1、ICS 67.在40C 53 中华人民共和国国家标准GB/T 5009.198-2003 只类记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定Shellfishes-Test method of domoic acid in amnesicshellfish poisoning 2003-四-11发布2004-01心1实施中华人民共和擂卫生变发布中国周家标准化管理委员GB/T 5009. 198-2003 前-=罔本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人g卫锋、王竹天、陈明生、王玉挥、唐守亭。564 GB/T 500
2、9. 198-2003 贝类记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定1 范回本标准规定了海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品的记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。本标准适用于海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品(不包括盐渍制品)的记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的检验。本标准检测限为1.0吨。本标准线性范围为1g250阅。2 原理试样以甲醇/水提取，经LC-SAX强阴离子柱团相萃取(SPE)净化，用RP-HPLC定量分析。3 试剂3.1 甲醇g色谱纯。3.2 乙膀:色谱纯。3.3 三氟乙酸z优级纯。3.4 一水拧楝酸g优级纯。3.5 拧橡酸三镀g优级纯。3.6 乙脯+水o十的。3.
3、7 O. 5 mol/L拧糠酸溶液(pH=3.2) , 40.4 g一水拧橡酸和14.0g拧橡酸三镀溶解于400mL水中，以浓氨水调pH=3.2.加入50mL乙脯，完全溶解后，以水定容至500mL。3.8 LC-SAX柱，3mLo 3.9 标准储备液，DACS-1COOOg/mL).或相当者。3.10 软骨藻酸标准溶液z以乙腊+水。+9)稀释标准储备液分别配成为含软骨藻酸。1、1.0、2.5、10.0、25.0g/mL的标准工作溶液。4 仪器4.1 高效液相色谱仪:配有二极管阵列或紫外检测器。4.2 组织均质器z最大转速20000 r/mino 4.3 台式高速离心机2最大转速6000r/mi
4、no 4.4 涡旋均匀器。4.5 超声波清洗器。5 分析步骤5.1 攫取称取试样5.0g(精确到0.1g)于50mL加盖离心管中，加人10mL甲醇+水(1十1)溶液，涡旋混匀1min，超声提取5min，以4000 r/min离心20min，使困液两相彻底分离。移出上清液至25mL容量瓶中，残渣再加入5mL甲醇+水0+1)重复提取两遍，上清液均移人25mL容量瓶中，以水定容至刻度，混匀。565 GB/T 5009. 198-2003 5.2 净化取上述提取液5.0mL移人依次经6mL甲醇，3mL水，3mL甲醇+水0+1)处理过的LC-SAX柱上，待液体以1滴/s的速度流出后，再依次用5mL乙脯+
5、水。+9)，0.5mL拧橡酸洗脱液以1滴/s的速度过柱，弃去流出液，最后用2mL拧橡酸洗脱液洗脱吸附在柱上的软骨藻酸，供HPLC测定。注意:在液体过柱时，当被体凹液面下端与柱填料上端水平时，停止液体流出，避免LC-SAX柱填料与空气接触。5.3 测定5.3.1 色谱条件5.3. 1. 1 色谱柱:ZorbaxSB-C , 150 mmX4. 6 mm(i. d.) ，5m，或相当者$5.3. 1. 2 流动相g乙脯十0.1%三氟乙酸(13+87); 5.3. 1. 3 流速:1mL/min; 5.3.1.4 进样量:10L; 5.3. 1. 5 测定波长:242nm: 5.3. 1. 6 柱温
6、s室温。5.3.2 色谱测定分别取祥液和标准溶液各10L(或相同体积)注入高效液相色谱仪进行测定，以保留时间定性，峰面积定量。在上述色谱条件下，软骨藻酸的保留时间约为6.6min。软骨藻酸标准溶液液相色谱图见图10mAU 80 40 20 10 图1软骨藻酸标准样晶液相色谱圈5.4 空白试验除不加试祥外，按上述测定步骤进行。6 结果计算nv o/ 。-vh-i-, 一民37飞v一-m 5-c一-s A-A X . ( 1 ) 式中=X 试样中软骨藻酸含量，单位为毫克每千克(mg/kg); A一一样液中软骨藻酸峰面积;566 GB/T 5009.198-2003 A，-标准溶液中软骨藻酸峰面积gC，一一-标准溶液中软骨藻酸浓度，单位为微克每毫升(g/mL), m 称取的试样质量，单位为克(gV1 试样提取液总体积，单位为毫升(mL), V2 净化用提取液体积，单位为毫升(mL), V3一一洗脱液体积，单位为毫升(mL)。计算结果保留两位有效数字。注z计算结果需扣除空白值，报告结果时以贝类中可食组织部分的记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的吉量(mg/kg) 报告结果。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。567
