1、ICS 07.100.30 C 53 中华人民共和国国家标准2008-11-21发布G/T 4789.2-2008 代替GB/T4789.2 2003 食品卫生微生物学检验菌落总数测定Microbiological examination of food hygiene一Aerobic plate count 中华人民共和国卫生部坐立中国国家标准化管理委员会认W标准搜搜网w:MT2009皿03-01实施GB/T 4789.2-2008 目。吕本标准的第一法修改采用美国食品药品管理局CFDA)(细菌学分析手册第3章菌落总数(2001年)CBacteriological Analytical Ma
2、nual, Chapter 3: Aerobic plate count , 2001) ，第二法修改采用国际分析家学会(AOACINTERNATIONAL) AOAC 990. 12(食品中菌落总数Petrifilm测试片法(1994年)(AOAC Offical Method 990. 12 , Aerobic plate count in foods dry rehydratable film Petrifilm aerobic count plate method , 1994)。本标准的第一法与FDA/BAM方法的区别如下:一一平板菌落计数的适宜范围由25CFU,_,250 CFU改
3、为30CFU,._ 300 CFU; 一一培养温度由35oc士1oc改为36oc士1oC; 一一10倍稀释，由10mL样品匀液加入到90mL稀释液，改为1mL样品匀液加入到9mL稀释液;一未采用螺旋平板计数法。本标准的第二法与AOAC990.12的区别为:培养温度由35oC士1oC改为36oC士1oC。本标准代替GB/T4789.22003(食品卫生微生物学检验菌落总数测定。本标准与GB/T4789.2一2003相比主要修改如下z一一培养基由营养琼脂改为平板计数琼脂;一一对菌落总数的计算公式进行了修改;一一增加了第二法菌落总数民trifilm测试片法。本标准的附录A为规范性附录。本标准由中华人
4、民共和国卫生部提出并归口。本标准由中华人民共和国卫生部负责解释。本标准负责起草单位:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准参与起草单位:中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国内蒙古出入境检验检疫局、江苏省疾病预防控制中心、上海市疾病预防控制中心。本标准主要起草人:J秀梅、卢行安、刘中学、袁宝君、刘弘、陈敏、田静。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:一-GB4789.2-1984、GB/T4789.2-1994、GB/T4789. 2-2003 0 标准搜搜网阳咽.bZ5口50.corn各类标准行业资料免费下载I GB/T 4789.2-2008 食品卫生微生物学检验菌落总数
5、测定1 范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。本标准适用于各类食品中菌落总数的测定。2 术语与定义下列术语和定义适用于本标准。2. 1 菌落总数aerobic plate count 食品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等)，所得1 mL(或1g)检样中形成菌落的总数。本标准规定的培养条件下所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下:3. 1 恒温培养箱:36oc士1oC , 30 oC士1oC。3.2 冰箱:2oC r-. 5 oC。3
6、.3 恒温水浴箱:460C士1oC。3.4 天平:感量0.1go 3.5 均质器。3.6 振荡器。3. 7 元菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。3.8 元菌锥形瓶:容量250mL、500mL。3.9 元菌培养皿z直径90mm。3. 10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11 放大镜或(和)菌落计数器或Petrifilm 1)自动判读仪。4 培养基和试剂4. 1 平板计数琼脂培养基:见第A.1章。4.2 磷酸盐缓冲液z见第A.2章。4.3 元菌生理盐水z称取8.5g氯化纳溶于1000 mL蒸馆水中，121oC高压灭菌15mino 4.4
7、1 mol/L氢氧化销(NaOH):称取40g氢氧化锅溶于1000 mL蒸馆水中。4.5 1 mol/L盐酸(HCl):移取浓盐酸90mL，用蒸馆水稀释至1000 mL。4. 6 Petrifilm 菌落总数测试片和压板。1) Petrifilm 是由3M公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。1 标准搜搜网www.bzsoso.COITl各类标准行业资料免费下载GB/T 4789.2-2008 第一法平板菌落计数法5 检验程序菌落总数的检验程序见图106 操作步骤6. 1 样品的稀释检样25
8、 g (或25mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择2个-3个适宜样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内每皿中加入15mL-20 mL 平板计数琼脂培养基，混匀培养36 C :!:1 .C 48 h:!: 2 h 计算各平板菌落数计算菌落总数报告图1菌落总数的检验程序6. 1. 1 固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的元商均质杯内，8 000 r/min-10 000 r/min均质1min- 2 min，或放入盛有225mL稀释液的元菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min- 2 min，制成1: 10的样品匀液。6. 1.2 液体样品z以无
9、菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的元菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1: 10的样品匀液。6. 1. 3 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1: 10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的元菌试管中注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1: 100的样品匀液。6. 1.4 按6.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一次1mL元菌吸管标准搜搜网www.bzsoso.COITl各类标准行业资料免费下载GB/T 4789.2-2008 或吸头。6. 1.5 根
10、据对样品污染状况的估计，选择2个.，3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液), 在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液加入两个元菌平皿内。同时分别取1mL 稀释液加人两个元菌平皿作空白对照。6. 1. 6 及时将15mL., 20 mL冷却至460C的平板计数琼脂培养基(可放置于46oC士1oC恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。6.2 培养6.2. 1 琼脂凝固后，将平板翻转，36oC士1oC培养48h士2ho水产品300C士1oC培养72h士3人6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(
