1、GB/T 4789.3-2003 14 前言本标准对GB/T4789.3-1994(食品卫生微生物学检验大肠菌群测定进行修订。本标准与GB/T4789.3-1994相比主要修改如下2按照GB/T1. 1-2000对标准文本格式和文字进行修改。修改并规范原标准中的设备和材料。本标准自实施之日起，GB/T4789.3一1994同时废止.本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口.本标准起草单位z中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人:XTJ宏道、冉陆、付萍、杨宝兰、姚景会。本标准于1984年首次发布，1994年第一次修订，本次为第二次修订。1 范围食晶卫生微生物学检验大肠菌群测定本标准
2、规定了食品中大肠菌群的测定方法。本标准适用于各类食品中大肠菌群的测定。2 规范性引用文件GB/T 4789.3-2003 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标准.GB/T 4789. 28-2003 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1 大肠菌群Coliform bacteria 一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性
3、元芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便将染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能.食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示.4 设备和材料4.1 冰箱，0C4C。4.2 恒温培养箱，36C土lC，4.3 恒温水浴锅，46C士1C。4.4 显微镜，lOX100X。4.5 均质器或灭菌乳钵。4.6 架盘药物天平，0g500 g，精确至0.54.7 灭菌吸管1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mLJ度)，4.8 灭菌锥形瓶，500mL, 4.9 灭菌玻璃珠z直径约5mm, 4.10 灭菌培养皿=直径90mm, 4.11 灭
4、菌试管，16mmX160 mm, 4.12 灭菌刀、剪子、银子等.5 培养基和试荆5.1 乳糖胆盐发酵管2按GB/T4789. 28-2003中4.9规定。5.2 伊红美蓝琼DIJ平板z按GB/T4789.28-2003中4.25规定。5.3 乳糖发酵管:按GB/T4789. 28-2003中4.10规定。15 GB/T 4789.3-2003 5.4 EC肉汤g按GB/T4789. 28-2003中4.11规定。5.5 磷酸盐缓冲液g按GB/T4789. 28-2003中3.22规定。5.6 0.85%灭菌生理盐水。5.7 革兰氏染色液z按GB/T4789. 28-2003中2.2规定。6
5、检验程序大肠菌群检验程序见图10固17 操作步骤7.1 检样稀释7. 1. 1 以无菌操作将检样25g(mL)放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1 10的均匀稀释液。团体检样最好用均质器，以8000 r/min10 000 r/min的速度处理1min，做成1 10的均匀稀释液。GB/T 4789.3-2003 7. 1. 2 用1mL灭菌吸管吸取1: 10稀释液1mL.注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1: 100的稀释液。7. 1. 3 另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做1
6、0倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。7. 1. 4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种三管。7.2 乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管.1mL及1 mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种三管，置36C土1.C温箱内，培养24h土2h.如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。7.3 分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36C:c1C温箱内，培养18h24 h.然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验.7
7、.4 证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1个2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36C土1.C培养箱内培养24h土2h.观察产气情况.凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。7.5 报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。8 粪大肠菌群(Faeca!coliform) 8.1 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物见7.2)转种于EC肉汤管内，置44.5C :c O. 2C 水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面).培养24h士2h.经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性;如有产气者
8、，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置培养18 h24 h.凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。8.2 结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值(见表1)。褒1大肠菌群最可能擞(MPN)栓索表阳性管数MPN 95%可信限1 mL(g)X3 0.1 mL(g)X3 0.01 mL(g) X 3 100 mL(g) 下限上限。30 。1 30 5 90 。2 60 。3 90 。1 。30 5 130 。1 1 60 。1 2 90 。1 3 120 。2 。60 。2 l 90 。2 2 120 。2 3 1
9、60 。3 。90 。3 1 130 。3 2 160 。3 3 190 17 GB/T 4789.3-2003 表1(续)阳性管数MPN 95%可信限1 mL(g)X3 0.1 mL(g)X3 0.01 mL(g) X 3 100 mL(g) 下限上限1 。40 5 200 1 。1 70 10 210 1 。2 110 1 。3 150 1 l 。70 10 230 l 1 1 110 30 360 1 l 2 150 1 1 3 190 1 2 。110 30 360 l 2 1 150 1 2 2 200 1 2 3 240 l 3 。160 1 3 1 200 1 3 2 240 1
10、 3 3 290 2 。90 10 360 2 。1 140 30 370 2 。2 200 2 。3 260 2 1 。150 30 440 2 1 1 200 70 890 2 1 2 270 2 1 3 340 2 2 。210 40 470 2 2 1 280 100 1 500 2 2 2 350 2 2 3 420 2 3 。290 2 3 1 360 2 3 2 440 2 3 3 530 3 。230 40 1 200 3 。1 390 70 1 300 3 。z 640 150 3 800 3 。3 950 3 l 。430 70 2 100 3 1 1 750 140 2
11、300 3 1 2 1 200 300 3800 3 1 3 1 600 3 2 。930 150 3800 3 2 l 1 500 300 4400 3 2 2 2 100 350 4 700 3 2 3 2900 3 3 。2400 360 13000 3 3 1 4 600 710 24000 3 3 2 11 000 1 500 48000 3 3 3 二三240日。注1，本表采用3个稀释度c1mL(g)、0.1mL(g)和0.01mL(g)J，每稀释度二管。注2，表内所列检样量如改用10mL(g)、1mL(g)和0.1mL(g)时，表内数字应相应降低10倍，如改用0.1 mL(g)、0.01mL(g)和0.001mL(g)时，贝u表内数字应相应增加10倍.其余可类推.18
