经接触培养16h24 h的样品，分别加入20mL洗脱液，反复洗脱3次样品及覆盖膜，将洗脱液移入三角烧瓶中，摇匀后经适当稀释，每样液平行接种2个平皿，倾注45C55C己禧化的营养琼脂培养基，待琼脂培养基凝固后翻转平板，将上述平板置于3rc士lC恒温培养箱中，做活菌培养计数。C. 3. 2. 8 阴性对照组阴性对照组应符合A.3.2.7的规定。C. 3. 2. 9 观察结果观察结果应符合A.3. 2. 8的规定。C.3.2.10 试验次数以上试验重复3次。侵权必究晤专有C. 4. 3 对照样本不应有明显的抗菌作用。经接间回收菌落数的十分之一，否则试验无效。, 4. 00元定价:GB/T 21510-2008
