1、ICS 67.040 C 53 gB 中华人民共和国国家标准G/T 5009.21-2003 代替GB/T5009. 21-1996 粮、油、菜中甲荼威残留量的测定Determination of carbaryl residues in cereals. oils and vegetables 2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生变发布中国国家标准化管理委员百GB/T 5009.21-2003 前言本标准代替GB/T5009.21-1996(粮、油、菜中西维因残留量的测定方法儿本标准与GB/T5009. 21-1996相比主要修改如下:一一-修改了标准的中文名称
2、，标准中文名称改为粮、油、菜中甲茶威残留量的测定以一一按照GB/T20001. 4-2001(标准编写规则第4部分z化学分析方法对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准第一法由浙江省粮食科学研究所负责起草。本标准第二法由卫生部食品卫生监督检验所、中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草。本标准于1985年首次发布，1996年第一次修订，本次为第二次修订。170 粮、油、菜中甲荼威残留量的测定1 范围本标准规定了粮食、油、油料及蔬菜中甲茶威残留量的测定方法。本标准适用于粮食、泊、油料及蔬菜中甲茶威残留量的测定。GB/T 5009.21-2003 本方法检出限
3、z高效液相色谱法为0.5mg/kg;比色法为10g;当取样量为2g时，检出浓度为5mg/kg, 第一法商效液相色谱法2 原理含有甲茶威的粮食经提取、弗罗里硅土净化后，浓缩，定容作为测定溶液，取一定量注入高效液相色谱仪，经分离用紫外280nm检测器检测，与标准系列比较定量。3试JlIJ3.1苯。3.2 乙膀。3.3 甲醇。3.4 二氯甲烧。3.5 元水硫酸纳:120C干燥4h , 3.6 弗罗里硅土:120C干燥4h，加入质量分数为6%的蒸馆水，摇匀，放置过夜后使用。3.7 甲荼威标准溶液的配制z准确称取甲荼威标准品(carbarye，99.3%)，用甲醇溶解并配制成10.0 mg/mL的标准储
4、备液，储于冰箱中，使用时用甲醇稀释成10g/mL的标准使用液。4 仪器4.1 高效液相色谱仪带紫外检测器。4.2 溶剂过滤器。4.3 超声波仪。4.4 KD浓缩器或旋转式蒸发器。5 分析步骤5.1 提取称取20.00g经粉碎过20目筛的粮食试样于250mL具塞锥形瓶中，准确加入50mL苯，浸泡过夜，次日振荡提取1h，提取液过滤。5.2 净化取直径1.5 cm层析柱，先装脱脂棉少许。柱两头装2cm高元水硫酸锅，中间装6g弗罗里硅土。装好的桂先用20mL二氯甲炕预淋，弃去预淋液，然后将5mL10 mL试样提取液倒入层析柱，用70 mL二氯甲炕少量多次淋洗，收集全部淋洗液，用KD浓缩器进行浓缩至近干
5、(水浴温度30C)，然后用甲醇溶解残余物，并定容至5mL。定容后经0.45m微孔滤膜过滤后，取10L滤液注入高效色谱进行分离、检测。171 GB/T 5009.21-2003 5.3 液相色谱测定参考条件5.3.1 色谱柱2不锈钢柱I-Bondpak C18 3.9 mmX30 cm。5.3.2 检测器2紫外检测器波长280nm，灵敏度0.01-0.02，5.3.3 流动相2乙脯+水(55+45)混合溶剂，流速1mL/min, 5.3.4 温度g室温。5.4 测定吸取10L标准使用液及试样液注入色谱仪，以保留时间定性，用标准曲线法定量。6 结果计算粮食中甲荼威的含量按式(1)进行计算。x =
6、A X 1000 - m X V2/V, X 1 000 式中zX一一粮食中甲荼威的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); A一一从标准曲线求出样液中质量，单位为微克(g)，V , 样液定容的体积，单位为毫升(mL);V 2 注入色谱的体积，单位为毫升(mL)，m 试样的质量，单位为克(g)。7 其他甲荼威的液相色谱图，见图1，用袭威圈1甲寨威标准色谱圈172 . ( 1 ) GB/T 5009.21-2003 第二法比色法8 原理在碱性条件下，甲茶威水解成l荼盼、二氧化碳和甲胶。在酸性条件下，1茶酷和对硝基苯偶氮氟唰酸盐呈橙黄色，与标准系列比较定量。9 试剂9.1 二氯甲烧。9.2 丙酬。9
