1、ICS 67.040 C 53 昌中华人民共和国国家标准GB/T 5009.185-2003 部分代替GB14974-1994 苹果和山植制品中展青霉素的测定Determination of patulin in apple and hawthorn products 2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生意P发布中国国家标准化管理委员去483 GB/T 5009.185-2003 484 前言本标准代替GB14974-1994(苹果和山植制品中展青霉素限量卫生标准中第3章检验方法。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究
2、所负责起草。本标准主要起草人z吴南、刘勇、刘兴介。GB/T 5009. 185-2003 苹果和山植制品中展青毒素的测定1 范围本标准规定了苹果和山植制品中展青霉素的测定方法。本标准适用于苹果和山植制品中展青霉素的测定。本标准检出限为，3问IL.2 原理试样中展青霉素经提取、净化、浓缩、薄层展开后，利用薄层扫描仪进行紫外反射光扫描定量。3 试剂3.1 硅胶GF2540 3.2 薄层色谱展开剂横向=氯仿丙酣(30+1.5)，纵向g甲苯乙酸乙醋甲酸(50十15+1)。3.3 展青霉素标准品。3.4 乙酸乙醋。3.5 1. 5%碳酸锅溶液。3.6 元水硫酸锅。3.7 三氯甲烧。3.8 显示弗0，溶解
3、0.1g MBTH. HCl. H 2 0 3甲基2苯并串串略酣踪水合盐酸盐于20mL蒸馆水中，置于冰箱中保存，每3天重新配制.4 仪器4.1 薄层扫描仪。4.2 层析槽(内径11.5 cm、高20cm的标准备)。4.3 玻璃板10cmXI0 cm。4.4 紫外光灯。5 操作方法5.1 提取5. 1. 1 果汁、果酒.量取果汁25mL，置于分液漏斗中，加入等体积的乙酸乙醋，振摇2min，静置分层，重复以上步骤两次，合并有机相，加2.5mL 1.5%碳酸销振摇1min，静置分层后，弃去碳酸锅层，同上步骤再用碳酸锅处理一次。将提取液滤入100mL梨形瓶中，于40C水浴上用真空减压浓缩至近干，用少许
4、三氯甲炕清洗瓶壁，浓缩干，加三氯甲烧0.4mL定容，供薄层色谱测定用。5. 1. 2 果酱2称取试样25g置于乳钵中，加适量无水硫酸锅研磨后，称至三角瓶中，加80mL乙酸乙醋浸泡30min，振荡30min，过滤，取滤液50mL，以下操作同5.1.1。5.2 测定5.2.1 薄层板的制备z取硅胶GF2545 g，加水15mL，涂布10cmXI0 cm玻璃板上，一次涂成5块，薄层厚度为0.3mm，阴干后，105C烘烤2h，放入干燥器中备用。5.2.2 点样z取一块薄板，在距底边和右边10cm处，用微量注射器滴加1.0g/mL的展青霉素标准液10L，相距左边4cm处滴加10L样液，在试样点同一垂直线
5、上，距顶端2cm处点20吨的标准485 GB/T 5009. 185-2003 液，为位置参考点。5.2.3 展开z横向展开到顶端后取出挥干，进行纵向展开，至顶端后，取出挥干，在254nm紫外灯下观察，出现黑色吸收点则试样为阳性。进行扫描定量测定。5.2.4 薄层色谱扫描测定:仪器操作条件2测定波长270nm;参考波长310nm;反射光测定;扫描速度40 nm/min;记录仪纸速20nm/min;测定标准及试样中展青霉素峰面积。5.2.5 阳性试样的确证g将阳性试样的薄层色谱板，喷以MBTH显色剂.130C烘烤15min，冷至室温后，于365nm紫外灯下观察，展青霉素应呈橙黄色点。5.2.6 计算:果汁及果酱中展青霉素含量的计算见式(1)和式(2)。果汁zxzc3VD击( 1 ) 4. 1 8 果酱:X cX二王XVXDX-X7.( 2 ) m 5 式中zX 展青霉素含量，单位为微克每毫升(g/mL); c 展青霉素标准液浓度，单位为微克每毫升(g/mL);A 样液展青霉素峰面积;S 标准溶液展青霉素峰面积pD 样液点稀释倍数;m一一试样的质量，单位为克(g); V，一一液体试样的体积，单位为毫升(mL)。6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。486
