1、ICS 67.040 C 53 中华人民共和国国家标准2003-饵-11发布GB/T 5009.149-2003 代替GB/T17335 1998 食品中提子黄的测定Determination of crocin in foods 2004-01-01实施中华人民共和摘卫生变发布中国国家标准化管理委员再GB/T 5009. 149-2003 前言本标准代替GB/T17335-1998(食品中槌子黄的测定儿本标准按照GB/T20001. 4-2001(标准编写规则第4部分2化学分析方法对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准负责起草单位g中国预防医学科学院劳动卫生
2、与职业病研究所;参加起草单位=卫生部食品卫生监督检验所。本标准主要起草人s李严巍、玉梅、杨祖英。原标准于1998年首次发布，本次为第一次修订。257 GB/5009. 149-2003 事!言棍子黄作为食品着色剂已经列入GB2760一1996食品添加剂使用卫生标准，最大使用敛。.3g/kgo 258 食晶中提子黄的测定1 范围本标准规定了食品中梳子黄色素的高效液相测定方法和薄层色谱法。本标准适用于饮料、酒、糕点中棍子黄的测定。第一法检出限为3.2g/mL，标准曲线线性范围为ong/mL-200 ng/ml。第-法高效液相色谱法2 原理GB/T 5009.149-2003 试样中提子黄经提取净化
3、后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量，棍子戒是梳子黄的主要成分，为对照晶。3试1flJ试剂均为分析纯，水为蒸馆水。3.1 甲醇。3.2 石油隧:60C-90C。3.3 乙酸乙醋。3.4 三氯甲:境。3.5 姜黄色素。3.6 棍子式。3.7 插子试标准溶液z称取2.75mg槌子戒标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至100mL混匀。即得27.5问/mL槌子试。3.8 棍子试标准使用液z分别吸取梳子试标准溶液。.2.0.4.0.6.0.8.0mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至10mL.即得0.5.5.11.0.16. 5.22. 0g/mL的梳子试标准系列溶液。4 仪器4.1 小型粉碎
4、机。4.2 恒温水浴。4.3 高效液相色谱系统:Waters M510泵.U6K迸样器，岛津RF-535.荧光检测器.Bluechip/PC计算机和Baseline810色谱控制程序。5 分析步骤5.1 试样处理5. 1. 1 饮料z将试样温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜。.4m过滤，滤液备作HPLC分析用。5. 1. 2 酒z试样通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。5. 1. 3 糕点3称取10g试样放入100mL的圆底烧瓶中，用50mL石油酷加热回流30min，置室温。砂芯漏斗过滤，用石油磁洗涤残渣5次，洗液并人滤液中，减压浓缩石油酷提取液，残渣放人通风橱至元石
5、油隧味。用甲醇提取3次-5次，每次30mL.直至提取液无梳子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过259 GB/T 5009. 149-2003 微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。5.2 测定5.2.1 HPLC参考条件色谱柱g粒度5mODS CI8 150 mmX4. 6 mm; 流动相g甲醇十水(35+65), 流速:0.8mL/min; 波长:240nm , 5.2.2 标准曲线在本实验条件下，分别注入梳子试标准使用液。，2，4，6，8L，进行HPLC分析，然后以峰高对棍子试浓度作标准曲线。5.2.3 试样测定在实验条件下，注入5L5. 1试样处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，测得试样
6、中棍子就含量。6 结果计算按下式计算2式中gx= AXV =-m X 1000 X一一试样中槌子黄色素的含量，单位为克每千克(g/kg); A一一进样液中梳子式的含量，单位为微克每毫升仰自/mL), V一一试样1IitJ备液体积，单位为毫升(mL);m 试样质量，单位为克(g)。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过5%。第二法薄层色谱法8 原理试样中槌子黄色素用有机溶剂提取，并经过纯化处理，去除干扰物质，浓缩点样展开后，在UV254 nm灯下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概略定量。9 试亦j所用试剂均为分析纯，水为蒸馆水。9.1 甲醇。9.2 乙醇。9.3 乙酸
7、乙醋。9.4 丙阁。9.5 甲酸。9.6 三氯甲烧。9.7 硅胶GF254:薄层色谱用。9.8 展开:ifiJ:乙酸乙醋+丙翻+甲醇十水(5+5+1+1)。260 9.9 展开JliJ:三氯甲烧+甲醇(6+3)。10 仪器10.1 全玻璃浓缩器。10.2 薄层板涂布器.10.3 玻璃板.4cmX20 cm.20 cmX20 cm , 10.4 层析缸。10.5 UV254 nm荧光灯。10.6 微量注射器。11 操作方法11. 1 试样处理将酒、饮料、蛋糕样品处理后，进行TLC检识。见11.2. 2展开结果。GB/T 5009. 149-2003 11. 1. 1 酒=取试样100mL.减压浓
8、缩至无酒味，然后用乙酸乙醋萃取，每次30mL.萃取3次5次，至元梳子黄颜色为止，合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙醋昧.约剩20mL为止，此液留作薄层分析用。11. 1. 2 饮料2取试样100mL.用乙酸乙醋萃取，每次50mL.萃取3次5次，至无梳子黄颜色为止。合并萃取液，减压浓缩至元乙酸乙酶味，约剩20mL.此液留作薄层分析用。11. 1. 3 蛋糕g称取10.0g己粉碎均匀的试样，加海砂少许，混匀，用热风吹干试样(用手摸己干燥即可).加入50mL石油酶搅拌，放置片刻，弃去石油酶，如此反复处理三次，以除去脂肪，吹干后研细，放入索式提取器，用甲醇提取色素，直到无棍子黄色素为止，直至色素全部提完，置水浴浓缩至约5mL，此液留作薄层层析用。11. 2 测定11. 2. 1 点样z取市售硅胶GF254荧光板，离板底边2cm处点试样提取液0.5L，板的右边点2L槌子黄色素标准溶液。11. 2. 2 展开g将11.2. 1巳点好样和标准板，用9.8.9.9展开剂展开，待插子黄色素明显分开后取出，晾干，与标准斑点比较，梳子黄R，值为0.64和0.50，而姜黄色素为0.11和0.15，试样与标品的斑点的R，值一致，则证明试样中的色素为槌子黄色素。261
