1、ICS 67.040 C 53 中华人民共和国国家标准2003-08-11发布GB/T 5009. 27-2003 代替GB/T5009. 27 1996 食品中苯并(a)克的测定Determination of benzo (a) pyrene in foods 2004-01-01实施中华人民共和国卫生变发布中国国家标准化管理委员百GB/T 5009.27-2003 前言本标准代替GB/T5009. 271996(食品中苯并(a)花的测定方法儿本标准与GB/T5009. 27 1996相比主要修改如下z修改了标准的中文名称，标准中文名称改为食品中苯并(a)花的测定;对方法的内容进行了修改s
2、按照GB/T20001. 42001(标准编写规则第4部分2化学分析方法对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由辽宁省卫生防疫站、江苏省卫生防疫站、北京市卫生防疫站、广西壮族自治区卫生防疫站、上海市卫生防疫站、新疆维吾尔自治区卫生防疫站负责起草。本标准于1985年首次发布，于1996年第一次修订，本次为第二次修订。218 食晶中苯并(a)克的测定1 范围本标准规定了食品中苯并Ca)花的测定方法。本标准适用于食品中苯并Ca)茵的测定。本方法检出限z试样量为50g.点样量为1g时为1ng/g. 第一法荧光分光光度法2 原理GB/T 5009.27-2003 试样先
3、用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提取液经液液分配或色谱柱净化，然后在乙散化滤纸上分离苯并Ca)菇，因苯并Ca)克在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，将分离后有苯并Ca)茵的滤纸部分剪下，用溶剂浸出后，用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较定量。3试剂3.1 苯z重蒸惰。3.2 环己烧(或石油酶，沸程30.C60.C) :重蒸馆或经氧化铝柱处理无荧光。3.3 二甲基甲就胶或二甲基亚矶。3.4 元水乙醇s重蒸馅。3.5 乙醇C95%)。3.6 元水硫酸锅。3.7 氢氧化钢。3.8 丙嗣z重蒸惰。3.9 展开J1iJ:乙醇C95%)二氯甲烧C2: 1)。3.10 硅筷型吸附剂:将60目100目筛孔的硅
4、倭吸附剂经水洗四次(每次用水量为吸附剂质量的4倍)于垂融漏斗上抽滤干后，再以等量的甲醇洗(甲醇与吸附剂量克数相等).抽滤干后，吸附剂铺于干净瓷盘上，在130e干燥5h后，装瓶贮存于干燥器内，临用前加5%水减活，混匀并平衡4h以上，最好放置过夜。3.11 层析用氧化铝(中性): 120.C活化4h. 3.12 乙酸化滤纸:将中速层析用滤纸裁成30cmX4 cm的条状，逐条放入盛有乙酿化混合液(180mL 苯、130mL乙酸膏、0.1mL硫酸)的500mL烧杯中，使滤纸充分地接触溶液，保持溶液温度在21.C以上，时时搅拌，反应6h.再放置过夜。取出滤纸条，在通风橱内吹干，再放入无水乙醇中浸泡4h.
5、取出后放在垫有滤纸的干净自瓷盘上，在室温内风干压平备用，一次可处理滤纸15条18条。3.13 苯并Ca)能标准溶液=精密称取10.0mg苯并Ca)菇，用苯溶解后移入100mL棕色容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于苯并Ca)诧100吨。放置冰箱中保存。3.14 苯并Ca)花标准使用液z吸取1.00 mL苯并Ca)能标准溶液置于10mL容量瓶中，用苯稀释至刻度，向法依次用苯稀释，最后配成每毫升相当于1.0及O.1问苯并Ca)茵两种标准使用液，放置冰箱中保存。4 仪器4.1 脂肪提取器。219 GB/T 5009.27-2003 4.2 层析柱s内径10mm，长350mm.上端有内径25mm
6、，长80mm-100 mm内径漏斗，下端具有活塞。4.3 层析缸(筒) 4.4 K-D全玻璃浓缩器。4.5 紫外光灯g带有波长为365nm或254nm的滤光片。4.6 回流皂化装置g锥形瓶磨口处连接冷凝管。4.7 组织捣碎机。4.8 荧光分光光度计.5 分析步骤5.1 试样提取5. 1. 1 粮食或水分少的食品z称取40.0g-60. 0 g粉碎过筛的试样，装入滤纸筒内，用70mL环己统润湿试样，接收瓶内装6g-8g氢氧化仰、100mL乙醇(95%)及60mL-80 mL环己烧，然后将脂肪提取器接好，于90C水浴上回流提取6h-8 h.将皂化液趁热倒入500mL分液漏斗中，并将滤纸筒中的环己烧
7、也从支管中倒入分液漏斗，用50mL乙醇(95%)分两次洗接收瓶，将洗液合并于分液漏斗。加入100mL水，振摇提取3mn，静置分层(约需20min).下层液放入第二分液漏斗，再用70mL环己烧振摇提取一次，待分层后弃去下层液，将环己烧层合并于第一分液漏斗中，并用6mL-8 mL环己烧淋洗第二分液漏斗，洗液合并。用水洗涤合并后的环己烧提取液三次，每次100mL.三次水洗液合并于原来的第二分液漏斗中，用环己统提取两次，每次30mL.振摇0.5min，分层后弃去水层液，收集环己烧液并入第一分液漏斗中，于50C -60C水浴上，减压浓缩至40mL.加适量元水硫酸销脱水。5. 1. 2 植物油g称取20.