7、.3 乙醇(95%)。9.4 冰乙酸。9.5 元水硫酸锅。9.6 石油黯g沸程30C60C。9.7 二甲基亚讽。9.8 氯化俐。9.9 硅藻土。9.10 一缩二乙二醇溶液z一缩二乙二醇和二氯甲烧等体积混合。9.11 丙嗣(10%)。9.12 凝固液z称取0.5g氯化钱，溶于400mL水中，加1mL磷酸(85%)。9.13 氮氧化何乙醇溶液(56g/U，称取5.6g氢氧化饵，溶于10mL水中，加95%乙醇稀释至100 mL，临用时配制。9.14 氯化纳溶液(100g/L)。9.15 氢氧化纳溶液(20g/L) ，称取2g氢氧化锅，加水溶解并稀释至100mL. 9.16 显色ifiJ，称取50mg
8、对硝基苯偶氮氟唰酸盐，溶于50mL冰乙酸-乙醇溶液(20%)中，临用时配制，过滤后使用。9. 17 甲荼威标准溶液=甲荼威结晶经无水乙醇两次重结晶纯化。熔点142C 145C。准确称取50.00 mg甲荼威精制品，加二氯甲烧溶解，移入100mL容量瓶中，加二氯甲统至刻度，混匀。此溶液每毫升相当甲茶威0.50mg。9.18 甲荼威标准使用液2吸取甲茶威标准溶液1.0 mL或2.0mL，置于100mL容量瓶中，用二氯甲烧稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0g或10.0问甲茶威。10 仪器10.1 分光光度计。10.2 抽气泵。10.3 恒温水浴锅。10.4 电动振荡器。10.5 脂肪提取器。10.
9、6 离心机。门分析步骤11. 1 提取11. 1. 1 粮食173 GB/T 5009.21一2003试样经脱壳、磨粉，过20目筛并混匀。称取粮食试样10.00g.置150mL具塞锥形瓶中，加10g元水硫酸锅，混匀，加40mL二氯甲饶，在振荡器上振摇0.5h.浸泡过夜，用滤纸过滤，弃去2mL3 mL 初滤液，量取20.0mL滤液，置于50mL烧杯中，加3滴一缩二乙二醇溶液，放热水浴上挥干，如不太干，用吸耳球吹干。11. 1. 2 油及油料11. 1. 2.1 比较纯净的泊称取5.00g混匀的试样，用50mL丙翻分次溶解并洗入1mL分液漏斗中。11. 1. 2. 2 毛油z称取2.00 g5.
10、00 g混匀的试样，用40mL石油隧分次溶解并洗入100mL分液漏斗中。11. 1.2.3 棉籽z试样经脱壳、磨碎、混匀。称取10.00g试料装入滤纸筒中，置于60mL旨肪提取器中，用40mL石油隧提取8h.将提取液移入100mL分液漏斗中。11.1. 3 蔬菜、水果取可食部分洗净、晾干、切碎、混匀。称取25.00g试样加20g无水硫酸销后，在乳钵中用力研碎，至植物组织全部研成泥状，再加10g无水硫酸纳继续研磨至干粉状，移至250mL具塞锥形瓶中，再用约5g元水硫酸纳将乳钵研洗干净，一并移入具塞锥形瓶中，用二氯甲烧将乳钵研洗二次.每次50mL. 洗净粘在乳钵上的残物，洗液并人具塞锥形瓶中，在振
11、荡器上振摇0.5h.浸泡过夜，用滤纸过滤，弃去2 mL3 mL初滤液，吸取50.00mL滤液，置脂肪提取器的接收瓶内，加3滴一缩二乙二醇溶液，在水浴上蒸干溶剂至虹吸节内，弃去蒸出的二氯甲烧，直至蒸干，取下接收瓶，用吸耳球吹干残留溶剂。11.2 净化11. 2. 1 粮食沿上述含提取物的烧杯壁，加入3mL丙酬，使残渣完全溶解后，加15mL凝固液，放置15min，并时时摇动。将垂熔漏斗下接抽滤器(或抽滤瓶儿先铺一张滤纸，再铺一薄层约1g的硅藻土作为助滤剂，用丙隅(10%)洗涤多次后备用P弃去洗涤液。将试样凝固液倾入准备好的垂熔漏斗中，放置10min 以上，慢速抽滤于下面的拍滤管内，抽干后，用滴管滴
