1、GB/T 4789.8-2003 54 前百旨在司本标准对GB/T4789.8-1994(食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验进行修订。本标准与GB/T4789. 8-1994相比主要修改如下g一一按照GB/T1. 1-2000对标准文本格式和文字进行修改。一修改并规范原标准中的设备和材料。本标准自实施之日起，GB/T4789.8-1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人z王淑颖、周桂莲、付薄、杨宝兰。本标准于1984年首次发布，1994年第一次修订，本次为第二次修订。GB/T 4789. 8-20
2、03 1 范围食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验本标准规定了小肠结肠炎耶尔森氏菌的检验方法。本标准适用于各类食品及食物中毒样品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检验。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 4789. 1食品卫生微生物学检验总则GB/T 4789. 28一2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3. 1 冰箱，OC4C
3、。3.2 恒温培养箱，36C士1C，4C土1C、26C土1C。3.3 显微镜，lOX100X。3.4 均质器或灭菌乳钵。3.5 架盘药物天平，0g500 g.精确至0.5g. 3.6 灭菌试管，16mmX 160 mm、15mmX 100 mm. 3. 7 灭菌吸管，1mL(具0.01mL刻度)、5mL、10mL(具0.1mL J度)。3.8 灭菌锥形瓶500mL、200mL。3.9 灭菌培养皿.直径90mm. 3. 10 0.5 mL注射器。3. 11 灭菌刀、剪子、慑子等。3. 12 小白鼠，12g15g。4 培养基和试1I1J4. 1 改良磷酸盐缓冲液PSB，按GB/T4789.28-2
4、003中4.46规定.4.2 CIN-I培养基z按GB/T4789. 28-2003中4.47规定。4.3 改良Y培养基s按GB/T4789. 28-2003中4.48规定.4.4 改良克氏双糖z按GB/T4789. 28-2003中4.49规定。4.5 山梨醇、鼠李糖、蕉糖、甘露醇等发酵管:按GB/T4789.28-2003中3.2规定.4.6 鸟氨酸脱竣酶肉汤z按GB/T4789.28-2003中3.12规定。4. 7 半固体琼脂z按GB/T4789. 28-2003中4.30规定。4.8 V-P试剂s按GB/T4789. 28-2003中3.4规定。4. 9 元菌矿物油。4. 10 碱处
5、理液，0.5%氯化物0.5%氢氧化伺混合液。55 GB/T 4789.8-2003 4. 11 尿素培养基=按GB/T4789. 28-2003中4.38规定，5 检验程小肠结局炎耶尔森氏菌检验程序见图1.徨掉25g(mL)+225ml.改直砸噩噩噩冲穰412 7d、14d、21d 肉及其制品，其他食品砸扯理，15窑.4.5mL+OSmL挥罹接种CIN-I.改且Y培#基26 C. 48h 揽取可疑菌藩，撞种改良克民双跚iC 24h 固16 操作步骤6. 1 样品的采集和处理2见GB/T4789. 1.样品采集后应尽快送检.乳且其制品6.2 增菌倍养z将食物样品与改良的磷酸盐缓冲液增菌液以1:
6、10的比例混合，置4C冰箱进行玲增菌。6.3 碱处理s将肉及其制品的冷增菌液0.5mL与碱处理液4.5mL混合15s。6.4 分离培养$将冷增菌液和碱处理的冷增菌液分别接种CIN-I和改良Y培养基，于26(;48h培养后，在CIN-I上搅取红色牛眼状菌落，在改良Y上JJ/取无色透明、不粘满的菌落，进行进-步的鉴定。6.5 改良克氏双糖试验s将上述可疑菌落接种改良克氏双糖管，于26(;24 h培养，将斜面和底部皆变黄者做进一步的生化鉴定。56 GB/T 4789.8-2003 6.6 尿素酶试验和动力观察2将改良克氏双糖上的可疑培养物接种到尿素培养基上，注意接种量要大，挑取一接种环，振摇几秒钟，
7、放置于26C培养2h4 h，然后将阳性者接种两管半固体，分别放置26C和37C恒温培养箱中，培养24h检查，如在26c有动力者可进行镜检和进一步的生化试验。6. 7 染色镜检z将上述可疑菌落做涂片染色，进行显微镜观察，呈革兰氏阴性球杆菌，有时呈椭圆或杆状，大小为(0.8m3.0m)XO. 8m者做以下生化试验。6.8 生化特性z将上述可疑的菌落做进一步的生化试验。所有的生化反应皆在26C培养。本菌主要生化特性以及与其他菌种的区别见表10表1小肠结局炎耶尔森氏菌与其他相似菌的生化性状鉴别表项目小肠结肠炎中间型耶弗氏耶克氏耶假结核耶鼠疫耶耶尔森氏菌尔森氏菌尔森氏菌尔森氏菌尔森氏菌尔森氏菌动力(26C) + + + 十十尿素酶+ + + + + v-p试验(26C) 十+ + 鸟氨酸脱嫂酶+ 十十+ it.糖d + + 棉于糖+ d 山梨醇+ + + + 甘露醇+ 十十+ + + 鼠李糖+ + + 注，+阳性s阴性;d有不同生化型.6.9 血清型鉴定z除进行生化鉴定外，亦可做血清型鉴定。目前国内可生产27种0型血清因子，供各地使用。具体操作方法与沙门氏菌0因子血清分型相同。57