8、0g-25. 0 g的混匀泊样，用100mL环己烧分次洗入250mL分液漏斗中，以环己统饱和过的二甲基甲酷胶提取三次，每次40mL.振摇1mn，合并二甲基甲院胶提取液，用40mL 经二甲基甲酸胶饱和过的环己炕提取一次，弃去环己统液层。二甲基甲酷胶提取液合并于预先装有240 mL硫酸锅溶液(20g/L)的500mL分液漏斗中，混匀，静置数分钟后，用环己烧提取两次，每次100 mL.振摇3min，环己统提取液合并于第一个500mL分液漏斗。也可用二甲基亚飘代替二甲基甲酷胶。用40C-50C温水洗涤环己统提取液两次，每次100mL.振摇0.5min，分层后弃去水层液，收集环己统层，于50C-60C水
9、浴上减压浓缩至40mL.加适量元水硫酸销脱水。5.1.3 鱼、肉及其制品z称取50.0 g-60. 0 g切碎混匀的试样，再用无水硫酸锅搅拌(试样与无水硫酸销的比例为1 1或1 2.如水分过多则需在60C左右先将试样烘干).装入滤纸筒内，然后将脂肪提取器接好，加入100mL环己烧于90C水浴上回流提取6h-8 h.然后将提取液倒入250mL分液漏斗中，再用6mL-8 mL环己烧淋洗滤纸筒，洗液合并于250mL分液漏斗中，以下按5.1.2自以环己统饱和过的二甲基甲酷胶提取三次起依法操作。5. 1. 4 蔬菜z称取100.0g洗净、晾干的可食部分的蔬菜，切碎放入组织捣碎机内，加150mL丙酣，捣碎
10、2minD在小漏斗上加少许脱脑棉过滤，滤液移人500mL分液漏斗中，残渣用50mL丙嗣分数次洗涤，洗液与滤液合并，加100mL水和100mL环己烧，振摇提取2min，静置分层，环己统层转入另一500 mL分液漏斗中，水层再用100mL环己烧分两次提取，环己统提取液合并于第一个分液漏斗中，再用250mL水，分两次振摇、洗涤，收集环己烧于50C-60C水浴上减压浓缩至25mL.加适量无水硫酸销脱水。5. 1. 5 饮料(如含二氧化碳先在温水浴上加温除去)，吸取50.0mL-100. 0 mL试样于500mL分液漏斗中，加2g氯化销溶解，加50mL环己烧振摇1min，静置分层，水层分于第二个分液漏斗
11、中，再用50 mL环己烧提取一次，合并环己统提取液，每次用100mL水振摇、洗涤两次，收集环己烧于50C-220 GB/T 5009.27-2003 60C水浴上减压浓缩至25mL，加适量元水硫酸锅脱水。5.1.6 糕点类g称取50.0 g60. 0 g磨碎试样，装于滤纸筒内，以下按5.1.1自用70mL环己统湿润试样起依法操作。在5.1.1、5.1. 35. 1. 6各项操作中，均可用石油隧代替环己烧，但需将石油酷提取液蒸发至近干，残渣用25mL环己烧溶解。5.2 净化5.2.1 于层析柱下端填入少许玻璃棉，先装入5cm6 cm的氧化铝，轻轻敲管壁使氧化铝层填实、无空隙，顶面平齐，再同样装入
12、5cm-6 cm的硅镶型吸附剂，上面再装人5cm6 cm无水硫酸锅，用30 mL环己烧淋洗装好的层析柱，待环己烧液面流下至元水硫酸锅层时关闭活塞.5.2.2 将试样环己烧提取液倒入层析柱中，打开活塞，调节流速为每分钟1mL，必要时可用适当方法加压，待环己烧液面下降至无水硫酸纳层时，用30mL苯洗脱，此时应在紫外光灯下观察，以蓝紫色荧光物质完全从氧化铝层洗下为止，如30mL苯不足时，可适当增加苯量.收集苯液于50C60C水浴上减压浓缩至O.1 mLO. 5 mL可根据试样中苯并(a)lt含量而定，应注意不可蒸干。5.3 分离5.3.1 在乙酷化滤纸条上的一端5cm处，用铅笔划一横线为起始线，吸取