12、加约2mL丙酣(10%).洗净烧杯内壁，洗液倾入垂融漏斗中，浸泡1min-2 min后，再行抽干，如此重复2次3次。将滤液移至25mL容量瓶中，用少量丙酣(10%)洗涤抽滤管，洗液并入容量瓶中稀释至刻度，混匀。11.2.2 油及油料11. 2. 2. 1 比较纯净的油2在上述含有油样的丙商溶液的分液漏斗中加10mL水，轻轻摇匀，静置1h. 弃去分出的泊层，将丙阁提取液放入离心管中，以2500 r/min离心0.5h.用滴管吸取上层澄清丙翻提取液，置于另-分液漏斗中，加30mL二氯甲饶，振摇提取1min，放置1h.二氯甲炕层经盛有约10g无水硫酸纳的漏斗滤人脂肪提取器的接收瓶中。在二氯甲烧液内加
13、3滴一缩二乙二醇溶液，在水浴上将二氯甲虫在蒸发至虹吸节内，弃去蒸出的二氯甲烧。分液漏斗内的水层用10mL二氯甲烧振摇洗涤一次，经原无水硫酸锅漏斗滤人接收瓶中，继续蒸发至干，取下接收瓶，用吸耳球吹干残留溶剂。沿瓶壁加入3mL丙酣溶解残渣，以下按11.2. 1自加15mL凝固液起依法操作。11. 2. 2. 2 毛油g在上述含有油样的石油隧溶液的分液漏斗中，加10mL二甲基亚鼠，振摇1min，放置分层后，将二甲基亚枫分入另一分液漏斗中，石油隧层再用10mL二甲基亚枫振摇一次，合并二次提取液，加10mL石油酷振摇洗涤二甲基亚枫提取液一次。将二甲基亚枫层移入盛有2g氯化销和150mL 水的分液漏斗中，
14、弃去石油隧层。二甲基亚枫水溶液用二氯甲:院提取四次，每次25mL.合并二氯甲烧提取液，用7.5、5mL氢氧化纳溶液(20g/L)振摇提取二次，以洗去植物中的天然盼类物质，弃去洗涤液。二氯甲烧层再用氯化销溶液(100g/L)洗涤二次，每次15mL.最后用15mL水洗涤一次。二氯甲烧层经元水硫酸锅脱水滤入脂肪提取器的接收瓶中，以下按11.2.2.1自在二氯甲烧溶液内加3滴一缩二乙二醇溶液起依法操作。11. 2. 2. 3 棉籽=按11.2.2.2毛泊中的方法净化。174 GB/T 5009.21-2003 11. 2. 3 蔬票、水果沿上述含有提取物的接收瓶瓶壁加入3mL丙酬，并转动以溶解瓶中提取
15、物，加入10mL凝固液，再转动接收瓶，使凝固液布满内壁，放置10min，并时时转动。以下按11.2. 1自将垂熔漏斗下接抽滤管(或抽滤瓶)，先铺一张滤纸，再铺一薄层约1g的硅藻土.起依法操作。12 测定吸取5.0mL甲茶威标准使用液(相当50吨甲荼威)，或1.0 mL甲茶威标准使用液(相当1.0吨甲茶威，接近试样量)，置于50mL烧杯中，加3滴一缩二乙二醇溶液，在热水浴上挥干，加3mL丙酣溶解，并加15mL凝固液，混匀，移人25mL容量瓶中，用丙酣(10%)洗涤烧杯，洗液并入容量瓶中并稀释至刻度，作为比色时的标准对照溶液。吸取上述定容后的试样溶液和标准溶液各5.0mL，分别置于具塞刻度试管中，
16、各加2mL氢氧化饵-乙醇溶液(56g/L)，混匀，放置2min后再各加1mL显色剂，混匀。以水调整零点，用1cm比色杯，于波长475nm处测吸光度。同时，另取两个试管，一管加入5mL定容后的标准溶液，另一管加入5mL定容后的试样溶液，用2 mL乙醇代替氢氧化御乙醇溶液，按上述方法同样操作，于波长475nm处分别测吸光度，作为试剂空白和试样空白。13 结果计算试样中甲茶威的含量按式(2)进行计算。A, -A, c 1000 x=+一一;-x -=-= x ( 2 ) A3-A.川mX 5/25 1 000 式中X 试样中甲茶威的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); A, 试样管的吸光度的读数;A, 试样空白管的吸光度读数$A, 标准溶液管的吸光度读数;A一-试剂空白管的吸光度读数;c 标准溶液中甲茶威含量，单位为微克(g); m 试样质量，单位为克(g)。14 精密度粮食取样10g时，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。泊取样2g5 g时，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。棉籽取样10g时，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。水果、蔬菜取样25g时，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。175
