1、ICS 67.040 C 53 国中华人民共和国国家标准2003-08-11发布GB/T 5009.154-2003 代替GB/T17407-1998 食品中维生素B6的测定Determination of vitamin B6 in foods 2004-01-01实施中华人民共和国卫生变发布中国国家标准化管理委员再GB/T 5009. 154-2003 前吉本标准对应于(AOAC.45维生素和营养素部分43.229食物中维生素B，的微生物测定法(1995年版)。本标准与AOAC43. 229的一致性程度为非等效。本标准代替GB/T17407-1998(食品中维生素B，测定儿本标准按GB/T
2、20001. 4-2001(标准编写规则第4部分z化学分析方法对原标准的结构进行了修改。292 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位=中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所。本标准主要起草人g沈湘、周瑞华、杨晓莉、王光亚。原标准于1998年首次发布，本次为第一次修订。GB/T 5009. 154-2003 食品中雄生素良的测定1 范围本标准规定了用微生物法测定食品中的维生素队的含量。本标准适用于各类食品中的维生素队的测定。本标准也适用于饲料中的维生素弘的测定。本方法检tll器更为白.1n草，线性范I:m为。.1ng-自碍，2原理食品中某一种细菌的生长必须要有某一种维生素的存在
3、，卡尔斯伯(SaccharomycesCarlsbrgensis) 酵母菌需在有维生紫民存在的条件下才能生长，在一定条件下维生素队的量与其!i:呈正比关系。用比浊法测定该商在试样液中生长的浑浊度，与标准曲线相比较得出试样中维生素队的含量。3 试费苦3.1 琼脂。3.2 日比哆蹲Y瑞养基。3.3 0.22 mol!L硫酸溶液，于2000mL烧杯中加入700mL水，12.32mL硫酸(H，SO.)，用水稀释至1000 mL. 3. 4 O. 5 mol!L硫酸溶液，于2000mL烧杯中加入700mL水，28mL硫酸(H，SO.)烧水稀释至1000四L。3.5 10 molL氮氧化销溶液，溶200g
4、氮氧化钩子水中，捺释至500mLo 3.6 O. 1 mol!L氮氧化锹溶液，取10mL 10 mol!L氢氧化锅，用水稀释至1000mL. 3.7 培养基:称取咣哆醇Y培养基5.3嚣，溶解于100mL蒸铺水中。警告z本标准所周毗哆醉Y培养基不得含维生素B.生长因子。3.8 口比哆醇标准储锋液(100g!mL)，称取122mg盐酸毗哆部标准溶于1L 25%乙隙中，保子4(;冰箱中，稳定1个月。3.9 敬哆董事标准啦!海液(1g/甜U，取1mL在这哆董事标准储备液，事罪释至100mLo 3.10 琼脂培养篡2日比哆醇Y培养基5.3窟，琼黯1.2 g.稀释至100mL。3.11 生理盐水g取9g氯
5、化纳溶于1000mL水中。3.12 漠甲盼绿(0.4日IU:溶液，称取0.1g澳甲盼绿于研钵中，加1.4 mL O. 1 mol/L氮氧化销研磨，加少许水继续研麟，直至完全溶解，用水稀释到250mL。4 仪器和设备4.1 电热恒温培养籍也4.2 高压釜。4.3 液体快速混合器。4.4 离心机。4.5 光栅分光光皮汁。4.6 硬质菠璃试镑。293 GB/T 5009.154-2003 5 分析步骤5.1 菌种的制备及保存(避先处理)5. 1. 1 以卡尔斯伯酵母菌(SaccharomycesCarlsbergens is ATCC No. 9080简称SC)纯菌种接人2个或多个琼脂培养基管中，在
6、30C:1:0.5C恒温箱中保温18h20 h，取出于冰箱中保存，至多不超过两星期。保存数星期以上的菌种，不能立即用作制备接种液之用，一定要在使用前每天移种一次，连续2 d3 d，方可使用，否则生长不好。5. 1. 2 种子培养液的制备加0.5mL 50 ng/mL的维生素B，标准应用液于尖头管中，加入5.0mL基本培养基，塞好棉寨，于高压锅121c下消毒10min，取出，置于冰箱中，此管可保留数星期之久。每次可制备2管4管。5.2 试样处理(鼓个步骤需要避光)5.2.1 称取试样O.5 g10. 0 g(维生素B，含量不超过10ng)放人100mL三角瓶中，加72mL 0.22 mol/L硫
7、酸。放入高压锅121c下水解5h，取出冷却，用10.0mol/L氢氧化销和0.5mol/L硫酸调pH值至4.5，用澳甲盼绿做指示剂。(指示剂由黄-黄绿色)，将三角瓶内的溶液转移到100mL容量瓶中，用蒸馆水定容至100mL，滤纸过滤，保存滤液于冰箱内备用(保存期不超过36h)。5.2.2 接种液的制备使用前一天，将卡尔斯伯酵母茵茵种由储备菌种管移种于已消毒的种子培养液中，可同时制备两根管，在30C:1: 0. 5C的恒温箱中培养18h20 h。取出离心10min(3 000 r/min)倾去上部液体，用己消毒的生理盐水淋洗2次，再加10mL消毒过的生理盐水，将离心管置于液体快速混合器上混合，使
8、菌种成为混悬体，将此液倒入已消毒的注射器内，立即使用。5.2.3 标准曲线的制备取标准储备液2.00mL稀释至200mL成为中间液，从中间液中取5.00mL稀释至100mL作为工作液，浓度为50ng/mL，3组试管各加0.00，0.02，0，04，0.08，0.12和0.16mL工作液，再加5.00 mL毗哆醇Y培养基，混匀，加棉塞。5.2.4 试样管的制备在试管中分别加入0.05，0.10，0.20mL样液，再加人民00mL毗哆醇Y培养基，用棉寨塞住试管，将制备好的标准曲线和试样测定管放入高压锅121c下高压10min，冷至室温备用。5.2.5 接种和培养每管种一滴接种液，于30C:1: 0
9、. 5C恒温箱中培养18h22 h , 5.3 测定将培养后的标准管和试样管从恒温箱中取出后，用分光光度计于550nm波长下，以标准管的零管调零，测定各管的吸光度值。以标准管维生素民所含的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制维生素B，标准工作曲线，用试样管得到的吸光度值，在标准曲线上查到试样管维生素B，的含量。6 结果计算294 试样中的维生素B，含量按下式计算z式中2x=C_兰主兰卫?mX 10 U +U2 +U3 c=一一丁一一一X 试样中维生素队的含量，单位为毫克每百克(mg/lOOg)。c 试样提取液中维生素B，的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mLl。u一各试祥测定营中维生素B窑的浓度，单位为纳克每毫升应在fmL).V试样提滚滚的定容体积与稀挥体积总牵挂，单佼为毫升(mL).m町试样质量，单位为克(g).100/10一折算成每100g试样中维生素民的毫克数。计算结果表示到小数点后两位.7 精嘴皮GB/T 5009.154阳幡.2003书El草策性条件下获得的两次独立测定结果的绝对袭值不得超过算术平均值的10%。295