13、一定量净化后的浓缩液，点于滤纸条上，用电吹风从纸条背面吹冷风，使溶剂挥散，同时点20L苯并(a)谜的标准使用液。g/mL)，点样时斑点的直径不超过3mm，层析缸(筒)内盛有展开剂，滤纸条下端浸入展开剂约1 cm，待溶剂前沿至约20cm时取出阴干。5.3.2 在365nm或254nm紫外光灯下观察展开后的滤纸条用铅笔划出标准苯并(a)lt及与其同一位置的试样的蓝紫色斑点，剪下此斑点分别放入小比色管中，各加4mL苯加盖，插入50C60C水浴中不时振摇，浸泡15min. 5.4 测定5.4.1 将试样及标准斑点的苯浸出液移人荧光分光光度计的石英杯中，以365nm为激发光波长，以365 nm460 n
14、m波长进行荧光扫描，所得荧光光谱与标准苯并(a)酶的荧光光谱比较定性。5.4.2 与试样分析的同时做试剂空白，包括处理试样所用的全部试剂同样操作，分别读取试样、标准及试剂空白于波长406nm、(406+5)nm、(406-5)nm处的荧光强度，按基线法由式(1)计算所得的数值，为定量计算的荧光强度.FF.俩一(F4Ol+F4lI )/2 . ( 1 ) 5.5 结果计算试样中苯并(a)麓的含量按式(2)进行计算。x S/F X (F, - F2) x 1 OOOJ/(m X V2/V,) .( 2 ) 式中gX 试样中苯并(a)茂的含量，单位为微克每千克(g/kg), S一一苯并(a)花标准斑
15、点的质量，单位为微克(g), F一一标准的斑点浸出液荧光强度，单位为毫米(mm)，F，一一试样斑点浸出液荧光强度，单位为毫米(mm)，F2 试剂空白浸出液荧光强度，单位为毫米(mm)，V , 试样浓缩液体积，单位为毫升(mL), V2-一点、样体积，单位为毫升(mL)，m一一-试样质量，单位为克(g)。计算结果表示到一位小数。5.6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。221 GB/T 5009.27-2003 第二法目测比色法6 原理试样经提取、净化后于乙酷化滤纸上层析分离苯并(a)酶，分离出的苯并(a)蔼斑点，在波长365nm 的紫外灯下观察，与
16、标准斑点进行目测比色概略定量。7 试剂同3.13. 14。8 仪器同4.14. 8 , 9 分析步骤9.1 试样提取按5.1的方法操作。9.2 净化按5.2的方法操作。9.3 测定吸取5、10、15、20或50L试样浓缩液可根据试样中苯并(a)蓝含量而定】及10、20L苯并(a)花标准使用液(0.1g/mL)，点于同一条乙酷化滤纸上，按5.3.1展开，取出阴干。于暗室紫外灯下目测比较，找出相当于标准斑点荧光强度的试样浓缩液体积，如试样含量太高.可稀释后再重点，尽量使试样浓度在两个标准斑点之间。9.4 结果计算试样中苯并(a)蓝的含量按式(3)进行计算。X = (m2 x 1 OOO)/(m, XV2/V,) ( 3 ) 式中.X 试样中苯并(a)茂的含量，单位为微克每千克(g/kg), m一一一试样斑点相当苯并(a)蓝的质量，单位为微克(g), V，一一试样浓缩总体积，单位为毫升(mL)。V, 点样体积，单位为毫升(mL)，m , 试样质量，单位为克(g)。222