11、约4mL)，凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。6.3 菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits , CFU)表示。6.3. 1 选取菌落数在30CFU., 300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU 的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算
12、半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。6.3.3 当平板上出现菌落间元明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。7 结果的表述7. 1 菌落总数的计算方法7. 1. 1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克(或毫升)中菌落总数结果。7. 1. 2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式(1)计算:N = I;C/ (n) + o. 1n2)d 式中:N一一样品中菌落数;I;C一一平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;n)一一第一个适宜稀释度平板上的菌落数;n2一一第二个适宜稀释度平板上的菌
13、落数pd一一稀释因子(第一稀释度)。示例:1 : 100(第一稀释度)1 : 1 OOO(第二稀释度)232.244 33.35 N= C/(nl +0.1n2)d 232十244+ 33 + 35 544 =一一一=24 727 2 + (0. 1 X 2) x 10-2 0.022 上述数据经四舍五入后，表示为25000或2.5X 104 标准搜搜网www.bzsoso.COITl各类标准行业资料免费下载. ( 1 ) 3 G/T 4789.2-2008 7. 1. 3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高
14、稀释倍数计算。7. 1. 4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7. 1. 5 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。7. 1. 6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30，._300之间，其中一部分小于30或大于300时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.2 菌落总数的报告7.2. 1 菌落数在100以内时，按四舍五入原则修约，采用两位有效数字报告。7.2.2 大于或等于100时，第三位数字采用四舍五入原则修约后，取前两位数字，后面用0代替位数;也可用10的指数形式来表示，按四舍五入
15、原则修约后，采用两位有效数字。7.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。7.2.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。7.2.5 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/rnL为单位报告。第二法菌落总数PetrifilmTM测试片法8 检验程序除将平板计数琼脂培养基改成Petrifilrn菌落总数测试片外，其他与第5章相同。9 操作步骤9. 1 样品的稀释按照6.1.1，._6.1.2制备1: 10的样品匀液后，用1rnol/L氢氧化纳(NaOH)或1rnol/L盐酸(HCl)调节pH至6.6,._ 7. 20 9.2 接种根据对样本污染状况的估计，选择
16、2个，._3个适宜稀释度的样品匀液进行检验。将测试片置于平坦实验台表面，揭开上层膜，用吸管或微量移液器吸取1mL样品匀液，垂直滴加在测试片的中央，将上层膜盖下，允许上层膜直接落下，但不要滚动上层膜，将压板(凹面底朝下)放置在上层膜中央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养膜上，切勿扭转压板。拿起压板，静置至少1rnin以使培养基凝固。每个稀释度接种两张测试片。9.3 培养将测试片的透明面朝上，水平置于培养箱内。可堆叠至20片，培养温度和时间同6.2。9.4 计数9.4.1 培养结束后立即计数，可肉眼观察计数，或用菌落计数器、放大镜、Petrifilrn自动判读仪计数。选取菌落数在30，._3
17、00之间的测试片计数。9.4.2 计数所有红色菌落。细菌浓度很高时，整个测试片会变成红色或粉红色，将结果记录为多不可计。9.4.3 有时，当细菌浓度很高时，测试片中央没有可见菌落，但圆形培养膜的边缘有许多小的菌落，其结果也记录为多不可计;进一步稀释样品可获得准确的读数。9.4.4 某些微生物会液化凝胶，造成局部扩散或菌落模糊的现象。如果液化现象干扰计数，可以计数未液化的面积来估算菌落数。10 结果的表述同第7章。4 标准接搜网wrflTAT.bzsoso.m各类标准行业资料免费下载附录A(规范性附录培养基和试剂A.1 平板计数琼脂(platecount agar，PCA)培养基A. 1. 1
18、成分膜蛋白陈酵母浸膏葡萄糖琼脂蒸馆水pH 7.0:1: 0.2 A. 1.2 制法5.0 g 2.5 g 1. 0g 15.0 g 1 000 mL GB/T 4789.2-2008 将上述成分加于蒸馆水中，煮沸溶解，调节pHo分装试管或锥形瓶，121C高压灭菌15mino A.2 磷酸盐缓冲液A. 2.1 成分磷酸二氢梆(KH2P04)蒸馆水pH 7.2 A.2.2 制法34.0 g 500 mL 贮存液:称取34.0g的磷酸二氢御溶于500mL蒸馆水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化纳溶液调节pH至7.2，用蒸馆水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。稀释液:取贮存液1.25 mL，用蒸
19、馆水稀释至1000 mL，分装于适宜容器中，121C高压灭菌15 min 5 标准搜搜网www.bzsoso.COITl各类标准行业资料免费下载OONlNd号问筒。国华人民共和国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定GB/T 4789.2-2008 中骨中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张O.75 字数12千字2009年3月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2009年3月第一版定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533标准搜搜网www.bzs口so.corn各类标准行业资料免费下载铸书号:155066 1-36100 GB/T 4789.2-2008
